病理生理学重点课程建设

本文介绍了重庆医科大学病理生理学重点课程建设在师资培养、教学管理、教学改革等方面所做的工作。

在病理生理教学中注重学生综合素质培养

在高等医学教育中,为培养适应21世纪医疗卫生事业发展需要的高素质医学人才,我们在病理生理学教学实践中探索出了一些方法。

神经微丝的结构、性质及其在肿瘤病理诊断中的应用

中间丝(Intermediate filament,IF)为细胞骨架成份之一,因直径(8—10nm)介于微丝和微管之间而得名.中间丝有五种,分别存在于不同的组织细胞.它们是广泛存在于上皮细胞的角蛋白(Kera-tin),分布于间叶起源细胞的波形蛋白(Vimentin),发生于肌细胞的结蛋白(Desmin),胶质细胞特异的胶质纤维酸性蛋白(Glial fibrillary acidic prot-eins,GFAP)

分子生物学技术在临床病理学中的应用

近年来,分子生物学和免疫学的发展为临床病理学提供了新的手段.重组DNA技术应用于临床病理学,代表了最新的基础研究向临床实验室的过渡,是特殊染色,酶组织化学,电镜,单克隆抗体,免疫组织化学及流式细胞计数器等技术的延伸和发展。

人实体瘤抗癌药物敏感试验MTT法的建立

本文探讨用MTT法进行人实体瘤抗癌药敏试验的条件和影响因素,结果表明该法之最适肿瘤细胞浓度为0.5—1×10~5个/孔,最适培养时间为三天.167例实体瘤的八种抗癌药物敏感试验结果说明其与肿瘤细胞生长特性、病理类型和肿瘤标本取材部位等因素有关.MTT法有操作简单、重复性好、成功率较高。

长程无血清培养人乳腺癌细胞球的生物学特性

目的:从人乳腺癌原代细胞中分离培养乳腺癌干/祖细胞,并通过体外连续传代培养,研究其体外增殖、分化等生物学特性。方法:应用非黏附性乳腺球(mammosphere,MS)悬浮培养法富集乳腺癌干/祖细胞后,通过连续的单克隆实验检测乳腺球细胞(mammosphere-derived cells,MSDC)的克隆形成和自我更新能力,并经血清诱导后观察其分化能力。FCM法检测CD44+/CD24-/low细胞的含量。结果:接种于含生长因子无血清培养液的原发乳腺癌标本细胞均有MS生成,内含具有干细胞特征的肿瘤细胞。随着培养中传代次数的增加,贴壁分化的细胞增多,形成的MS减少,球体变小,且更易贴壁分化。CD44+/CD24-/low细胞仅存在于基底样乳腺癌标本。来自不同标本的MS的生物学特性表现出一定差异。结论:具有自我更新、无限增殖和多向分化等干细胞样特性的肿瘤细胞在人乳腺癌组织中广泛存在,其生物学行为可能因标本来源不同有所差异,也会因环境因素的作用而改变。

虎杖苷对小鼠脓毒症模型ALT、AST、TNF-α及COX-2的影响

目的研究虎杖苷对小鼠脓毒症致急性肝损伤的保护作用,并初步探讨其机制。方法采用盲肠结扎穿孔(cecal ligation and puncture,CLP)小鼠脓毒症模型,并设假手术对照组。在CLP手术前1h,采用不同剂量虎杖苷(50、100、300mg/kg)干预,随后每6h观察小鼠一般情况,24h后处死存活小鼠,收集血清和肝组织样本。分别采用比色法检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)活性;采用酶联免疫法检测血清肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)含量;采用免疫印迹法检测肝组织环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)表达;并取部分肝组织进行病理组织学分析。结果 CLP后24h,小鼠死亡率高达50%,生化指标和肝脏病理显示病变明显,模型成功率达90%,相对于假手术组,血清ALT、AST活性、TNF-α水平和肝组织中COX-2蛋白表达显著升高(P<0.01);虎杖苷呈剂量依赖地改善脓毒症诱导的死亡率,抑制ALT、AST活性和TNF-α升高(P<0.05),降低肝组织中COX-2表达,减轻肝脏病理损伤。结论虎杖苷有效地保护脓毒症诱导的急性肝损伤,其作用机制可能通过抑制TNF-α生成和COX-2的表达。

MTT法检测羟基喜树碱对兔晶体上皮细胞生长的作用

目的：检测羟基喜树碱(Hydroxycamptothecine，HCPT)对体外培养的兔晶体上皮细胞（rabbit lens epithelial cells，RLECs）增殖的影响。方法： 取2～3代的RLECs在96孔板中培养24h后，用不同浓度的HCPT分别作用24及72h，用甲基噻唑基四唑（Methyl thiazolyl tetrazolium，MTT）测定法观察HCPT对RLECs增殖及贴壁的影响。结果：HCPT既能抑制RLECs的增殖，还可抑制RLECs的贴壁，24h的半数抑制量（IC50）为96.041μg/ml，72h的IC50为1.34μg/ml。 结论： 一定浓度的HCPT能有效抑制RLECs的生长。

熊果酸诱导人食管癌细胞Eca-109凋亡的作用及机制

目的研究熊果酸(Ursolicacid,UA)抑制人食管癌Eca-109细胞增殖、诱导细胞凋亡的作用及机制。方法MTT比色法检测熊果酸对Eca-109细胞的增殖抑制作用;透射电镜观察经熊果酸处理后Eca-109细胞超微结构的改变;流式细胞术检测细胞周期变化及细胞凋亡率;Westernblot法检测P27kip1蛋白、凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达。结果20～50μmol/L熊果酸对Eca-109细胞具有显著的抑制作用(P<0.01);电镜下,18.32～36.65μmol/L熊果酸处理过的Eca-109细胞可见典型的凋亡形态及坏死形态;流式细胞检测显示细胞凋亡率及G0/G1期细胞随着熊果酸浓度的增加而增多,S期细胞逐渐减少;Westernblot检测结果提示熊果酸能使Bcl-2表达下降而Bax、P27kip1增加。结论熊果酸对人食管癌细胞系Eca-109具有显著的增殖抑制、诱导细胞凋亡作用。其作用与提高P27kip1蛋白的表达,将细胞阻滞在G0/G1期,下调Bcl-2的表达和增加Bax的表达有关。

青蒿琥酯对人子宫内膜癌细胞RL95-2的生长抑制作用

目的研究青蒿琥酯在体外对人子宫内膜癌RL95-2细胞的生长抑制作用及其可能机制。方法通过MTT法实验观察青蒿琥酯在体外对RL95-2细胞的抑制作用;透射电镜观察癌细胞的形态学改变;免疫组化检测细胞浆Caspase3活性;流式细胞术观察青蒿琥酯对细胞周期的影响及检测细胞线粒体膜电位Δψm和细胞内ROS水平。结果青蒿琥酯对RL95-2细胞具有增殖抑制作用,其半数细胞抑制浓度(IC50)为26.29μg/ml。透射电镜见:细胞呈早期凋亡改变:核染色质聚集于核膜周围,呈团块状;免疫组化检测细胞浆Caspase3表达阳性;流式细胞仪检测:细胞周期阻滞发生在G/0G1期;细胞内ROS升高(P<0.05);细胞线粒体膜电位Δψm降低(P<0.05)。结论青蒿琥酯在体外作用于人子宫颈癌RL95-2细胞,可能通过诱导细胞凋亡抑制癌细胞增殖。

癌性胸腹水抗癌药物敏感试验的研究

对５８例癌性腹水及２５例癌性胸水用ＭＴＴ法进行抗癌药物敏感试验。用临床常规方法收集胸腹水，并用肝素抗凝（１０ｕ／ｍｌ）；用不连续密度梯度离心去除渗出液中红白细胞，制成肿瘤单细胞悬液，进行药敏测试。同时观察到卵巢癌患者的实体瘤与腹水之间的肿瘤细胞存活率无统计学意义的不同，相关性较好。应用药敏结果进行胸腹腔给药治疗，效果较好，６０％～７０％患者胸腹水近期得到控制，这对于延长患者生命是有益的。

槲皮素对肝肿瘤细胞生长周期的影响

目的 :研究槲皮素对肝肿瘤细胞细胞周期的影响并探讨其机制。方法 :用联合四唑盐比色法研究槲皮素对肿瘤细胞生长的抑制作用 ,流式细胞仪、电镜及免疫细胞化学等方法观察槲皮素对肝肿瘤细胞株QGY ,HepG2体外生长的影响。结果 :槲皮素对HepG2和QGY均有抑制作用 ,使 G0 /G1期细胞增加 ,G2 /M期和S期细胞减少 ,出现凋亡峰 ,电镜下可凋亡小体。 4 8,72h后对HepG2的作用更明显。免疫细胞化学显示使用槲皮素后 ,2种细胞中增殖细胞核抗原 (PCNA)的阳性表达均减弱 ,而P2 1WAF1的表达均增强 ,Bax仅在HepG2细胞中表达增强。结论 :槲皮素对 2种肝肿瘤细胞株都有一定的抑制作用 ,可能主要通过增强 2种细胞株的P2 1WAF1的表达及减弱PCNA的表达诱导G0

MTT法用于抗癌药物筛选的实验研究

本文就MTT法在抗癌药物筛选试验中的应用方面进行了初步探讨,结果显示该方法简便、快速.细胞浓度以1—5×10~4/孔较为适宜,吸光度30min内不变.DMSO为MTT法的想理溶剂,但需除去蛋白质的影响.MTT以5mg/ml与细胞反应4h为佳.批内CV值为10%左右.四种抗癌药物对瘤株细胞SW-480作用后。

中效原理在体外抗癌药物定量分析中的应用

目的 在体外利用中效原理定量分析抗癌药物联合应用过程中的协同、相加或拮抗作用。方法 采用MTT法 ,利用中效原理判断联合用药 (阿糖胞苷 ,长春新碱 )对HL 6 0细胞的效应。结果 两种药物单用及联合应用时随药物剂量增加 ,其效应也随之增加。两药大剂量合用时为拮抗效应 ,小剂量合用时为协同效应。两药合用时给药次序不同不会影响合用效应 ,两药合用时药物浓度比例变化会影响合用效应。结论 两种药物合用时大剂量为拮抗 ,小剂量为协同 ,其效应大小与两种药物浓度比例有关 ,而与给药时间次序无关。

奥沙利铂诱导人肝癌细胞株HepG2凋亡及其机制探讨

目的 :研究奥沙利铂对人肝癌细胞株HepG2生长抑制及诱导凋亡的作用并探讨其诱导凋亡的作用机制。方法 :应用MTT法检测奥沙利铂对HepG2细胞生长的抑制作用 ;电镜观察细胞的形态改变 ;流式细胞仪分析细胞周期的分布和凋亡的情况 ;免疫组织化学法检测突变型p5 3,Bcl- 2 ,Bax ,Fas等凋亡相关基因蛋白的表达。结果 :奥沙利铂对HepG2有明显的抑制作用 ,细胞阻滞于S期和G2 /M期 ,G0 /G1期细胞减少 ,作用 72h出现凋亡峰 ,电镜可以找到凋亡小体 ,免疫组织化学表明Bax表达增强 ,突变型 p5 3、Bcl- 2表达减弱 ,Fas表达无差异。 结论 :奥沙利铂具有抑制肝癌细胞株HepG2增殖及诱导凋亡作用 ,其机制与促凋亡相关基因表达增强和抗凋亡相关基因表达减弱有关。

姜黄素对人卵巢癌细胞株SKOV_3的抗增殖作用

目的:探讨姜黄素对人卵巢癌细胞株SKOV3 的抑制增殖作用及其机制。方法:采用MTT法测定姜黄素在不同浓度、不同时间对SKOV3 的抑制增殖效应,流式细胞术分析细胞周期分布及凋亡率,透射电镜观察细胞的超微结构变化,免疫细胞化学法检测凋亡相关基因蛋白的表达。结果:姜黄素可抑制SKOV3 细胞的生长,其抑制率与药物浓度和作用时间呈依赖关系,72h的中效浓度(IC50 )为79.96 μmol/L ,流式细胞仪分析证实姜黄素能使SKOV3 细胞聚积在G2 /M ,电镜观察发现姜黄素可诱导细胞凋亡,姜黄素作用72h后,免疫细胞化学表明突变型P5 3蛋白(MTP5 3)及Bcl- 2表达减弱,Bax及Fas表达增强。结论:姜黄素对SKOV3 细胞有抑制增殖作用,通过下调MTP5 3、Bcl- 2的表达及上调Bax。

原发性肝癌患者血清前白蛋白、α_1-抗胰蛋白酶、α_1-酸性糖蛋白及结合珠蛋白含量的分析

本文采用单向免疫扩散法对100例原发性肝癌、49例肝硬化、36例急性肝炎及60例正常人血清前白蛋白(PA)、α_1-抗胰蛋白酶(α_1-AT)、α_1-酸性糖蛋白(α_1-AG)及结合珠蛋白(HP)的含量进行了检测,结果表明原发性肝癌患者血清α_1-AT及α_1-AG非常显著地高于肝硬化、急性肝炎及正常人(P<0.001);肝癌患者血清HP明显高于肝硬化及正常人(P<0.001及P<0.05)。33例AFP阴性肝癌患者血清α_1-AT、α_1-AG及HP均显著地高于良性肝病患者及正常人,这AFP阴性肝癌患者的鉴别诊断是非常有意义的。如将这三种糖蛋白再与AFP联合检测,则可大大地提高对原发性肝癌的诊断率。

奥沙利铂处理人肝癌细胞株HepG2、QGY后凋亡相关基因蛋白的表达

目的 观察抗肿瘤药物奥沙利铂对人肝癌细胞株HepG2、QGY凋亡相关基因蛋白表达的影响 ,探讨奥沙利铂诱导HepG2、QGY细胞发生凋亡的机制。 方法 采用人肝癌细胞株HepG2、QGY作为研究对象 ,免疫细胞化学法检测细胞凋亡相关基因蛋白的表达。结果 奥沙利铂作用 72h后 ,免疫细胞化学表明Bax表达增强 ,突变型P5 3蛋白 (MTP5 3)、Bcl 2、Myc表达减弱 ,Fas表达无差异。结论 奥沙利铂诱导肝癌细胞凋亡的作用与上调Bax蛋白表达及下调MTP5 3、Bcl 2、Myc蛋白表达有关 ,该药可能不是通过Fas途径诱导细胞凋亡。

JAK抑制剂AG490诱导乳腺癌细胞凋亡及对Survivin表达的影响

背景与目的:已有研究证实Survivin在多种乳腺癌中可呈高表达且与肿瘤的恶性程度和患者预后密切相关,但是Survivin在乳腺癌细胞中高表达的相关机制尚有待深入了解。本实验拟研究JAK-STAT信号通路抑制剂AG490在人乳腺癌细胞MDA-MB-231中对Survivin表达以及对肿瘤细胞增殖、凋亡的影响。方法:以MDA-MB-231细胞为研究对象,应用AG490后,用Westernblot检测细胞中P-STAT3、Survivin的蛋白表达变化、RT-PCR检测SurvivinmRNA的变化;用MTT法检测细胞增殖活性的改变;用流式细胞术检测细胞凋亡的情况。结果:AG490使MDA-MB-231细胞中P-STAT3和Survivin的蛋白表达减少,同时细胞的增殖活性降低,凋亡增多。P-STAT3/β-actin用药前为0.74,AG49040μmol/L作用24h后为0.21;Survivin/β-actin用药前为1.09,40μmol/LAG490作用24h后为0.28。40μmol/LAG490作用24h后细胞出现“亚G1”峰,凋亡率为5.62%;AG49040μmol/L,作用48h后细胞凋亡率为28.81%。结论:AG490可诱导MDA-MB-231细胞凋亡、减少Survivin的表达。