大鼠出血性脑水肿水通道蛋白4表达的研究

目的 :探讨大鼠脑出血后血肿周围水通道蛋白 4(AQP4)的表达变化。方法 :采用定量胶原酶注入大鼠尾状核建立脑出血模型 ,用干湿重法和免疫组织化学法分别检测脑出血后不同时间段脑含水量和 AQP4蛋白的表达。结果 :脑出血后 6h,脑含水量和血肿周围 AQP4蛋白表达增加 ;出血后 72 h达到高峰 ,出血 1周后仍高于正常 ;AQP4蛋白的表达和脑含水量呈显著正相关 (r=0 .985 7,P<0 .0 1)。结论

水通道蛋白-4表达变化与急性高眼压视网膜损伤的相关性研究

目的观察不同高眼压作用下,水通道蛋白-4(AQP4)及其mRNA在大鼠视网膜内的表达变化,以探讨AQP4与眼压异常性疾病的关系。方法采用前房加压灌注法,分别制作75cm、125cm和150cm水柱不同压力急性高眼压大鼠模型;通过HE和尼氏染色了解视网膜病理改变和神经节细胞数目变化;应用免疫组织化学、免疫荧光双标、原位杂交以及RT-PCR等技术检测不同高眼压作用下,AQP4及其mRNA在视网膜内的表达变化。结果与对照组相比,各实验组大鼠视网膜呈不同程度水肿样改变,其内层厚度增加,神经节细胞数目明显减少;AQP4及其mRNA在视网膜内的表达明显增强,其表达上调水平与眼压升高程度呈正相关,并与视网膜内层厚度增加以及节细胞数目减少相关(P<0.01)。结论急性高眼压作用下,大鼠视网膜内AQP4及其mRNA的表达明显增强,呈压力依赖性,其异常高表达可能与急性高眼压的病理损伤过程以及眼内水、电解质代谢失衡有关。

大鼠脑出血后血肿周围Ca^(2+)浓度的变化与磷酸化CaMKⅡ表达的实验研究

目的 探讨脑出血后血肿周围脑组织钙离子浓度和磷酸化的钙调蛋白依赖性蛋白激酶 (P-Ca MK )表达的变化及其相关联系。方法 采用胶原酶注入尾状核建立大鼠脑出血模型 ,干湿重法测量脑组织含水量 ,Fura-2 / AM荧光法测定血肿周围 Ca2 +浓度 ,免疫组化方法检测 P-Ca MK 的表达。结果 与正常组相比 ,脑出血后 6h,Ca2 +浓度、脑含水量和 P-Ca MK 的表达均开始上调 ,第 3天达高峰 ,此后逐渐回落 ,持续 1周仍高于正常水平 ;Ca2 +浓度的变化与 P-Ca MK 的表达强度呈明显正相关。结论 脑出血后细胞内钙超载 ,导致 Ca MK 磷酸化作用增强 。

精氨酸加压素阳性神经元在大鼠下丘脑的定位

目的:观察大鼠精氨酸加压素(AVP)及其mRNA阳性神经元在下丘脑的分布和形态特征。方法:以尼氏染色作参照,运用免疫组化和原位杂交观察AVP及其mRNA在下丘脑的表达。结果:下丘脑AVP及其mRNA阳性的神经元由吻侧到尾侧依次出现于视上核,视上核和视交叉上核,视上核、视交叉上核和室旁核,视上核和室旁核及视上核、下丘脑前核和室旁核。AVP及其mRNA阳性神经元仅占据视上核背内侧;在第三脑室室管膜膜内或膜下可见AVP阳性神经元的胞体或突起;在不同核团内AVP阳性神经元的形态存在差异。结论:AVP及其mRNA阳性神经元在下丘脑不同核团内具有特异性分布;AVP阳性触液神经元可能是调节脑脊液和脑组织之间AVP含量的桥梁。

大鼠脊髓慢性压迫性损伤实验模型的建立

目的:建立一种新型大鼠脊髓慢性压迫实验动物模型,为探索脊髓受压后的病理生理机制奠定基础。方法:根据大鼠脊柱解剖结构特点自行设计一种大鼠脊髓压迫器,用以制作大鼠慢性压迫模型。运用行为学、影像学、TTC、HE、Tunnel等方法,了解动物行为学变化及受压节段脊髓病理学改变,以评价模型的可靠性。结果:脊髓压迫后渐次出现肌力减退、行动瘫痪;TTC结果显示,在各时段可见脊髓缺血范围与压迫时间及压迫强度相关;压迫后,脊髓出现组织水肿、神经元空泡化、白质疏网状改变及退行性变,以及神经元和胶质细胞的凋亡。结论:⑴用大鼠脊髓压迫器制作的大鼠脊髓慢性压迫缺血性损伤模型,具有方法简单、科学、重复性强等特点;⑵脊髓压迫程度可根据实验目的不同进行调节;⑶本实验为脊髓压迫性损伤机制的研究提供了一种理想的动物试验模型。

AQP4与Kir4.1在大鼠眼内组织的共表达

目的:探讨AQP4与Kir4.1在大鼠眼内的定位分布及二者的共表达.方法:用免疫组织化学及激光扫描共聚焦显微技术检测AQP4与Kir4.1在大鼠眼内的分布.结果:免疫荧光显示,AQP4与Kir4.1在大鼠视网膜和睫状体内的分布形式相似;免疫荧光双标显示,AQP4与Kir4.1在视网膜Mller细胞及睫状突无色素上皮细胞的顶膜面及基底膜面呈重叠分布.结论:AQP4与Kir4.1在大鼠视网膜Mller细胞及睫状突无色素上皮细胞共表达,提示二者可能具有协同作用,参与房水的产生以及视网膜内水、K+运输平衡的调节.

大鼠脑出血后AQP4mRNA的表达与Ca^(2+)关系的探讨

目的 探讨AQP4mRNA的表达与Ca2 + 浓度在大鼠脑出血后脑水肿中的作用机制。方法 采用胶原酶复制大鼠脑出血模型 ,通过半定量逆转录聚合酶链反应 (RT -PCR)检测AQP4mRNA的表达 ,Fura - 2 /AM荧光法测定水肿区脑细胞内Ca2 + 浓度。结果 脑出血后血肿周围脑组织AQP4mRNA的表达和Ca2 + 浓度均明显增高。结论 脑出血后AQP4的表达增高 ,介导Ca2 + 内流增加 ,AQP4和Ca2 + 可能共同参与脑出血后脑水肿的形成。

水通道蛋白-4在脑出血大鼠脑组织的分布

目的 观察脑出血大鼠水通道蛋白 4 (AQP 4 )在脑组织的分布变化及其在出血性脑水肿中的作用。方法 采用定量胶原酶注入大鼠尾状核建立脑出血模型 ,应用免疫组化法观察脑出血后不同时间大鼠脑组织AQP4的表达。结果 AQP 4阳性细胞主要分布在脑出血血肿周围区和大脑皮质的星形胶质细胞、脑室周围、视上核和室旁核。脑出血后 6h起 ,AQP 4表达增强 ,出血后 72h达高峰 ,出血 1周后仍高于正常水平。结论 脑出血后 ,AQP 4在与水代谢密切相关的部位表达明显增强 ,提示AQP4在出血性脑水肿的形成过程中起重要作用。

实验性早期糖尿病大鼠视网膜水通道蛋白4及其mRNA的表达变化

目的:探讨实验性早期糖尿病鼠视网膜水通道蛋白4(AQP4)及其mRNA的表达变化及其意义。方法:用链脲菌素(streptozotocin,STZ)腹腔注射的方法建立大鼠糖尿病模型,运用墨汁灌注实验检测视网膜微血管渗漏情况;用免疫荧光组织化学检测AQP4在视网膜内的分布和表达变化;用原位杂交和RT-PCR检测AQP4 mRNA在视网膜内的分布及表达变化。结果:与同龄正常对照组大鼠相比,早期糖尿病鼠视网膜未见明显血管渗漏现象,但存在部分细胞水肿、节细胞数目减少、感光细胞外节排列紊乱等病理改变;免疫组织化学、原位杂交和RT-PCR结果显示,模型鼠视网膜内AQP4及其mR-NA的表达明显增强。结论:实验性早期糖尿病鼠视网膜,在微血管病变发生前,已存在细胞水肿等病理改变;AQP4及其mRNA的表达明显上调。AQP4表达上调可能是糖尿病早期视网膜水肿形成、视功能下降的重要原因。

水通道蛋白-4在大鼠甲状腺中的表达

目的:观察水通道蛋白-4(AQP4)在甲状腺滤泡细胞的表达和分布特点,为研究甲状腺内分泌及调节机制提供形态学基础。方法:利用免疫组织化学、免疫荧光组织化学和原位杂交组织化学技术,检测大鼠AQP4及其mRNA在甲状腺滤泡上皮细胞的表达。结果:免疫组织化学和免疫荧光组织化学显示,AQP4在甲状腺滤泡上皮细胞膜上有表达,而在上皮细胞基底面和管腔面表达更为明显;原位杂交组织化学显示AQP4 mRNA在上皮细胞中表达明显。结论:AQP4在甲状腺的表达和分布特点,提示其参与了甲状腺素的合成和分泌过程中渗透压的精细调节作用。

高渗液对体外培养星形胶质细胞中水通道蛋白4 mRNA表达的影响

目的 研究体外培养星形胶质细胞高渗状态下水通道蛋白 4 (AQP4 ) m RNA表达的变化特点及其所起的作用。方法 取生后 2 d的新生 Wistar大鼠大脑皮质进行星形胶质细胞纯培养 ,分别用不同渗透压的高渗培养液作用于星形胶质细胞 ,建立星形胶质细胞对高渗反应的实验模型 ;采用原位杂交、乳酸脱氢酶(L DH)活性测定及图像分析等方法 ,研究体外培养星形胶质细胞对高渗液的反应和 AQP4 m RNA的表达规律。结果 32 0、333和 345 m mol/ L的高渗培养液作用于星形胶质细胞 3、6、12和 2 4 h后 ,L DH活性测定的吸光度 A值在各时间点均显著高于对照组 (P均 <0 .0 5 ) ;原位杂交分析表明 ,AQP4 m RNA表达明显增高 ,与正常组相比有显著意义 ,尤以高渗液作用 12 h时最明显 ,而且与作用时间及渗透压相关。结论 在高渗状态下 ,细胞活性明显下降 ,AQP4 m RNA表达增强。 AQP4可能在高渗性脱水的早期起重要的调节作用。

尼膜同对大鼠脑缺血再灌注后血-脑屏障通透性和脑梗死体积的影响

目的 研究尼膜同对大鼠脑缺血再灌注后血 脑屏障 (BBB)通透性和脑梗死体积的影响。方法采用插线法制作脑缺血再灌注的大鼠模型 ,缺血 2h后再灌注。实验分尼膜同组和生理盐水对照组 ,每组分再灌注 6h、12h、2 4h、4 8h、72h 5个时段 ,再灌注后立即分别腹腔注射尼膜同 2mg/kg或等量的生理盐水 ,每12h注射 1次。用荧光法及透射电镜观察不同时段BBB通透性破坏的情况 ,TTC染色后计算梗死体积百分比。结果 脑缺血再灌注后随时间延长 ,BBB通透性和梗死体积百分比逐渐增加 ,且BBB通透性的增加呈现两个高峰 ,分别为再灌注后 12h和 4 8h ;尼膜同组BBB通透性及脑梗死体积百分比明显高于生理盐水对照组 ,差异有显著性 (P <0 0 5 )。结论 脑缺血再灌注增加BBB的通透性和脑梗死体积百分比 ,再灌注后给予尼膜同可加重这些病理变化。

低渗状态下星形胶质细胞AQP4mRNA的表达和Ca^(2+)浓度的关系

目的探讨低渗培养液对星形胶质细胞AQP4mRNA的表达变化和Ca2+浓度的影响及其之间的关系。方法取生后2d的Wistar大鼠大脑皮层进行星形胶质细胞纯培养,分别予不同程度的低渗培养液作用于细胞,建立细胞对低渗液反应的实验模型。应用台盼蓝测定细胞存活率,采用原位杂交检测AQP4mRNA的表达,Fura-2/AM荧光法测定细胞内Ca2+浓度。结果体外培养的星形胶质细胞在低渗培养液分别作用3h、6h、12h、24h后,低渗组的细胞存活率较对照组明显减少,各时间点AQP4mRNA表达水平与细胞内Ca2+含量均明显高于对照组,与对照组相比差异有显著意义(P<0.05),而且与作用时间以及低渗液的严重程度密切相关;AQP4mRNA的表达强度与Ca2+浓度的变化呈明显正相关。结论低渗液可引起星形胶质细胞AQP4mRNA的表达上调,导致细胞内Ca2+超载,AQP4和Ca2+可能共同参与脑水肿的形成,提示AQP4可能是脑水肿的重要致病因素之一。

低渗液对AQP4蛋白在体外培养星形胶质细胞中的表达变化

目的 研究低渗培养液对星形胶质细胞AQP4蛋白的表达变化 ,并探讨其在脑水肿中的作用机制。方法 取出生后 2d的Wistar大鼠大脑皮层进行星形胶质细胞纯培养 ,分别予不同程度的低渗培养液作用于星形胶质细胞 ,建立星形胶质细胞对低渗压反应的实验模型。应用四甲基偶氮唑蓝 (MTT)比色法测定细胞活性 ,采用免疫细胞化学法检测AQP4蛋白的表达 ,通过光镜观察低渗液对星形胶质细胞形态学影响。结果 体外培养的星形胶质细胞在不同程度的低渗培养液作用 3、6、12、2 4h后 ,各时相点的AQP4蛋白表达水平均明显高于对照组 (P <0 .0 5 ) ,而且与作用时间和低渗压的程度密切相关 ;在光镜下 ,星形胶质细胞出现典型的细胞水肿形态学改变 ,其活性明显下降。结论 低渗液可导致星形胶质细胞水肿 ,AQP4蛋白表达增强 ,而且AQP4表达上调与低渗压的程度和作用时间有关 ,抑制AQP4的表达可能为脑水肿的治疗提供新的理论依据。

星形胶质细胞水通道蛋白-4在高渗液中的表达变化

目的 研究高渗培养液对体外培养星形胶质细胞表达水通道蛋白- 4 (Aquaporin - 4 ,AQP4 )的影响及AQP4在高渗性脱水中的作用。方法 取生后2d的Wistar大鼠的大脑皮层进行星形胶质细胞纯培养,分别予不同程度的高渗培养液作用于星形胶质细胞,建立星形胶质细胞对高渗液反应的实验模型。通过形态学观察、PT -PCR、免疫细胞化学、四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法及图像分析等方法,研究体外星形胶质细胞对高渗液的反应及AQP4mRNA和蛋白的表达变化。结果 高渗组各时相点吸光度A值均低于对照组(P <0 . 0 5 ) ,星形胶质细胞表现出特征性的细胞脱水形态学变化,AQP4mRNA和蛋白的表达均显著高于对照组(P <0 . 0 1) ,尤以作用12h后最明显,而且AQP4mRNA和蛋白的表达呈显著正相关(rs >0 84 85 ,Ps <0 . 0 1)。结论 在高渗状态下,AQP4mRNA和蛋白的表达增强,AQP4表达上调在高渗性脱水的早期(<12h)可能起到重要的代偿作用。

实验性脑出血后水通道蛋白4的表达变化(英文)

背景:水通道蛋白4可能是导致脑水肿形成的重要调节因素之一,但水通道蛋白4是否参与脑出血后脑水肿的形成尚未见报道。目的:观察出血性脑水肿病理过程中水通道蛋白4的表达情况,探讨其与脑水肿形成的关系。设计:随机对照动物实验。单位:广西壮族自治区人民医院神经内科和重庆医科大学神经生物学研究室。材料:实验于2003-04/2003-10在重庆医科大学生物学实验室完成。选择健康Wistar大鼠120只,雄性,体质量250～300g,由重庆医科大学实验动物中心提供。方法:实验分为4部分,每部分(n=30)均随机分为对照组(n=5)和手术组(n=25),并将手术组进一步分为出血后6h,1d,3d,5d,7d共5个时相组(n=5)。手术组大鼠麻醉后将定量胶原酶注入脑左侧尾状核建立脑出血模型;对照组只进针不注胶原酶。造模成功标准:将大鼠尾巴提起,瘫痪侧前肢回收后屈曲于腹下,正常侧前肢向地面伸展。实验分为以下4个部分:①采用免疫组化检测水通道蛋白4蛋白的表达。②采用原位杂交法检测水通道蛋白4mRNA的表达。③采用反转录-聚合酶链反应检测水通道蛋白4mRNA的表达。④应用电镜观察大鼠脑水肿的病理改变。主要观察指标:①各组大鼠水通道蛋白4mRNA及其蛋白的表达水平。②造模大鼠脑水肿区的病理改变。结果:手术组大鼠均造模成功,全部大鼠均进入结果分析,无脱失。①各组大鼠水通道蛋白4mRNA及其蛋白的表达水平比较:对照组大鼠水通道蛋白4的表达无明显改变。与对照组相比,手术组大鼠脑出血后6h,水通道蛋白4mRNA和蛋白在脑水肿区表达增强;至第3天,水通道蛋白4mRNA和蛋白的表达达到高峰;1周后,水通道蛋白4的表达仍显著高于对照组(t=12.65,P<0.01)。②脑水肿形成过程中水通道蛋白4mRNA和蛋白的关系:水通道蛋白4mRNA和蛋白的表达呈高度正相关(r=0.8281～0.9821,P<0.01)。③手术组大鼠脑水肿区相应的病理改变:在脑出血后1～3d内为逐渐加重的细胞内水肿,到第3天,脑水肿进一步加剧,出现血管源性水肿,而且有部分组织变性和坏死。结论:脑出血后水通道蛋白4表达明显增强,提示水通道蛋白4可能参与了出血性脑水肿的发生发展过程。抑制水通道蛋白4的表达可能是防治脑水肿的一种有效途径。

水通道蛋白-4在急性高眼压大鼠眼组织的表达变化

目的观察急性高眼压时水通道蛋白-4(AQP4)在大鼠眼组织的表达变化,以探讨AQP4与某些眼压异常性疾病的关系。方法前房加压灌注法制作大鼠急性高眼压模型;应用免疫组化和原位杂交法观察AQP4及其mRNA在眼组织的表达变化,并进行半定量分析。结果与对照组相比,AQP4及其mRNA在急性高眼压大鼠视网膜上的表达明显增强,主要集中在节细胞层、内核层。结论急性高眼压状态下,AQP4及其mRNA在视网膜上的表达增加,提示AQP4可能参与了高眼压所致视网膜损伤的病理生理过程。

严重烧伤后脑水肿的发病机制

严重烧伤可引起多器官的损害，而严重烧伤后脑水肿作为烧伤主要心脏并发症之一，病因复杂，伤情严重，发展越快，后果越严重。尤其小儿，因其特殊的解剖生理特点，严重烧伤后较成人更易发生脑水肿。严重烧伤后脑水肿在临床上往往被其它并发症所掩盖，缺乏特异的症状和体征，了解其发生发展及其机制的研究正同益被人们所重视。脑水肿分为血管源性脑水肿和细胞毒件脑水肿。现研究已证实，严重烧伤后脑水肿兼有瓶管源性和细胞毒性脑水肿两种，前者因血管本身通透性的改变，或伤后补液过多引起细胞内外间隙扩大，细胞外稀释性低钠血症而发生：后者多为烧伤释放毒性物质吸入或烧伤后产生的“毒素”进入血流，引起毛细血管通透性增加而形成，如一氧化氮(NO)及谷氨酸的产生过多等，同时脑内ATP生成减少，钠泵功能障碍致细胞源性脑水肿。大量的研究资料表明，严重烧伤后脑水肿的发生主要与氧自由基、一氧化氮(NO)的毒作用，钙超载，兴奋性氨基酸(EAA)的毒性损害，血脑屏障(BBB)通透性改变，水通道蛋白等因素有关。

AQP9在组织中的分布和功能

AQP9是一种选择性水通透膜转运蛋白 ,属于主体内在蛋白家族的成员之一。AQP9不但对水具有通透性 ,而且对其它一些中性溶质也具有通透性。现已发现 ,AQP9分布在多种器官组织中。在脑组织 ,AQP9主要分布在星形胶质细胞 ,参与水的代谢和渗透压调节 ,还可能与脑的某些水代谢疾病有关。在肝脏 ,AQP9的分布有明显的性别差异 ,其功能可能与尿素清除有关。在睾丸 ,分布在生精小管和Leyding细胞 ,与液体的重吸收及雄性激素产生功能有关。研究AQP9的分子结构 ,生化特性 。

缺血性脑水肿的病理生理研究进展

脑水肿是缺血性脑血管病的常见并发症,它的产生是一个复杂的病理生理过程。目前研究表明缺血性脑水肿与水通道蛋白(aquaporins,AQPs)表达的变化、血脑屏障通透性的增加、脑缺血后出现的炎性反应及可引起多种损伤的自由基的作用等多种因素有关。其中,AQPs是新近发现的一组具有水选择性的细胞膜转运蛋白,特别是AQP4和AQP5与缺血性脑水肿有着较为密切的关系。