曲古抑菌素干预骨髓间充质干细胞向心肌细胞特化体外实验

目的:在体外以新生大鼠心肌细胞(Cardiomyocytes,CM)与骨髓间充质干细胞((Mesenchymalstemcells,MSCs)共同培养的方式模拟体外心肌微环境,研究间质干细胞在HDAC酶抑制剂曲古抑菌素(TrichostatinA,TSA)干预后乙酰化酶活性与MSCs向心肌细胞特化之间的联系。方法:分离大鼠MSCs将已标记的MSCs与心肌细胞、分别加入不同浓度TSA干预后的MSCs与心肌细胞混合培养。贴壁法分离大鼠MSCs在体外培养纯化后进行细胞标记,培养至第4代。根据实验需要分为3组:阳性对照组,实验组,阴性对照组。用4.6-二乙酰基-2-苯基吲哚(DAPI)和5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brdu)对核进行双标。分别在共培养1周后用免疫荧光染色检测MSCs细胞中的心肌结构功能蛋白:肌球蛋白重链(Myosinheavychain,MHC)、心肌组织缝隙连接的特异性组成蛋白质Connexin43(Cx43)的表达情况。结果:①MSCs与搏动的心肌细胞共培养1周,MSCs开始出现心肌样分化说明建立了心肌微环境;②阳性对照组中,MSCs经TSA干预48h后与心肌细胞混合培养,出现心肌样分化并表达心肌结构功能蛋白表达。③阴性对照组中的部分MSCs可少量表达心肌结构功能蛋白。在共培养的7d,经TSA诱导后经Brdu-DAPI双标MSCs的核,MHC和Cx43荧光显示分化率与阳性对照组的分化率有显著差别。结论:MSCs与经HDAC酶抑制剂干预后的MSCs在心肌微环境中,HDAC酶抑制剂对MSCs向心肌样细胞的特化有促进作用,提示乙酰化酶活性与细胞特化之间的存在联系。

辛伐他汀对大鼠心肌缺血再灌注后细胞凋亡及线粒体融合素2表达的影响

目的:探讨辛伐他汀对大鼠心肌缺血再灌注后细胞凋亡及线粒体融合素2(Mitofusin 2,Mfn2)表达的影响。方法:选取32只Sprague-Dawley(SD)大鼠,随机分为假手术组、缺血再灌注模型组(模型组)、5 mg辛伐他汀组、10 mg辛伐他汀组,每组8只。5 mg辛伐他汀组、10 mg辛伐他汀组分别于术前7 d开始给予5 mg/(kg·d)、10 mg/(kg·d)的辛伐他汀灌胃,假手术组、模型组均给予等量蒸馏水灌胃。采用结扎左前降支法建立大鼠心肌缺血再灌注损伤模型。各组于造模后3 h剪取心脏组织,采用TUNEL法检测心肌细胞凋亡,Western Blot法检测p-Akt的表达,免疫组织化学法检测Mfn2的表达。结果 :与假手术组相比较,模型组心肌细胞凋亡指数、Mfn2的表达明显升高,p-Akt的表达显著降低(均P<0.05);与模型组比较,5 mg辛伐他汀组、10 mg辛伐他汀组心肌细胞凋亡指数、Mfn2的表达显著降低,p-Akt的表达显著升高(均P<0.05),并显示出明显剂量依赖性(P<0.05)。结论:辛伐他汀可有效抑制心肌缺血再灌注损伤后的心肌细胞凋亡,抑制Mfn2表达是其可能作用机制。