造血生长因子受体的信号传导与血液系统恶性疾病

造血生长因子 (hematopoieticgrowthfactor,HGF)属细胞因子类 ,是一类具有广泛生物学活性的可溶性多肽 ,对血细胞的生长、增殖、分化具有调控作用 ,它与其受体结合后可通过作用于多种信号转导途径并激活转录因子 ,从而达到调节细胞生长、分化的作用。造血生长因子受体及信号传导一直是当前研究的热点问题。大多数的造血生长因子是通过JAKs STATs和Ras途径进行信号传导 ,表现相应的生理功能。目前发现上述途径的异常活化与多种血液系统恶性肿瘤的发生有密切关系。

白血病患者循环DNA定量和完整性分析及其临床意义

目的分析白血病患者血浆DNA的含量及完整性,并探讨其临床意义。方法以2008年6月-2009年3月收治的60例白血病患者作为实验组,同期在门诊行体检的健康正常人20例、血液系统良性病变者20例、淋巴瘤患者10例、实体肿瘤患者20例(食管癌6例、原发性肝癌4例、鼻咽癌5例、乳腺癌5例)作为对照组(n=70)。测定两组患者的血浆DNA含量,比较两组间、不同FAB分型的急性髓细胞白血病患者间、实验组不同年龄段及不同病程患者间血浆DNA水平的差异。采用聚合酶链反应扩增β-actin大片段和小片段产物并行琼脂糖凝胶电泳观察,比较实验组患者与对照组中正常人血浆DNA的差异。结果实验组患者血浆DNA浓度(413.2±118.4μg/L)约为对照组中正常人(19.6±7.9μg/L)的21倍(P<0.05),且高于对照组的其他疾病患者(P<0.05)。实验组血浆DNA浓度与年龄及疾病病程有关,不同FAB型别的急性髓细胞白血病患者血浆DNA含量无显著差异。实验组血浆DNA电泳呈现大小不一的片段,而且其血浆DNA中可扩增出β-actin的大、小片段产物,完整性较高。正常人仅可见少量小片段DNA。结论白血病患者血浆DNA含量和完整性明显增高,对白血病的诊断及预后判断具有重要价值。

慢性粒细胞白血病细胞中Skp2的表达及其临床意义

目的 研究慢性粒细胞白血病 (CML)细胞中S期激酶相关蛋白 2 (Skp2 )的表达及其与p2 7的关系。方法 用免疫细胞化学染色和逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)分别检测CML细胞中Skp2和p2 7蛋白水平及转录水平的表达。结果 免疫细胞化学染色显示 ,CML细胞Skp2蛋白表达增高 (14 .3%± 2 .9% ) ,与正常对照 (8.6 %± 0 .9% )相比有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;CML细胞中Skp2蛋白和p2 7蛋白呈负相关 (r=- 0 .75 ,P =0 .0 0 1)。但RT PCR结果显示 ,Skp2蛋白过度表达的CML细胞中p2 7mRNA未见明显变化。结论 Skp2在调控p2 7蛋白表达过程中起重要作用 。

急性髓系白血病核仁磷酸蛋白基因及其突变检测方法的建立

本研究建立PCR技术检测白血病细胞核仁磷酸蛋白(nucleophosm in,NPM)基因及突变的方法。以白血病细胞系和白血病临床标本为研究对象,首先采用RT-PCR检测NPM mRNA表达水平,其次应用PCR方法检测NPM第12外显子,并对扩增产物进行测序分析,最后以插入NPM A型突变cDNA的质粒作为阳性模板,建立PCR检测NPM突变的方法并进行方法学评价,并采用此方法直接检测白血病细胞中是否存在NPM基因突变。结果表明:白血病细胞系NPM mRNA表达水平较正常单个核细胞对照组高,23例急性髓系白血病标本均不同程度地高表达NPM mRNA;采用PCR扩增联合测序分析发现,髓系白血病细胞系(THP1和K562)NPM基因组第12外显子无突变,但K562细胞NPM基因3′非编码区存在1个T碱基缺失;建立直接针对NPM A型突变cDNA的PCR方法,能特异扩增NPM A型突变基因;该方法重复性好,批内、批间变异系数分别为1.6%和3.1%,灵敏度为100pg cDNA;采用此方法从23例白血病临床标本中检出2例NPM突变阳性。结论:建立了检测NPM mRNA水平和A型突变的实验方法,发现白血病细胞高表达NPM mRNA水平,部分白血病患者NPM基因发生A型突变。

核磷蛋白A型突变体对髓性白血病细胞系增殖的影响

目的研究核磷蛋白A型突变体基因转染对人髓性白血病细胞系体外增殖的影响。方法构建含核磷蛋白A型突变基因(NPM-mA)的真核表达质粒pEGFPC1-NPM-mA,选择NPM-mA阴性、抑癌基因p14ARF有无缺失的两株人髓性白血病细胞KG-1a和K562作为靶细胞,将pEGFPC1-NPM-mA重组质粒和pEGFPC1空质粒分别转染白血病细胞,以未转染组为对照。用RT-PCR和免疫组化来分析转染细胞目的基因mRNA和蛋白质的表达。采用台盼蓝拒染法计数活细胞,绘制转染前后生长曲线,观察细胞体外生长的改变。结果转染后的两种白血病细胞株表达NPM-mA mRNA,胞浆内NPM-mA蛋白阳性,符合NPM突变蛋白胞质移位的特点。细胞生长曲线显示,转染NPM-mA质粒的KG-1a细胞较空质粒转染和未转染组细胞生长速度明显加快,而转染NPM-mA质粒的K562细胞则较对照组细胞生长明显受抑制(P<0.05)。结论NPM-mA基因稳定转染可影响白血病细胞的增殖活性,在无ARF缺失时NPM-mA突变体可促进白血病细胞体外生长。

核仁磷酸蛋白突变与血液肿瘤

核仁磷酸蛋白(NPM)是一类穿梭于核仁、核质和胞质的蛋白质。最近在核型正常的急性髓系白血病和少数骨髓增生异常综合征中发现有NPM基因突变及其蛋白的胞浆移位,突变的NPM可能通过下调肿瘤抑制因子Arf启动p53活性和诱导细胞周期停止而促进细胞恶性增殖。临床研究提示,NPM突变与急性髓系白血病患者的预后相关,并且可作为微量残留白血病的监测指标。这些发现提示NPM突变可能在髓系白血病的发生中具有重要作用。本文就NPM突变在血液肿瘤中的研究进展做一综述。

HC-NPs对RAW264.7-4T1共培养体系中乳腺癌细胞增殖及凋亡的影响

目的:探索联氨基姜黄素纳米脂质体(hydrazinocurcumin-loaded nanopaticles,HC-NPs)通过抑制STAT3(signal trannsduction and activators oftranscription-3)活化,对RAW264.7-4T1共培养体系中4T1细胞增殖及凋亡的影响。方法:以乳腺癌细胞—巨噬细胞共培养体系中的乳腺癌细胞4T1为研究对象,分PBS对照组和10%NPs对照组、10%HC-NPs处理组采用检测细胞形态学变化,台盼蓝染色计数细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期变化,Western blot检测STAT3、p-STAT3、c-MYC、Bcl-2及Bax的蛋白表达水平。结果:刘氏染色发现经10%HC-NPs处理后,4T1细胞形态变圆,台盼蓝染色计数显示细胞存活率减低,且与对照组有显著性差异(P<0.05);流式细胞仪检测发现HC-NPs处理组细胞凋亡率为(24.21±2.37)%,细胞周期结果显示HC-NPs组处理的细胞主要阻滞在G_2/M期为(63.70±2.53)%,与对照组有显著性差异(P<0.05);Western blot检测显示,HC-NPs组4T1细胞的p-STAT3、c-MYC表达明显减少,Bcl-2/Bax比值下降,而总STAT3水平无明显变化。结论:HC-NP_s能通过抑制STAT3活化(p-STAF3),影响细胞增殖、凋亡相关基因,抑制共培养体系中乳腺癌细胞4T1的增殖,促进其凋亡。

Hck和Lyn激酶与慢性髓细胞性白血病的关系

Src家族激酶(Src-familykinase,SFK)是一组非受体型酪氨酸蛋白激酶,其家族成员Hck(hemopoieticcellkinase)和Lyn(v-yes-1Yanaguchisarcomaviralrelatedoncogenehomolog)激酶在慢性髓细胞性白血病(chronicmyelogenousleukemia,CML)细胞中被BCR-ABL异常激活,并作用于多种细胞内信号转导分子,影响细胞的增殖、凋亡和迁移。深入研究SFK在CML发生和发展中的作用,对进一步认识CML发病机制及其靶向性治疗有着重要的实际意义。

检验技术服务于社会 经济效益促进学科发展

我们利用本科室在出凝血检验方面的优势，在临床检验中心的统一指导管理下，率先于1989年在全系第一个对临床、对社会开展了“血小板功能配套试验”，“抗凝血因子蛋白C”，“红细胞免疫功能测定”等检验项目，推广了“检测血小板表面相关IgG试剂盒”。这些项目服务于社会，不仅获得了较好的社会效益，也获得了较好的经济效监。我们将获得的经济效益用于改善办学条件，提高了教师的待遇，促进了学科的发展。

联氨基姜黄素抑制STAT3信号通路对乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭迁移性的影响

目的探讨姜黄素衍生物——联氨基姜黄素(hydrazinocurcumin,HC)通过抑制STAT3(signal transduction and activators of transcription-3)信号通路对乳腺癌细胞MDA-MB-231侵袭迁移性的影响。方法以人乳腺癌细胞株MDA-MB-231为研究对象,分DMSO对照组和HC处理组。采用MTT法检测HC对MDA-MB-231乳腺癌细胞的生长抑制作用,刘氏染色检测细胞形态学改变,Transwell小室检测细胞侵袭能力,细胞划痕试验检测细胞迁移能力,Western blot检测STAT3、p-STAT3、MMP-9及MMP-2的蛋白表达水平。结果 MTT检测显示,HC处理的细胞生长受到抑制,其抑制率呈时间-剂量依赖关系;刘氏染色发现处理细胞形态发生改变,细胞变圆;Transwell小室检测显示对照组穿膜细胞数为(598.00±21.28)/视野,而10、20μmol/LHC处理后透膜细胞数分别为(94.00±6.56)/视野和(4.00±1.00)/视野,穿膜细胞数显著低于对照组(P<0.05);划痕试验表明对照组划痕闭合率约为54%,而10、20μmol/LHC处理组基本无闭合(P<0.05);Westernblot检测显示,不同浓度HC处理MDA-MB-231细胞后,p-STAT3明显降低,而总STAT3水平无明显差异,MMP-9、MMP-2的表达也有减少。结论 HC可以通过抑制STAT3的活化(即p-STAT3),降低MMP-9、MMP-2的蛋白表达水平,从而抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231的侵袭迁移性。

抗白血病中药及天然药物的研究现状

抗白血病中药及天然药物的研究现状陈婷梅，祝彼得迄今用于白血病临床的化疗药物包括烷化基、抗代谢药、抗生素及激素和杂类等，这些药物副作用较强，且对起重要防御作用的淋巴细胞、骨髓造血细胞的破坏较大，使机体对癌、感染失去抵抗力，临床上白血病患者死于肺炎、败血...

血管内皮生长因子及其Flt-1受体在白血病细胞中的表达

目的 探讨人白血病细胞系血管内皮生长因子 (VEGF)及其Flt 1受体的表达 ,进一步阐明VEGF在白血病细胞异常增殖中的作用机制。方法 以人脐静脉血管内皮细胞系ECV3 0 4作为对照 ,采用RT PCR半定量技术和免疫组化检测体外培养的人白血病细胞系K5 62和HL 60中VEGF及Flt 1的表达。采用MTT试验观察VEGF反义寡核苷酸 (VEGF AS)对白血病细胞体外增殖的影响。结果 K5 62和HL 60细胞同时表达VEGF和Flt 1mRNA和蛋白。VEGF AS能够抑制白血病细胞体外增殖。结论 在白血病细胞异常增殖中自分泌VEGF可能起着重要作用。

靶向阻断STAT5对白血病K562细胞周期的影响

目的通过应用诱骗寡核苷酸(Decoy ODNs)抑制信号转导因子和转录激活因子5(signal transducers and ac-tivators of transcription5,STAT5)信号转导途径,观察对白血病K562细胞细胞周期的影响,初步探讨其中的分子机制。方法体外设计合成STAT5Decoy ODNs,在脂质体的介导下转染K562细胞,FCM检测细胞周期,用RT-PCR和Western blot方法检测STAT5下游基因细胞周期素D1(cyclin D1)和c-myc的表达。结果Decoy ODNs作用K562细胞24h后的细胞周期显示,S期细胞由(48.71±5.42)%减低为(31.94±2.35)%,G0/G1期细胞由(40.83±5.20)%增加为(61.39±2.18)%;而错配寡核苷酸(mutant ODNs)对细胞周期没有明显影响。RT-PCR实验和Western blot实验证实Decoy ODNs作用引起STAT5下游基因cyclin D1和c-myc mRNA和蛋白表达下调。结论STAT5Decoy ODNs能抑制细胞G1/S转换而影响细胞周期进程,其作用机制可能与Decoy ODNs下调STAT5下游cyclin D1和c-myc基因的表达有关。

STAT5诱骗寡核苷酸诱导白血病K562细胞凋亡的研究

目的STAT5信号转导途径在慢性粒细胞白血病的发病中有十分重要作用,本研究应用诱骗寡核苷酸抑制STAT5信号转导途径,诱导白血病K562细胞凋亡,并初步探讨其中的分子机制。方法体外设计合成的STAT5诱骗寡核苷酸,在脂质体的介导下转染K562细胞,以Annexin-V/PI双染实验和电镜检查细胞凋亡,用RT-PCR和Westernblot方法检测STAT5下游基因bcl-xL、c-myc的表达。结果Annexin-V/PI双染实验检测诱骗寡核苷酸作用24h后,早期凋亡细胞即有14.57%±1.08%;电镜检查观察到诱骗寡核苷酸作用引起细胞凋亡的超微结构形态学改变;RT-PCR实验和Westernblot实验证实诱骗寡核苷酸作用引起STAT5下游基因bcl-xL和c-mycmRNA和蛋白表达下调。结论STAT5诱骗寡核苷酸能诱导白血病K562细胞凋亡,其作用机制可能与诱骗寡核苷酸下调STAT5下游凋亡相关基因的表达相关。

“临床输血检验”课程形成性评价方法初探

目的在新开课程“临床输血检验”教学中，以培养学生创新精神和自主终身学习能力为目的。方法采用问题情境创设——引导探索、协作交流——形成性考核评价教学模式，从课程考试改革入手，采用形成性评价方法对学生学习效果进行综合评定。结果新教学模式充分调动学生学习的积极性、主动性和创造性，取得了满意的教学效果。

血浆纤维结合蛋白的免疫散射比浊测定法

血浆纤维结合蛋白(Fibronectin Fn)含量测定在其方法上国内已有单向免疫扩散法、火箭免疫电泳法,和酶联免疫吸附试验法.由于前两种方法的敏感性较差不适用于Fn含量较低的样品,虽然酶联免疫吸附试验敏感性较高.但由于需血浆量较多、费时、操作复杂等缺点,故我们采用免疫散射比浊法进行测定.该法利用测定溶液中悬浮质点的散射光强度的原理,因此与荧光比色法有相似之处。

白血病干细胞的生物学特性

白血病干细胞是第一个被确认的肿瘤干细胞,在白血病的形成和病情的发展中具有重要作用。深入研究其生物学特性将为白血病的发病机制以及干细胞靶向治疗奠定理论基础。该文介绍白血病干细胞的免疫表型、自我更新机制、生存优势及多重耐药等。

慢性粒细胞白血病来源的DC细胞体外诱导高效而特异的抗肿瘤免疫

目的：选用慢粒患者的原代血细胞，经细胞因子组合联合诱导，生成携带白血病抗原信息的树突状细胞（Ｄｅｎｄｒｉ－ｔｉｃ Ｃｅｌｌ ， ＤＣ），为ＤＣ疗法在临床上的应用提供理论依据。方法：慢粒（急变期）病人的ＰＢＭＣ用ＧＭ－ＣＳＦ＋ＩＬ－４＋ＴＮＦα诱导后进行形态和细胞表型的鉴定。应用同种混合淋巴细胞反应和细胞毒性实验，观察诱生之ＤＣ刺激淋巴细胞增殖的能力以及介导抗白血病特异性细胞毒性反应的能力。利用酶联免疫吸附实验检测ＤＣ产生ＩＬ－１２及协助产生ＩＦＮ－γ的能力。结果： 诱生ＤＣ均具有ＤＣ的形态特征和超微结构。表达ＤＣ相关表面分化抗原。并可刺激Ｔ淋巴细胞产生较强的增殖效应。诱导出针对自身肿瘤靶细胞的特异性ＣＴＬ反应。同时可不同程度的分泌ＩＬ－１２和可协助Ｔ细胞产生ＩＦＮ－γ。结论： 慢粒细胞在适当的细胞因子的诱导下，可分化为具有ＤＣ形态的细胞，后者可诱导出高效而特异的抗肿瘤免疫。

增强凋亡的哺乳动物新型线粒体蛋白质—Smac/Diablo

细胞凋亡的调节因素众多 ,近年来线粒体相关因素越来越受到重视。本文介绍一种新型线粒体蛋白质—Smac/Diablo在凋亡的线粒体途径中诱导凋亡的作用及相关机制。这为诱导肿瘤细胞凋亡及抗肿瘤治疗提供有益的借鉴。

过表达Apg-2对H_2O_2诱导的BaF3-BCR/ABL细胞损伤的保护作用

目的观察过表达Apg-2对H2O2所致BaF3-BCR/ABL细胞损伤的保护作用。方法以H2O2作用于逆转录病毒空载体MIGR1感染细胞株BaF3-MIGR1和稳定表达BCR/ABL的BaF3-BCR/ABL细胞为氧化应激损伤模型,RT-PCR检测H2O2作用前后Apg-2基因表达水平;用紫外分光光度法测定乳酸脱氢酶(LDH)释放率,观察细胞的损伤程度;硫代巴比妥酸法测定丙二醛(MDA)含量,黄嘌呤氧化酶法测定过氧化物歧化酶(SOD)活性;Am-blue法检测细胞存活率。结果过表达Apg-2能明显改善H2O2导致的BaF3-BCR/ABL细胞损伤,与BaF3-MIGR1细胞处理组相比,过表达Apg-2可使BaF3-BCR/ABL细胞存活率升高,LDH释放率明显降低,降低MDA含量,提高SOD活性。结论过表达Apg-2对H2O2诱导的BaF3-BCR/ABL细胞损伤具有明显的保护作用。