基于iTRAQ技术筛选肝癌转移相关差异蛋白

目的:通过对不同转移潜能的肝癌细胞系的差异蛋白组学研究,以筛选鉴定出与肝癌转移相关的差异表达蛋白。方法:3株具有相同遗传背景、不同转移潜能的肝癌细胞系MHCC97-L、MHCC97-H及HCCLM3作为研究材料,经过收集胞质蛋白,浓缩、酶解、脱盐并用同位素标记相对和绝对定量技术(isobaric tags for relative and absolute quantitation,iTRAQ)对其进行标记,应用二维液相色谱串联质谱技术对肽段进行鉴定,得到的结果与数据库进行比对,对蛋白进行注释。基于Web Gestalt数据库对差异表达的蛋白进行GO(gene ontology)功能分析和通路分析以筛选与肝癌转移相关的目标蛋白。并用Western blot对3个关键蛋白(PLEC、SHMT2、LDHA)进行验证。结果:经过iTRAQ标记并质谱检测分析,共发现鉴定1 170个蛋白,其中在L/H(MHCC97-L/MHCC9-H)组鉴定发现47个差异表达蛋白,在M/H(HCCLM3/MHCC97-H)组鉴定发现65个差异表达蛋白。生物信息学分析显示L/H和M/H组差异表达的蛋白主要参与酶催化和细胞间粘附及细胞代谢的过程。应用Western blot在蛋白水平上的验证,PLEC在高转移细胞株MHCC97-H和HCCLM3中表达上调,SHMT2在HCCLM3中表达上调,LDHA在MHCC97-H中表达上调。结论:在本研究中应用iTRAQ标记高通量的蛋白质组学技术对3株不同转移潜能的肝癌细胞系的差异表达蛋白进行检测和鉴定分析,发现PLEC和SHMT2蛋白是两种新的与肝癌转移可能相关的蛋白。

HBV慢性携带小鼠中CD27和CD11b标记NK细胞亚群的变化

目的评价乙型肝炎病毒(HBV)慢性携带小鼠中CD27和CD11b标记自然杀伤(NK)细胞亚群的变化。方法将pAAV-HBVl.2质粒采用高压水动力法尾静脉注入C57BL/6小鼠体内,作为造模组,空载质粒作为对照组;检测不同时间点肝功能和病毒学指标判断HBV质粒慢性携带动物模型构建情况;采用流式细胞术检测脾脏和肝脏中NK细胞及CD11b联合CD27划分的NK细胞亚群的频数;采用Graphpad Prism软件进行统计学分析。结果小鼠HBV持续携带模型构建成功。与对照组相比,HBV慢性携带小鼠的脾脏和肝脏中的NK细胞频数差异均无统计学意义(P值均>0.05)。CD27联合CD11b将NK细胞划分为CD11b+CD27-(CD11b+SP)、CD11b+CD27+(DP)、CD11b-CD27+(D27+SP)和CD11b-CD27-(DN)四个亚群,与对照组相比,HBV慢性携带小鼠的脾脏中四个NK细胞亚群的频数差异均无统计学意义(P值均>0.05)。HBV慢性携带小鼠的肝脏中DN NK细胞亚群的频数与对照组比较显著增多(P<0.001),CD11b+SP细胞亚群的频数显著减少(P<0.05),DP和CD27+SP两个NK细胞亚群频数差异均无统计学意义(P值均>0.05)。结论HBV慢性携带小鼠肝脏NK细胞亚群分布异常,DN NK细胞亚群的频数明显增多,CD11b+SP细胞亚群的频数显著减少。