建设医学独立实验室的必要性推究

通过调查重庆市3 000个农村社区卫生室的建设情况,提出重庆地区建设医学独立实验室的构想,进一步提高和改善我市农村基层医疗服务水平。利用重庆市2008年农村社区卫生室调查分析结果,结合我国深化医药卫生体制改革的要求和医学独立实验室运行的特点,探讨建立医学独立实验室的必要性。医学独立实验室拥有完善的检验项目、专业的检测技术、健全的配送服务网络和规模化低收费的高效运行机制。医学独立实验室参与农村基层卫生医疗服务网络建设,可极大缓解政府为快速提高农村基层卫生医疗服务水平所需大量人力、物力和财力投入的压力。医学独立实验室建设将促进基层卫生服务水平提高的同时,逐步实现基层卫生服务的均等化。

基于SPOC的翻转课堂教学模式在临床基础检验学技术课程形态学教学中的应用

基于小规模限制性在线课程(small private online course,SPOC)的翻转课堂教学模式结合了线上线下教学的优势,已经广泛应用于医学教育领域。为了进一步提高医学检验专业学生的形态学检验能力,本研究在重庆医科大学2019级四年制医学检验技术专业和卫生检验与检疫专业共211名学生的临床基础检验学技术课程形态学教学中采用该教学模式。本文阐述了该教学模式在临床基础检验学技术课程形态学教学中的设计和实施过程,通过考试成绩和问卷调查评价教学效果。结果显示,2019级医学检验技术专业和卫生检验与检疫专业学生的形态学考试总评成绩分别为(83.22±1.63)分和(76.67±2.48)分,其均值分别比2018级2个专业学生的相关成绩[(76.39±0.69)分,(67.36±1.37)分]高了6.83分和9.31分;在回收有效问卷的198名学生中,190名(96.0%)学生认为该教学模式有助于形态学知识的巩固,143名(72.2%)学生认为其能够针对性地解决形态学学习中的难点,119名(60.1%)学生认为增强了他们的临床实践能力。基于SPOC的翻转课堂教学模式有助于学生对形态学知识的理解和掌握,进而培养了其自主学习能力,使其能够主动解决学习中的难点,增强其对细胞及其他有形成分的辨认能力,提高了该课程形态学的教学效果。

实验诊断学教学改革探讨

以检验的临床应用为目的,结合临床优化教学内容,拓展思路丰富教学方法,联系实际改革实验教学,以更好地促进实验诊断学的教学,培养具有创新精神和开拓能力的临床医学高级人才。

不同检测系统血肾素和醛固酮结果一致性及对临床诊断的影响分析

目的分析不同检测系统血肾素及醛固酮浓度结果一致性及对临床诊断的影响。方法收集患者及健康成年人新鲜血浆标本,制备不同浓度肾素及醛固酮样品,经A、B、C或D检测系统检测,分析检测系统间结果的一致性,部分结果与液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)测定结果再比较分析。健康成年人标本经A和D系统检测,验证其一致性并建立参考区间。结果血肾素和醛固酮浓度在4个系统间的Passing-Bablok分析示Y≠X,相关系数(r)分别为0.901~0.992和0.944~0.976,Bland-Altman分析平均偏差分别为-15.9~0.3μIU/m L和-102.5~104.3 pg/m L,实验室间变异系数分别为1.85%~31.6%和1.98%~28.32%。醛固酮S6~S10与LC-MS/MS结果比较中,r为0.757~0.865,Bland-Altman分析平均偏差为-190.7~-61.3pg/m L。健康成年人结果 Passing-Bablok分析示Y≠X,Bland-Altman分析中95%点均在±1.96s线内。以P2.5~P97.5建立肾素及醛固酮的立位参考区间,A系统为1.95~68.27μIU/m L和28.55~313.75 pg/m L,D系统为3.53~94.82μIU/m L和14.5~311.05pg/m L。结论仅部分检测系统间血肾素及醛固酮浓度结果一致性较好,不同检测系统的结果一致性亟待提高,各实验室应注重建立诊断切点及参考区间。

从颅颌面偏斜浅谈教育中容易被忽略的卫生问题及对策

随着“双减”政策的落实和实施,如果提高学生在全面发展的同时,促进学生的身心健康成长成为重要的研究课题,也是对教育卫生学提出了新的要求。教学卫生学不仅要评价教学活动合理与否,也应该把影响学生身心健康成长的不良习惯破除纳入学科内容。以影响学生颅颌面生长发育的不良习惯为切入点,发现日常教学过程中学生存在的卫生问题,分析不良习惯的原因和后果,提出相关改进策略。从颅颌面问题为抓手,分析问题并提出解决建议,不仅有利于提高学生的身心健康成长,同时抛砖引玉将有利于逐步形成教育卫生教育的新课程体系。将成为切实落实“双减”政策的有力抓手,也是教育卫生学学科内容的扩展。

GP73、AFP-L3、GPC-3和DCP联合检测在低浓度AFP小肝癌诊断中的价值及验证

目的考察血清高尔基体蛋白73(GP73)、甲胎蛋白异质体3(AFP-L3)、磷脂酰基醇蛋白聚糖3(GPC-3)和异常凝血酶原(DCP)联合检测对低浓度甲胎蛋白(AFP)原发性小肝癌的诊断价值。方法收集低浓度AFP小肝癌患者50例,非肝癌的消化系统疾病患者60例及健康对照者40例。用酶联免疫分析定量检测各组人群血清GP73、DCP和GPC-3水平,微量离心柱分离AFP-L3,罗氏电化学发光法测定总AFP和分离洗脱液中AFP-L3浓度,并计算AFP-L3占总AFP的比例。结果各组血清GP73、AFP-L3、GPC-3和DCP水平比较,差异均有统计学意义(P<0.01),肝癌组4种标志物阳性检出率均明显高于其他各组(P<0.01)。单项检测中GP73诊断小肝癌的灵敏度、准确率和曲线下面积最高,分别为72.0%、86.7%和0.826;GPC-3特异性最高,为98.0%。4种标志物联合检测的灵敏度、特异性、准确率和曲线下面积分别为78.0%、94.0%、88.7%和0.867。结论单独检测GP73和AFP-L3对低浓度AFP小肝癌的诊断价值较高,多种标志物联合检测可提高诊断价值,用于低浓度AFP小肝癌的辅助诊断。

KDM4A通过下调BMP9促进乳腺癌细胞MDA-MB-231的迁移和侵袭

背景与目的:外源性骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic protein 9,BMP9)能抑制人乳腺癌的恶性进展,但其在乳腺癌中常异常低表达。本研究拟探索表观遗传修饰的组蛋白赖氨酸特异性去甲基化酶4A(lysine specific demethylase 4A,KDM4A)在乳腺癌中的表达及作用,探究KDM4A与BMP9之间的关系及其可能的调节机制。方法:通过生物信息学方法分析KDM4A在乳腺癌中的表达及其与BMP9之间的关系,采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)进行验证;采用染色质免疫沉淀(chromatin immunoprecipitation,ChIP)验证KDM4A对BMP9的调控作用,采用RNA稳定性实验及CHX蛋白稳定性实验验证KDM4A对BMP9表达的影响。采用RNA干扰技术及敲低BMP9的腺病毒构建转染KDM4A小干扰RNA(siKDM4A)或感染siBMP9腺病毒(Ad-siBMP9)的外源性重组MDA-MB-231细胞,采用划痕愈合实验、transwell实验分别检测细胞迁移及侵袭能力。结果:生物信息学分析结果表明,KDM4A在乳腺癌中的表达明显高于正常组织,KDM4A与BMP9在乳腺癌中的表达呈负相关关系。RTFQ-PCR及Western blot结果显示,KDM4A在不同乳腺癌细胞系中均高表达,敲低KDM4A可显著上调BMP9。ChIP实验证实,KDM4A可显著富集于BMP9基因启动子区域,降低其组蛋白赖氨酸36号位而不是4号位甲基化水平,从而沉默BMP9表达。RNA稳定性实验及CHX蛋白稳定性实验证实,KDM4A对BMP9的mRNA表达无明显影响,但可影响其蛋白降解。敲低KDM4A后,乳腺癌细胞MDA-MB-231的迁移及侵袭能力均受到明显抑制,而这种作用可被敲低BMP9所部分逆转。结论:KDM4A在乳腺癌组织及乳腺癌细胞MDA-MB-231中高表达,并可通过下调BMP9基因启动子区域组蛋白甲基化水平沉默其表达,以及在蛋白水平而不是mRNA水平影响BMP9稳定性,促进乳腺癌的迁移和侵袭。

血浆凝血与纤溶标志物对急性白血病合并DIC患者早期诊断及预后的评估价值

目的:探讨血浆凝血酶-抗凝血酶复合物(TAT)、纤溶酶-抗纤溶酶复合物(PIC)、血栓调节蛋白(TM)及组织型纤溶酶原激活物-纤溶酶原激活物抑制剂-1复合物(t-PAIC)检测对急性白血病(AL)合并弥散性血管内凝血(DIC)的早期诊断及预后评估的价值。方法:62例AL合并DIC疑似患者,根据国际血栓与止血学会(ISTH)积分诊断标准,分为显性DIC组(n=20)、DIC前期组(n=11)及非显性DIC组(n=31),比较入院当日3组患者的血浆凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、纤维蛋白原(Fib)、D二聚体(D-D)及TAT、PIC、TM、t-PAIC水平;按照患者28 d内生存情况再将患者分为生存组(n=47)与死亡组(n=15),比较入院当日2组患者的血浆TAT、PIC、TM及t-PAIC水平;采用受试者工作特征(ROC)曲线下面积(AUC)评价TAT、PIC、TM及t-PAIC指标单独、或联合检测对AL合并DIC的诊断效能。结果:显性DIC组与DIC前期组患者入院当日血浆TAT、PIC、TM、t-PAIC水平高于非显性DIC组(P<0.05),显性DIC组患者血浆TAT、PIC、TM及tPAIC水平与DIC前期组比较,差异无统计学意义(P>0.05);死亡组患者血浆TAT、PIC、TM及t-PAIC水平高于生存组(P<0.05);ROC曲线分析结果显示,血浆TAT、TM、PIC及t-PAIC联合检测应用于AL合并DIC疑似患者,可获得更大的诊断效能(AUC=0.921)。结论:血浆TAT、PIC、TM及t-PAIC联合检测对AL合并DIC的早期诊断与预后评估具有较高的价值。

凝血与纤溶标志物联合检测对早期诊断重症感染引发弥散性血管内凝血的价值

目的:探讨凝血酶-抗凝血酶复合物(TAT)、纤溶酶-α2抗纤溶酶复合物(PIC)、血栓调节蛋白(TM)、组织型纤溶酶原激活物-纤溶酶原激活物抑制剂-1复合物(t-PAIC)4项凝血与纤溶标志物对重症感染引发弥散性血管内凝血(DIC)的早期诊断价值。方法:选取重症感染引发的DIC疑似患者86例,根据国际血栓与止血学会(ISTH)积分诊断标准,将患者分成显性DIC组(n=29)、DIC前期组(n=15)、非显性DIC组(n=42),比较3组患者入住ICU当日的血浆TAT、PIC、TM、t-PAIC水平及常规凝血指标[血小板(PLT)、凝血酶原时间(PT)、纤维蛋白原(Fib)、D二聚体(D-dimer,D-D)、纤维蛋白原降解产物(FDP)],采用受试者工作特征(ROC)曲线下面积(AUC)评价TAT、PIC、TM、t-PAIC单项或联合检测对重症感染引发DIC的早期诊断价值。结果:显性DIC组、DIC前期组患者的血浆TAT、TM、t-PAIC的水平高于非显性DIC组、差异有统计学意义(P<0.05),显性DIC组与DIC前期组比较、差异无统计学意义(P>0.05);3组患者血浆PIC水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);ROC分析结果显示,TAT、TM、t-PAIC联合检测早期诊断重症感染引发DIC的价值也比单项检测高。结论:TAT、TM及t-PAIC联合检测对早期诊断重症感染引发DIC的具有较高的价值。

SNHG3介导的自噬促进乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的探讨LncRNA SNHG3调控自噬对人乳腺癌细胞MCF-7增殖、迁移、侵袭及EMT的影响。方法使用生物信息学方法及实时荧光定量PCR(RT-qPCR)分析SNHG3在乳腺癌及乳腺癌细胞MCF-7中的表达;采用RNAi技术构建敲低SNHG3(siSNHG3)及对照(siNC)的MCF-7重组细胞株,Western blot及细胞免疫荧光检测自噬标志;使用自噬体-溶酶体融合抑制剂BafA1或早期自噬体形成抑制剂3-MA处理敲低或不敲低SNHG3的MCF-7细胞,Western blot检测LC3-Ⅱ或p62表达,观察对自噬囊泡形成或自噬降解的影响;克隆形成实验、CCK-8实验、划痕愈合实验及Transwell实验检测siSNHG3联合或不联合BafA1或3-MA对MCF-7细胞增殖、横向迁移、纵向迁移及侵袭的影响,Western blot检测其对MCF-7细胞EMT的影响。结果生物信息学分析及RT-qPCR证实,SNHG3在乳腺癌及乳腺癌细胞MCF-7中高表达;Western blot及细胞免疫荧光证实,敲低SNHG3可激活乳腺癌的自噬;克隆形成、CCK-8、划痕愈合及Transwell实验证实,下调SNHG3表达可通过激活自噬抑制肿瘤的增殖、迁移和侵袭;Western blot证实,SNHG3通过负调控自噬促进乳腺癌的EMT进程。结论SNHG3在乳腺癌中异常高表达并负调控自噬,并可通过负调控自噬增强乳腺癌细胞的增殖、迁移、侵袭和EMT过程,提示SNHG3是乳腺癌诊断和治疗的潜在靶点。

四肽重复结构域36(TTC36)通过增强IκBα的表达抑制NF-κB信号通路的激活抑制HK2人肾小管上皮细胞的炎症反应

目的研究四肽重复结构域(TTC36)对HK2人肾小管上皮细胞损伤的影响及潜在的机制。方法采用慢病毒感染法建立过表达TTC36的HK2稳转细胞系,转入空载质粒CMV-Flag作为对照。实时荧光定量PCR检测HK2细胞肿瘤坏死因子α(TNF-α)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、白细胞介素6(IL-6)、CC趋化因子配体2(CCL2)、IL-1β以及核因子κB抑制物α(IκBα)、核因子κB p65(NF-κB p65)的mRNA水平。流式细胞术检测细胞凋亡,CCK-8法检测细胞增殖。Western blot法检测iNOS、TNF-α、胱天蛋白酶3(caspase-3)、裂解型胱天蛋白酶3(c-caspase-3)、Bcl2相关X蛋白(BAX)、增殖细胞核抗原(PCNA)、闭锁小带1(ZO-1)、核因子κB(NF-κB)信号通路中IκBα、NF-κB p65、磷酸化的NF-κB p65(p-NF-κB p65)的蛋白表达。放线菌酮(CHX)、蛋白酶体抑制剂MG132处理细胞后,Western blot法检测IκBα的蛋白表达量。结果与对照组相比,HK2细胞过表达TTC36后,炎症介质表达减少;细胞凋亡率降低以及c-caspase-3、BAX表达减弱;细胞增殖加快,PCNA和ZO-1的表达增强;IκBα表达上调,NF-κB p65、p-NF-κB p65表达下调,胞质和胞核中的NF-κB p65表达量均减少。CHX处理后过表达TTC36延长IκBα的半衰期,而MG132可恢复过表达TTC36带来的IκBα的变化。结论过表达TTC36抑制HK2细胞的炎症反应,减少细胞凋亡,促进增殖,加强紧密连接,其机制可能是通过增强IκBα的表达抑制NF-κB信号通路的激活从而减轻炎症反应带来的细胞损伤。

探索“雏鹰计划”在培养青少年医学科普素质中的应用价值

"雏鹰计划"是由重庆市教委主管,依靠高校与普通高中对接合作,探索对高中生进行科学、科普素质培养的基础教育改革创新项目。本文以医学科普教育为案例,阐述项目进程中高中学员经历的生物安全通识培训、红细胞血型鉴定操作、无偿献血意识培养以及互动交流的效果和意义。

血清胆汁酸代谢轮廓分析用于妊娠期肝内胆汁淤积症的早期诊断

目的:探讨血清胆汁酸代谢轮廓分析在妊娠期肝内胆汁淤积症(intrahepatic cholestasis of pregnancy,ICP)的早期诊断中的应用价值。方法:应用超高效液相色谱-三重四级杆-飞行时间质谱法对50例健康孕妇、51例ICP孕妇、14例早期ICP孕妇和21例妊娠肝功能紊乱孕妇血清中的27种已知胆汁酸和29种鉴定胆汁酸进行检测。采用偏最小二乘判别分析建立ICP的诊断模型,应用受试者工作特征曲线和Logistic回归筛选成分胆汁酸作为ICP早期诊断标志物。结果:与正常孕妇比,早期ICP孕妇的牛磺胆酸(taurocholic acid,TCA)、甘氨胆酸(glycolcholic acid,GCA)、甘氨结合型三羟基胆汁酸-3(Gtri-3)、甘氨结合型三羟基胆汁酸-5(Gtri-5)等多种血清成分胆汁酸明显升高(P<0.05),而妊娠肝功能紊乱孕妇未见明显改变(P> 0.05)。ICP诊断模型对早期ICP的预测灵敏度为85.7%,特异性为95.2%。鉴定的胆汁酸Gtri-3和牛磺结合型三羟基胆汁酸-2作为联合标志物,对ICP的早期诊断具有较高效能,灵敏度为92.9%,特异性为90.5%。结论:血清胆汁酸代谢轮廓分析是一种较特异、灵敏的ICP早期诊断方法。

结直肠癌患者外周血MDSCs与S100A9水平及其临床意义探讨

目的:检测结直肠癌(colorectal cancer,CRC)患者外周血中髓源性抑制细胞(myeloid-derived suppressor cells,MDSCs)含量及血清S100A9蛋白的水平,分析两者之间的相关性,探讨其在临床诊疗中的潜在应用价值。方法:收集82例临床外周血样本及相关电子病例,其中CRC患者52例,健康者30例。采用流式检测外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中MDSCs的频数,双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清S100A9水平,用SPSS及Graphpad Prism进行MannWhitney检验分析,Spearmanr分析和ROC曲线分析。结果:CRC患者外周血MDSCs以及血清S100A9水平均明显高于健康对照组(P<0.01),且血清S100A9蛋白水平和外周血中MDSCs的频数两者之间存在正相关(r=0.38,P=0.01);同时相比于Dukes分期中的A/B期和未发生转移的患者,处于C/D期和伴淋巴结转移2组患者血清中的S100A9水平及MDSCs频数明显升高,并具有统计学意义(P<0.01);并且两者的ROC曲线下面积AUC>0.7(P<0.01),说明两者对诊断CRC以及评估CRC患者分期情况和是否发生转移均具有较好的诊断价值。结论:CRC患者外周血PBMC中MDSCs的频数与血清S100A9蛋白均明显升高;两者均有望成为CRC分期和淋巴结转移的标志物。

医学检验专业本科生创新能力培养体系的构建与实践

为培养具有创新能力的复合型检验医学人才，构建了包含调整教学计划、改革教学方法、建立多元化实习基地、实施“雏鹰”计划和与国际接轨等内容的医学检验专业本科人才创新能力培养体系，经过实施，取得显著成效。

吲哚美辛对K562细胞株BCR/ABL-Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的探讨吲哚美辛对K562细胞增殖的影响及其分子机制。方法采用不同浓度的吲哚美辛作用于K562细胞,MTT法检测其对细胞增殖的影响,克隆形成实验检测吲哚美辛对K562细胞克隆形成能力的影响。RT-PCR分别检测bcr-abl、β-catenin的mRNA表达变化,Western blot分别检测p BCR/ABL、总BCR/ABL、β-catenin、p GSK-3β、c-myc的蛋白表达变化。结果 100、200、400μmol/L吲哚美辛作用细胞48 h后,以浓度依赖性方式抑制K562细胞的增殖和克隆形成能力。3种浓度的吲哚美辛处理K562细胞后,p BCR/ABL、总BCR/ABL的蛋白表达依次减少,而bcr-abl mRNA水平没有明显变化。β-catenin mRNA和蛋白水平依次减少;p GSK-3β、c-myc的蛋白水平均明显降低。结论吲哚美辛可通过抑制BCR/ABL-Wnt/β-catenin信号通路的活性,从而抑制白血病K562细胞的增殖和克隆形成能力。

S100A6通过PI3K/Akt信号通路促进人骨肉瘤细胞143B增殖和迁移

目的：研究PI3K/Akt信号通路在S100A6介导的人骨肉瘤细胞143B的增殖和迁移中的作用.方法：首先制备重组的人S100A6蛋白（recombinant human S100A6,rhS100A6）;rhS100A6与PI3K抑制剂（LY294002和wortmannin）单独或同时处理143B细胞,其中rhS100A6的终浓度为30 mg/L,LY294002和wortmannin的终浓度分别为10 μmol/L和0.5 μmol/L;采用Western blotting分析143B细胞中PI3K/Akt信号通路相关分子总Akt（total Akt,t-Akt）及磷酸化Akt（phosphorylation of Akt,p-Akt）蛋白的表达变化,MTT检测细胞增殖,Transwell检测细胞迁移.结果：（1）成功制备rhS100A6蛋白,rhS100A6显著增强143B细胞的增殖和迁移能力（P〈0.05）;（2）rhS100A6上调143B细胞中Akt的磷酸化;（3）与rhS100A6组相比,rhS100A6与LY294002或wortmannin联合处理组143B细胞的p-Akt减少（P〈0.05）,细胞的增殖和迁移能力降低,在不同时点细胞的增殖率下降10.3%～69.7%,细胞迁移率下降37.9%～41.6%,差异均有统计学意义（P〈0.05）.结论：S100A6促进人骨肉瘤细胞143B增殖和迁移的作用至少部分是通过激活PI3K/Akt信号通路实现的.

肺炎链球菌热休克蛋白40通过p38MAPK和JNK通路诱导小鼠巨噬细胞免疫应答

目的探讨肺炎链球菌热休克蛋白40(HSP40)引起小鼠巨噬细胞免疫应答的机制。方法表达、纯化重组HSP40蛋白(r HSP40),去除其中的脂多糖(LPS)。r HSP40处理C57BL/6野生小鼠骨髓来源巨噬细胞(BMDM)后,反转录PCR检测BMDM中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、IL-1β、IL-23p19、IL-12p40、IL-12p35、IL-10的mRNA水平,ELISA检测TNF-α、IL-6、IL-12p40水平;r HSP40刺激后,ELISA检测野生型、Toll样受体2(TLR2)和TLR4缺陷的BMDM中TNF-α和IL-6的表达水平;丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)抑制剂预处理BMDM后,ELISA检测其对r HSP40诱导TNF-α和IL-6水平的影响;Western blot法检测p38MAPK和c-Jun氨基末端激酶(JNK)磷酸化水平。结果获得纯度90%以上的r HSP40;r HSP40可显著增强p38MAPK、JNK的磷酸化水平和TNF-α、IL-6的表达;p38MAPK和JNK抑制剂可显著抑制TNF-α和IL-6的表达;与野生BMDM相比较,TLR4缺陷的BMDM表达TNF-α和IL-6显著降低。结论 HSP40诱导小鼠巨噬细胞产生免疫应答受JNK及p38MAPK信号通路调控,并且此过程依赖TLR4。

AKT抑制剂对慢粒急变期K562细胞中Wnt/β-catenin信号通路的影响及其效应观察

目的探讨PI3K-AKT信号通路靶向抑制剂AKTiⅣ对慢性粒细胞白血病(CML)急变期细胞K562的影响及其对Wnt/β-catenin信号通路的调控作用。方法取处于对数生长期的K562细胞,分别加入0、2.5、5、10μmol/L的AKTiⅣ进行处理,采用MTT法检测其对细胞增殖的影响,甲基纤维素克隆形成实验检测细胞的克隆形成能力,Western blotting检测K562细胞中p AKT(Thr308)、p GSK-3β(Ser9)蛋白表达情况,荧光定量PCR和Western blotting检测β-catenin及其下游靶基因c-myc、cyclin D1 m RNA和蛋白表达情况。结果 AKTiⅣ作用6、10、16h后,K562细胞的增殖能力以及克隆形成能力明显受抑,且作用10h时抑制效果最好。2.5、5、10μmol/L AKTiⅣ处理K562细胞10h后,PI3KAKT通路明显受到抑制,p AKT(Thr308)蛋白表达依次减少。5μmol/L AKTiⅣ作用K562细胞10h后,p GSK-3β(Ser9)及β-catenin蛋白表达明显减少,而β-catenin m RNA表达水平无明显改变。5μmol/L AKTiⅣ作用K562细胞10h后,β-catenin下游靶基因c-myc、cyclin D1的m RNA和蛋白表达水平均明显降低。结论 AKTiⅣ可抑制慢粒急变期K562细胞的增殖和克隆形成能力,其机制可能是通过抑制Wnt/β-catenin信号通路阻断细胞的生长信号转导。

柱前衍生高效液相色谱-荧光检测法测定血浆中同型半胱氨酸

建立了一种柱前衍生高效液相色谱-荧光检测法用于测定血浆中同型半胱氨酸(Hcy)。使用三(2-羧乙基)膦盐酸盐(TCEP)为还原剂,N-(1-芘)马来酰亚胺(NPM)为衍生剂进行样品预处理,Agilent Hypersil C-18柱(250mm×4.0 mm,5μm)进行分离,流动相为15 mmo l/L醋酸钠-乙腈-混合酸(300 mL水中含1 mL醋酸和1 mL磷酸)混合溶液,采用梯度洗脱,荧光检测激发波长为330 nm,发射波长为380 nm。Hcy的回收率为(102.08±4.94)%。线性范围为0.500～100μmo l/L,检出限(以信噪比为3计)为0.016μmo l/L。日内与日间相对标准偏差均小于5%。利用该方法对7例高血压患者和7例健康志愿者的血浆进行了测定,结果表明两组间的Hcy含量存在显著的差异(p<0.05)。本方法简单、快速、灵敏、特异,适用于血浆Hcy的临床定量测定。