蛋白酶体抑制剂对神经细胞前咽缺陷蛋白-1表达的影响

目的 探讨神经细胞内前咽缺陷蛋白-1（Aph-1）的蛋白降解是经蛋白酶体途径还是经溶酶体途径介导.方法 在人神经母细胞瘤细胞（SH-SY5Y）建立稳定表达Aph-1细胞株的基础上,应用蛋白酶体和溶酶体酶抑制剂分别处理Aph-1细胞株,并结合Western blotting、放射性同位素脉冲示踪技术（Pulse-chase）、免疫荧光双标等技术,检测细胞内Aph-1的蛋白表达变化.结果 Western blotting结果显示,特异性蛋白酶体抑制剂能显著提高神经细胞内源性和外源性Aph-1的蛋白表达水平,且高度特异的蛋白酶体抑制剂乳胞素（Lactacystin）对Aph-1表达的增强效应呈剂量依赖性和时间依赖性;而非蛋白酶体蛋白酶抑制剂ALLM和溶酶体酶抑制剂对Aph-1的蛋白表达无影响;Pulsechase结果显示,蛋白酶体抑制剂可增强细胞内新合成Aph-1的表达水平,其增强作用是通过阻止35S-Aph-1的蛋白降解实现;免疫荧光双标结果显示,Aph-1与泛素在细胞内共存.结论 神经细胞内Aph-1的蛋白降解由蛋白酶体途径介导,与溶酶体途径无关;Aph-1在降解之前经泛素化修饰.

“益肾调督”电针法对阿尔茨海默病小鼠大脑海马老年斑形成的影响

目的:观察"益肾调督"电针法对APP/PS 1双转基因阿尔茨海默病(AD)小鼠海马区老年斑(SP)及其相关蛋白表达的影响,探讨电针改善AD的机制。方法:APP/PS 1双转基因AD小鼠随机分为模型组、电针两疗程组和电针三疗程组,每组6只;6只雄性野生型小鼠为对照组。给予各电针组小鼠"百会"和双侧"肾俞"电针治疗,每天1次,7d为1个疗程,分别进行2个或3个疗程。Morris水迷宫实验观察各组小鼠记忆和空间探索能力,免疫组化法检测海马区SP的表达情况,Western blot法检测海马区淀粉样前体蛋白(APP)、β-分泌酶1(BACE 1)和胰岛素降解酶(IDE)的表达水平。结果:与对照组相比,模型组小鼠的逃避潜伏期和搜索路径均明显增加(P<0.01,P<0.05),穿越原平台的次数明显减少(P<0.01);与模型组相比,两治疗组小鼠的第5天逃避潜伏期和第4天、第5天搜索路径均明显缩短(P<0.01),穿越原平台的次数明显增加(P<0.01);与电针两疗程组相比,电针三疗程组的第5天逃避潜伏期和第4天、第5天搜索路径也明显缩短(P<0.05,P<0.01),穿越原平台的次数明显增加(P<0.05)。对照组小鼠海马区无SP阳性斑块;模型组SP数目较对照组明显增加(P<0.01);与模型组相比,两治疗组海马区的SP数目均明显减少(P<0.01);与电针两疗程组相比,电针三疗程组SP数目明显减少(P<0.01)。模型组小鼠海马区APP、BACE 1表达水平明显高于对照组(P<0.01),IDE表达水平明显低于对照组(P<0.01);两治疗组海马区APP、BACE 1表达水平明显低于模型组(P<0.01),IDE表达水平明显高于模型组(P<0.01);电针三疗程组海马区APP、BACE 1表达水平明显低于电针两疗程组(P<0.01,P<0.05),IDE表达水平明显高于电针两疗程组(P<0.05)。结论:"益肾调督"电针法可降低AD小鼠海马区APP、BACE 1表达,提高IDE的表达,从而减少海马区SP的沉积,改善其学习记忆和空间探索能力。

电针联合二甲双胍对APP/PS1小鼠认知功能和老年斑的影响

目的:比较分析电针、二甲双胍和二者联合对APP/PS1小鼠认知功能的影响,探索一种更优的治疗方式。方法:将3月龄雄性APP/PS1小鼠随机分为模型组、药物组、电针组和针药联合组,每组6只;另选取6只同月龄雄性野生C57小鼠作为对照组。电针组选取"百会""肾俞"穴行电针干预,15 min/次,1次/d,每周休息1 d;药物组予二甲双胍300 mg·kg^(-1)·d^(-1)灌胃治疗;针药联合组行药物和电针共同干预,均连续干预4周。采用Morris水迷宫实验检测小鼠认知功能,HE染色观察大脑皮层及海马神经元形态,免疫组织化学法观察大脑皮层及海马老年斑(SPs),Western blot法检测大脑皮层及海马中与SPs形成密切相关的β-分泌酶(BACE1)和胰岛素降解酶(IDE)的表达。结果:与对照组相比,模型组小鼠逃避潜伏期延长(P<0.01),穿越原平台次数减少(P<0.01),大脑皮层及海马神经元排列紊乱,形态不完整,SPs数量明显增加(P<0.01),BACE1蛋白表达明显升高(P<0.01),IDE蛋白表达明显降低(P<0.01)。与模型组相比,药物组、电针组和针药联合组小鼠逃避潜伏期缩短(P<0.01),穿越原平台次数增加(P<0.01),海马神经元形态、数量、排列改善,大脑皮层及海马区SPs数量减少(P<0.01),BACE1蛋白表达降低(P<0.01),IDE蛋白表达升高(P<0.01)。与药物组和电针组相比,针药联合组小鼠认知功能、大脑皮层及海马区SPs的数量、BACE1和IDE蛋白表达等的变化更显著(P<0.01)。结论:针药联合治疗改善AD小鼠的认知功能及SPs的效果更好,可能与调节BACE1和IDE生成过程有关。