外源蛋白在酵母中表达的糖化修饰及人源化改造

Pichiapastoris(为毕赤酵母属中的一种)是目前广泛用于分泌表达重组蛋白质的宿主细胞,许多有着药用价值的蛋白质为N糖基化修饰。因此,要求表达宿主能够产生在结构和功能上与人相同的N连寡糖。最近一些研究组报道了利用组合基因文库来改造PichiapastorisN糖基化路径,从而产生同哺乳动物细胞N糖基化蛋白质一样的N连寡糖。该类研究的成功将可能广泛用于蛋白质功能的研究,并极有可能掀起运用Pichiapastoris生产药用糖蛋白的热潮。

人可溶性 gp1 90在酵母Pichiapastoris中的表达(英文)

人可溶性 gp190 (sgp190 )是白血病抑制因子 (LIF)的可溶性受体 ,可能在LIF行使众多生物学功能中扮演着重要的角色。为获得这一蛋白以研究它在人体内的生物学活性 ,在酵母Pichiapastoris中实现了重组sgp190分泌表达。利用基因重组技术 ,将编码人可溶性 gp190 (LIF受体α亚基 gp190胞外区 )cDNA克隆到毕赤酵母Pichiapastoris分泌表达载体 pPIC9K ,构建了重组表达质粒 pPIC9K sgp190。原生质体法转染PichiapastorisGS115菌株 ,经过G4 18筛选 ,得到了高效分泌表达sgp190蛋白的毕赤酵母菌株GS115 / pPIC9K sgp190 ,sgp190蛋白占摇瓶培养表达上清中总蛋白质的 2 6 %。经初步纯化 ,对表达产物的性质鉴定表明 ,其分子量约 12 5kD ,具有免疫活性。

sgp190与白血病抑制因子对滋养层细胞金属蛋白酶-9及抑制因子-1表达的影响

目的:探讨sgp190与白血病抑制因子(LIF)在妊娠维持中的作用。方法:体外培养滋养层细胞,分别施加LIF和/或sgp190处理后,用RT-PCR法检测金属蛋白酶-9(MMP-9)与金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP-1)mRNA表达情况,免疫印迹法检测细胞MMP-9与TIMP-1蛋白表达水平,ELISA法测定培养上清中MMP-9与TIMP-1的浓度。结果:LIF抑制体外培养滋养层细胞中MMP-9与TIMP-1中mRNA和蛋白表达(P<0.05),而sgp190可抑制LIF的这种作用。sgp190促进MMP-9mRNA与蛋白的表达(P<0.05),但对TIMP-1mRNA与蛋白表达无影响。ELISA分析结果基本与RT-PCR和免疫印迹分析结果相同。结论:LIF和sgp190可能通过调节MMPs和TIMPs表达来影响滋养层细胞的侵袭,而sgp190在LIF功能活性调节中扮演着一定角色。

精液蛋白质组研究进展

后基因组时代的主要研究任务之一即是蛋白组研究。蛋白质组学方法发展迅速 ,已被广泛应用于寻找生理状态与疾病相关的差异表达蛋白质。生殖技术已取得了很大的进展 ,但人们对生殖尤其是人类生殖的分子机制了解仍很贫乏。受精是雌雄配子发育向新的合子个体发育转变的枢纽。利用蛋白质组研究技术分析精液 ,可从蛋白质分子整体水平了解受精的机制。

Klinefelter综合征X染色体着丝粒区α-卫星DNA变异

目的从DNA分子水平建立研究X染色体着丝粒区域的α-卫星DNA变异的方法,发现K linefelt综合征患者的X染色体着丝粒区域的α-卫星DNA串联重复序列结构变化与染色体不分离的关系。方法采用(representativesamp ling ofmu ltip le repetitive un its,rep)PCR方法,通过设计适当的引物,对α-卫星DNA多个单拷贝串联重复序列同时进行扩增,检测重复序列中结构变化的种类、频率及重组位点。结果首次发现由缺失产生的562 bp和220 bp变异片段和重组位点,异常组的570、562、220 bp构成显著高于正常组(P<0.05)。Logistic回归分析显示:570、562 bp和220 bp 3个短片段同时出现和任两个短片段同时出现均是疾病相关的危险因素。结论K linefelt综合征的X染色体着丝粒区α-卫星DNA过多的重组可能是造成X染色体不分离的重要原因之一。