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人白介素24腺病毒载体构建及其生物学活性分析 被引量:2
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作者 魏丽丽 崔涛 +4 位作者 丁嵩涛 易发平 刘革力 马永平 宋方洲 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期252-256,共5页
目的:克隆人白介素24基因,构建其腺病毒载体,获取病毒重组子,并研究其生物学活性。方法:用密执毒素(Mezerein)诱导HeLa细胞表达IL-24,通过RT-PCR获取IL-24 cDNA,将其亚克隆至pAdTrack-CMV载体,经PmeⅠ线性化后,与腺病毒的骨架载体pAdEas... 目的:克隆人白介素24基因,构建其腺病毒载体,获取病毒重组子,并研究其生物学活性。方法:用密执毒素(Mezerein)诱导HeLa细胞表达IL-24,通过RT-PCR获取IL-24 cDNA,将其亚克隆至pAdTrack-CMV载体,经PmeⅠ线性化后,与腺病毒的骨架载体pAdEasy-1在BJ5183菌中同源重组,HEK293细胞包装扩增,PCR、Western blot鉴定。AdIL-24处理宫颈癌CaSki细胞,通过MTT细胞存活实验检测其活性;Hoechst33342染色、流式细胞仪检测凋亡;Western blot检测Bax、Bcl-2、p53蛋白的表达。结果:获取人IL-24的cDNA,序列与GeneBank公布序列完全一致,成功构建腺病毒载体,AdIL-24对CaSki细胞具有抑制生长、促进凋亡的作用,并上调Bax、p53蛋白表达,下调Bcl-2蛋白表达。结论:成功构建人IL-24的重组腺病毒载体,其病毒重组子具有生物活性。 展开更多
关键词 人IL-24基因 腺病毒载体 活性检测
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PGC-1α与线粒体O生成调控在心血管疾病中的作用 被引量:19
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作者 郭茜 郭家彬 +1 位作者 李梨 彭双清 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期1-5,共5页
线粒体是一类高度活跃的细胞器,在细胞能量代谢等生命活动中具有重要的作用。线粒体生成,即线粒体的增殖以及线粒体系统合成和个体合成的过程。近年来研究提示,线粒体生成与线粒体的功能调节密切相关,而过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅... 线粒体是一类高度活跃的细胞器,在细胞能量代谢等生命活动中具有重要的作用。线粒体生成,即线粒体的增殖以及线粒体系统合成和个体合成的过程。近年来研究提示,线粒体生成与线粒体的功能调节密切相关,而过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子-1α(peroxisome proliferator-ac-tivated receptor gamma co-activator,PGC-1α)可能是线粒体生成的关键调控因子。特别是在心血管系统中,PGC-1α信号途径调控的线粒体生成可能是维持和修复心肌细胞和血管内皮细胞等心血管系统细胞线粒体功能的主要机制之一,在心力衰竭、心肌肥大、糖尿病心血管并发症等心血管疾病的发生与发展过程中具有重要作用。PGC-1α作为心血管疾病疾病预防和治疗的潜在靶标,将有可能为心血管疾病的防治提供新的策略。 展开更多
关键词 线粒体生成 PGC-1Α 能量代谢 转录调控 信号通 心血管疾病
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人白介素24cDNA克隆、突变纠正和原核表达 被引量:2
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作者 魏丽丽 李成华 +5 位作者 袁成福 陈济 丁嵩涛 刘革力 易发平 宋方洲 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期130-133,共4页
目的获取人白介素24(IL-24)cDNA,构建原核表达载体以表达含有谷胱甘肽S转移酶(GST)的融合蛋白GST-IL-24。方法以人外周血单核细胞(PBMC)总RNA为模板,RT-PCR扩增IL-24 cDNA,克隆入原核表达载体pGEX-4T-2,测序结果显示在IL-24 cDNA第223位... 目的获取人白介素24(IL-24)cDNA,构建原核表达载体以表达含有谷胱甘肽S转移酶(GST)的融合蛋白GST-IL-24。方法以人外周血单核细胞(PBMC)总RNA为模板,RT-PCR扩增IL-24 cDNA,克隆入原核表达载体pGEX-4T-2,测序结果显示在IL-24 cDNA第223位G→A,370位T→C,从而导致其编码蛋白的氨基酸发生改变:A75T,H124Y,通过二次PCR将其纠正,重组载体pGEX-IL-24转化大肠杆菌BL21(DE3),异丙基--βD-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,SDS-PAGE,Western blot检测显示有融合蛋白GST-IL-24表达。结果通过RT-PCR及二次PCR得到人IL-24 cDNA,构建其原核表达载体,经IPTG诱导在相对分子量约为50 000处有融合蛋白表达。结论IL-24的重组载体在大肠杆菌BL21(DE3)可以表达GST-IL-24融合蛋白。 展开更多
关键词 白介素24 二次PCR 突变纠正 融合蛋白 克隆 原核表达
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人白介素24基因克隆表达、纯化及活性检测 被引量:1
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作者 魏丽丽 李成华 +5 位作者 杨俊霞 石华 丁嵩涛 马永平 易发平 宋方洲 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第22期2710-2713,共4页
目的克隆人IL-24基因,构建原核表达载体,表达纯化GST-IL-24融合蛋白,检测其活性。方法用密执毒素诱导HeLa细胞表达IL-24 mRNA,通过RT-PCR获取IL-24cDNA,将其克隆至原核表达载体pGEX-4T-2,IPTG诱导表达,经GSTrap TMF Fcolumn亲合纯化,SDS... 目的克隆人IL-24基因,构建原核表达载体,表达纯化GST-IL-24融合蛋白,检测其活性。方法用密执毒素诱导HeLa细胞表达IL-24 mRNA,通过RT-PCR获取IL-24cDNA,将其克隆至原核表达载体pGEX-4T-2,IPTG诱导表达,经GSTrap TMF Fcolumn亲合纯化,SDS-PAGE和Westernblot检测融合蛋白的表达,MTT法检测GST-IL-24对宫颈癌CaSKi细胞的抑制作用。结果克隆得到人IL-24的cDNA,序列与GenBank公布序列完全一致,SDS-PAGE电泳可见50kD大小的融合蛋白表达。GST-IL-24以剂量依赖的方式抑制宫颈癌CasKi细胞的生长。结论成功构建人IL-24基因原核表达载体,表达纯化得到GST-IL-24,该融合蛋白对宫颈癌CasKi细胞具有抑制作用。 展开更多
关键词 人IL-24基因 克隆 原核表达纯化 MTT
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表皮生长因子受体靶向纳米载体荷载C-erbB2反义寡脱氧核苷酸对人乳腺癌SK-BR3细胞的摄取与滞留 被引量:1
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作者 袁飞 王树斌 +4 位作者 彭志平 易发平 卜友泉 宋方洲 李少林 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2009年第16期3084-3088,共5页
背景:结合肿瘤的分子靶向技术和纳米技术,制备出一种新的具有靶向作用的纳米载体,以达到对肿瘤更好靶向作用的目的。目的:制备表皮生长因子偶联牛血清白蛋白纳米载体,联合核素标记的c-erbB2反义寡脱氧核苷酸,体外观察人乳腺癌SK-BR3细... 背景:结合肿瘤的分子靶向技术和纳米技术,制备出一种新的具有靶向作用的纳米载体,以达到对肿瘤更好靶向作用的目的。目的:制备表皮生长因子偶联牛血清白蛋白纳米载体,联合核素标记的c-erbB2反义寡脱氧核苷酸,体外观察人乳腺癌SK-BR3细胞对其摄取情况。设计、时间及地点:对比观察实验,于2006-09/2008-03在重庆医科大学生物化学和分子生物学教研室,重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心,重庆医科大学放射医学教研室完成。材料:牛血清白蛋白(生物技术级)由美国Amresco公司提供,表皮生长因子由英国PeproTech EC LTD提供,125I由成都中核高通同位素股份有限公司提供,寡脱氧核苷酸由上海生工生物工程技术服务有限公司提供。方法:采用超声乳化-化学交联及羧和反应制备表皮生长因子偶联白蛋白靶向纳米载体,通过核素标记示踪技术检测表皮生长因子偶联白蛋白靶向纳米载体的相关性质。主要观察指标:测量表皮生长因子靶向纳米载体荷载c-erbB2反义寡脱氧核苷酸的载药量、包封率及释药率,人乳腺癌SK-BR3细胞对表皮生长因子靶向纳米载体的摄取率及滞留率。结果:表皮生长因子靶向纳米载体包载125I标记的反义寡脱氧核苷酸组的摄取率及滞留率高于正义寡脱氧核苷酸组和无义寡脱氧核苷酸组。同时c-erbB2寡脱氧核苷酸使用纳米载体荷载组的摄取率及滞留率均高于未使用纳米载体组,差异有显著性意义(P<0.05)。结论:125I标记的表皮生长因子靶向纳米载体能够提高乳腺癌SK-BR3细胞对c-erbB2反义寡脱氧核苷酸的摄取和滞留,能达到更好的靶向作用。 展开更多
关键词 表皮生长因子受体 牛血清白蛋白 C-ERBB2 纳米载体
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指骨骨骺兴趣区域的自动提取方法
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作者 冉隆科 宋方洲 +1 位作者 谭鹏程 金晶 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2011年第30期5535-5538,共4页
背景:在骨龄自动化评定中,许多方法对骨骺兴趣区域的提取不够理想。目的:通过k余弦算法定位出手指骨的特征点,解决对骨骺兴趣区域的提取的困难和提取方法的局限性。方法:提取指骨兴趣区域,并用各向异性扩散方法进行滤波,然后根据骨龄指... 背景:在骨龄自动化评定中,许多方法对骨骺兴趣区域的提取不够理想。目的:通过k余弦算法定位出手指骨的特征点,解决对骨骺兴趣区域的提取的困难和提取方法的局限性。方法:提取指骨兴趣区域,并用各向异性扩散方法进行滤波,然后根据骨龄指骨的图像数据进行统计,寻找出定位指骨中心点的方法,通过3次多项式对中心点线进行拟合,定位出指骨的中心轴,在此基础上提取出指骨骨骺兴趣区域。结果与结论:用该方法定位出的指骨中心轴比较真实的反映指骨骨架,在此基础上能提取出指骨骨骺兴趣区域,成功率>95%,并能运用到后续对指骨骨骺兴趣区域相关的评定中。 展开更多
关键词 指骨 骨骺 骨骺兴趣提取 兴趣区域 骨龄
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蛋白质组学技术在研究AdIL-24抗癌机制中的应用
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作者 魏丽丽 王中堂 +2 位作者 崔涛 易发平 宋方洲 《生物技术》 CAS CSCD 2007年第6期8-11,共4页
目的:探讨蛋白质组学技术在研究AdIL-24抗宫颈癌CaSki细胞作用机制的应用价值。方法:前期研究已成功构建AdIL-24,可抑制宫颈癌CaSki细胞生长,促进凋亡。在此基础上,通过双向凝胶电泳分离AdIL-24处理前后细胞总蛋白,并对胶条(pH3-10NL、p... 目的:探讨蛋白质组学技术在研究AdIL-24抗宫颈癌CaSki细胞作用机制的应用价值。方法:前期研究已成功构建AdIL-24,可抑制宫颈癌CaSki细胞生长,促进凋亡。在此基础上,通过双向凝胶电泳分离AdIL-24处理前后细胞总蛋白,并对胶条(pH3-10NL、pH4-7)、SDS-PAGE浓度(10%、12%)、电泳时间(6h、7h)进行优化,PDQuest图像分析,MALDI-TOF质谱鉴定,经Mascot、MS-fit软件查询SWISS-PORT数据库鉴定差异蛋白。结果:获得分辨率高、重复性好的CaSki细胞双向电泳图谱,质谱鉴定的差异蛋白点经Mascot、MS-fit软件搜索到同一种蛋白质。结论:已建立的蛋白质组学技术,为进一步研究AdIL-24的抑癌机制奠定基础。 展开更多
关键词 AdIL-24 CASKI细胞 蛋白质组学
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白介素24与肿瘤
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作者 魏丽丽 易发平 宋方洲 《生命的化学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期97-99,共3页
IL-24的抑癌机制复杂,可通过调节p38MAPK、PKR、β-联蛋白(β-catenin)、PI3K、ERK1/2和JNK1/2信号通路;干扰线粒体功能和增加ROS合成;抑制DNA的修复、肿瘤血管形成和肿瘤细胞侵袭转移的能力等途径抑制肿瘤细胞的生长,促进凋亡。用复制... IL-24的抑癌机制复杂,可通过调节p38MAPK、PKR、β-联蛋白(β-catenin)、PI3K、ERK1/2和JNK1/2信号通路;干扰线粒体功能和增加ROS合成;抑制DNA的修复、肿瘤血管形成和肿瘤细胞侵袭转移的能力等途径抑制肿瘤细胞的生长,促进凋亡。用复制缺陷的腺病毒携带的IL-24(AdIL-24)现已进入Ⅰ、Ⅱ期临床实验,与三氧化二砷、放疗联合应用可增加疗效。 展开更多
关键词 白介素24 信号转导 肿瘤治疗
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IFT80蛋白对肿瘤影响的研究 被引量:1
9
作者 邓小燕 李飞龙 +2 位作者 胡宁 潘嘉川 汪长东 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2014年第23期1527-1531,共5页
目的:探讨IFT80(intraflagellar transport 80)蛋白在骨癌、肺癌、胰腺癌、胃癌、小肠癌、前列腺癌、乳腺癌和卵巢癌组织的表达分布情况与癌细胞增殖中的作用。方法:免疫组织化学研究IFT80的表达,免疫荧光和细胞培养研究抑制IFT80后对... 目的:探讨IFT80(intraflagellar transport 80)蛋白在骨癌、肺癌、胰腺癌、胃癌、小肠癌、前列腺癌、乳腺癌和卵巢癌组织的表达分布情况与癌细胞增殖中的作用。方法:免疫组织化学研究IFT80的表达,免疫荧光和细胞培养研究抑制IFT80后对癌细胞增殖的影响和纤毛之间的关系。结果:1)IFT80在胃癌和肺癌组织中高表达,乳腺癌和小肠癌组织中中等表达,骨癌和卵巢癌组织中少量表达,前列腺癌和胰腺癌组织中几乎不表达;2)抑制IFT80后发现肺癌细胞增殖加快,纤毛减少变短;3)高分化,ⅡA期胃癌和正常胃组织中IFT80蛋白大量表达,而在低分化晚期,几乎不表达,在其他不同分化的胃癌中不同程度表达。结论:在不同癌组织中IFT80分布情况不一致。IFT80分布在细胞纤毛上,通过其表达的减少来调节纤毛的数量和长短参与癌细胞的增殖,故在严重癌组织中含量最低。 展开更多
关键词 细胞原纤毛 IFT80 肿瘤 肺癌 胃癌
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IFT20蛋白在肺癌组织中的表达及其对肺癌A549细胞增殖的影响 被引量:1
10
作者 刘革力 李飞龙 +2 位作者 胡宁 潘嘉川 汪长东 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期666-674,共9页
目的 :探讨纤毛内运输(intral agellar transport,IFT)蛋白20在肺癌组织中的表达及IFT20对肺癌A549细胞增殖的影响。方法 :免疫组织化学法检测20例肺癌组织和4例正常肺组织中IFT20蛋白的表达。将靶向IFT20基因的小干扰RNA(small interfe... 目的 :探讨纤毛内运输(intral agellar transport,IFT)蛋白20在肺癌组织中的表达及IFT20对肺癌A549细胞增殖的影响。方法 :免疫组织化学法检测20例肺癌组织和4例正常肺组织中IFT20蛋白的表达。将靶向IFT20基因的小干扰RNA(small interfering RNA,si RNA)片段转染肺癌A549细胞后,实时荧光定量PCR法检测细胞中IF T20 m RNA的表达,MTT法检测细胞的增殖情况,免疫荧光染色法检测A549细胞中IFT20蛋白的表达情况以及纤毛的数量和长度,蛋白芯片检测A549细胞中蛋白的表达情况。结果 :IFT20蛋白在肺癌组织中呈弱阳性表达,而在正常肺组织中呈中度阳性表达。IFT20 si RNA成功转染后,A549细胞中IFT20 m RNA表达水平低于阴性对照组(转染control si RNA)和空白对照组(未转染的A549细胞)(P<0.05),细胞增殖加快(P<0.05);IF T20 si RNA转染组A549细胞IFT20蛋白表达水平下调,纤毛数量减少、长度变短或消失(P值均<0.05);IFT20 si RNA转染组A549细胞中X连锁凋亡抑制蛋白(X-linked inhibitor of apoptosis protein,XIAP)、survivin、高温需求因子A(high temperature requirment A,HTRA)蛋白、热休克蛋白(heat shock protein,Hsp)27、Hsp70和SMAC(second mitochondria-derived activator of caspases)的表达水平上调(P值均<0.05)。结论 :在肺癌组织中存在IFT20蛋白的低表达,抑制IFT20可以使肺癌A549细胞的纤毛数量减少和纤毛长度变短或消失,并促进肺癌细胞的增殖。 展开更多
关键词 肺肿瘤 纤毛 细胞增殖 纤毛内运输蛋白
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