静态化学发光淬灭分析法测定血清硒

目的:探讨硒对鲁米诺(Luminol)-过氧化氢-高锰酸钾发光体系的阻化作用并实现血清硒的化学发光测定。方法:采用GD-1型液相化学发光仪测定鲁米诺-过氧化氢-高锰酸钾反应体系的化学发光强度,建立化学发光强度与溶液中硒浓度的标准曲线,从而实现血清硒的静态化学发光淬灭分析测定。结果:本方法的检出限为6.5×10-4μg/ml,线性范围为1.5×10-3～6.5×10-1μg/ml;平均回收率为94.21%,变异系数为2.97%。结论:本方法是一种简便、准确的血清硒检测方法,对Mg2+、Cu2+等多种离子的干扰实验表明方法具有较好的选择性。

循环microRNA检测在大鼠溃疡性结肠炎诊断及疗效监测中的意义

目的探索并建立一种基于循环micro RNA的诊断大鼠溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)方法并监测其治疗后效果的临床前策略。方法第1阶段:硫酸葡聚糖(Dextran sulfate sodium,DSS)诱导大鼠UC模型。实时定量RT-PCR筛选差异性的血清micro RNA。ELISA检测血清核周抗中性粒细胞胞浆抗体(periunclear antineutrophil cytoplasmic antibodies,p ANCA)。Logistic回归法建立诊断模型Indice。受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线评价指标的诊断效能。第2阶段:验证指标对UC的诊断效能,并用其评价UC的疗效。结果第1阶段:大鼠UC模型建立成功。Mi R-20b、mi R-21和let-7e*在UC大鼠血清中高表达,mi R-125b-1*无明显变化。p ANCA在UC大鼠血清中高表达。诊断模型Indice=0+(2.645×mi R-20b)+(1.622×mi R21)+(0.979×let-7e*)+(0.082×p ANCA)的诊断效能强于各单项指标。第2阶段:各指标均能监测UC疗效,Indice的监测效能最强。结论循环micro RNA能稳定高效的诊断UC并监测其治疗后效果。

血乙醇浓度分析方法及其评价

介绍了目前常用的血乙醇浓度分析方法,包括顶空色谱法、分光光度法、散射能量衰减法、呼气法、酶电极法。对各种方法的基本原理作了简单介绍,对各自的特点作了评价。

原发性高血压基因机制研究进展

原发性高血压是遗传和环境因素相互作用所致的多基因遗传性疾病,对其基因机制的研究有助于对高血压的诊断、治疗和预防等。现就原发性高血压易感基因的研究方法(候选基因策略和全基因组扫描策略)以及部分候选基因的研究进展进行综述。

胚胎细胞MAD2基因表达对染色体分离的影响

目的探讨MAD2基因表达对染色体分离的影响。方法用定量RT-PCR比较RNA干扰前后的胚胎细胞内源性基因MAD2 mRNA表达水平,同时对染色体数目异常率进行比较分析。结果干扰后MAD2基因mRNA拷贝数/GAPDH基因mRNA拷贝数的均值为干扰前的20%,染色体数目异常率均值由干扰前的4.702%上升到28.498%。经统计学分析,RNA干扰后MAD2基因mRNA水平显著下降,染色体数目异常率显著增高。结论MAD2基因表达的降低会导致染色体分离的异常,本研究为染色体分离相关蛋白功能研究建立了新的研究手段和实验评价体系。

微小RNA对胚胎细胞BUB1基因的表达抑制

目的:探讨微小RNA对胚胎细胞BUB1基因表达的调控。方法:用定量real-timePCR比较microRNA转染前后的胚胎细胞内源性基因BUB1mRNA表达水平,同时用westernblot比较转染前后Bub1蛋白的表达水平。结果:对照组的BUB1基因mRNA拷贝数/GAPAHmRNA拷贝数为0.1960±0.0688,而转染microRNA重组质粒后,实验组的mRNA比值分别为0.1968±0.0689和0.1962±0.0670,经统计分析,两实验组细胞的内源性BUB1基因mRNA水平与对照组无显著性差异;而蛋白水平在转染后均有明显降低。结论:microRNA主要在翻译水平调节哺乳动物细胞内基因的表达,为研究基因表达的调控机制奠定了良好的基础。

酵母双杂交系统筛选Mps1相互作用蛋白

目的:对前期筛出的与Mps1可能有相互作用的两种蛋白用酵母双杂交回转,验证与Mps1有相互作用的蛋白,为染色体分离机制研究提供线索,并为蛋白质相互作用网络提供资料。方法:应用酵母双杂交技术,将前期以pDBLeu-Mps1为诱饵质粒筛选成人肝脏cDNA文库,得到的Leu+LacZ+阳性克隆进一步回转酵母进行验证,即将文库质粒与诱饵质粒一对一重新转入酵母体内对相互作用进行验证。并对验证后的阳性克隆的外源片段进行测序及同源性分析。结果:用同源性分析,从人胚胎cDNA文库筛选到的与M ps1有相互作用的两个蛋白在酵母双杂交回转实验中仅有一个为阳性,另一个相互作用为阴性。结论:应用酵母双杂交系统从人胚胎cDNA文库中筛选并初步验证了与Mps1有相互作用的蛋白,为Mps1蛋白的功能研究奠定了基础。

结肠癌中有丝分裂关卡基因hsMAD2表达的分析

目的:研究结肠癌组织中有丝分裂关卡基因HsMAD2的表达。方法:采用定量real-timeRT-PCR方法检测18例结肠癌及正常结肠组织中hsMAD2基因表达水平。结果:以hsMAD2基因mRNA拷贝数/GAPDH基因mRNA拷贝数比值为hs-MAD2基因mRNA水平的相对定量值。结肠癌和正常组织中的hsMAD2基因mRNA拷贝数/GAPDH基因mRNA拷贝数比值分别为0.1235±0.0752和0.0312±0.0598。hsMAD2基因的表达水平在结肠癌中显著高于正常结肠组织。结论:hsMAD2基因在结肠癌组织中的高表达,可能与癌细胞的异常增殖有关,是结肠癌发生发展的原因,可为临床结肠癌的治疗提供有效的靶点。

细胞分裂调控基因MAD2与GFP融合的真核表达质粒的构建及表达

目的:构建MAD2基因与GFP融合的绿色荧光蛋白真核表达质粒,并在HepG2细胞中表达。方法:通过RT-PCR扩增,获得MAD2基因的完整序列。将此片断插入pEGFP-N1载体多克隆位点区,构建MAD2基因与GFP融合的绿色荧光蛋白真核表达质粒。应用脂质体转染技术转染HepG2细胞并观察表达的绿色荧光。结果:成功构建MAD2基因与GFP融合的绿色荧光蛋白真核表达质粒,并在HepG2细胞中观察到绿色荧光蛋白的表达。结论:该载体的成功构建,为研究MAD2基因在细胞分裂中的功能及定位建立了有效的观察体系。

微小RNA抑制胚胎细胞MAD2基因的表达

目的:探讨微小RNA(microRNA)抑制胚胎细胞MAD2基因表达的机理。方法:用定量real-time PCR比较microRNA转染前后的胚胎细胞内源性基因MAD2 mRNA表达水平,同时用western blot比较转染前后Mad2蛋白的表达水平。结果:对照组的MAD2基因mRNA拷贝数/GAPAH mRNA拷贝数为0.1780±0.0688,而转染microRNA重组质粒后,实验组的mRNA比值分别为0.1778±0.0689和0.1778±0.0670,经统计分析,两实验组细胞的内源性MAD2基因mRNA水平与对照组无显著性差异;而其中一实验组的蛋白水平在转染后有明显降低。结论:microRNA主要在翻译水平调节哺乳动物细胞内基因的表达,为研究基因表达的调控机制奠定了良好的基础。

双歧杆菌脂磷壁酸对凋亡抑制因子survivin表达及其调控基因的影响

目的探讨双歧杆菌脂磷壁酸（LTA）对结肠上皮细胞癌LoVo细胞内凋亡抑制因子survivin表达的影响及其调控机制。方法采用RT-PCR和Western blot方法分别检测经双歧杆菌LTA处理后LoVo细胞中survivin mRNA和survivin蛋白表达的变化;用Western blot检测PI3K／AKT细胞信号通路中关键蛋白激酶AKT的磷酸化型pAKT（Thr308）以及p53和PFEN表达的变化。结果结肠癌LoVo细胞中存在survivin mRNA和蛋白的高表达,经LTA处理后其表达水平均明显下降（P〈0．01）;AKT蛋白激酶活性在LTA处理后也明显降低（P〈0．01）;而与下调survivin蛋白相关的p53和PTEN表达上升（P〈0．01）,且呈现一定的剂量依赖性。结论双歧杆菌LTA可以通过抑制PI3K／AKT细胞信号通路的活性,促进p53的表达,抑制凋亡抑制蛋白survivin的活性,导致caspases酶活性升高,诱导了LoVo细胞凋亡的发生。

血管生成素样蛋白3和4对脂质代谢和胰岛素抵抗的影响

血管生成素样蛋白(Angptl)3和Angptl4均是血管内皮生长因子家族成员。Angptl3在肝脏特异表达,而Angptl4主要在脂肪和肝脏表达,在心、肾等组织也有表达。Angptl3和Angptl4均可以通过抑制脂蛋白脂肪酶活性而调节脂质代谢,但在不同的营养状态下发挥作用。在胰岛素抵抗或胰岛素分泌缺陷时Angptl3的表达和血浆Angptl3水平明显升高,而血浆Angptl4水平在2型糖尿病患者是下降的。动物实验中给予外源性Angptl4可明显降低血糖浓度、改善机体葡萄糖耐量,提示它们与胰岛素抵抗有重要关系。