胰腺癌的外科治疗现状

胰腺癌预后极差，对放、化疗均不敏感，目前惟一有可能治愈的方法仍是根治性切除．但切除率很低，胰头癌切除率仅10％～15％，而胰体尾癌的切除率更低。

骨形态发生蛋白在乳腺癌增殖、转移中作用的初步筛选

目的筛选获得可能与乳腺癌骨转移密切相关的骨形态发生蛋白(BMPs),为后期进一步研究乳腺癌骨转移的机制奠定基础。方法收集10种不同的人乳腺癌细胞株,RT-PCR检测14种BMPs的表达。选择表达频率和水平较高的BMPs,以腺病毒为介导感染高转移性的人乳腺癌细胞株MDA-MB-231。用细胞生长曲线、划痕修复实验及Transwell细胞侵袭实验等检测其增殖、运动和侵袭能力的改变。结果在10种不同的人乳腺癌细胞株中,BMPs普遍表达,其中BMP2、4、7、11表达频率和水平较高。以腺病毒BMP2、4、7、11感染高转移性的人乳腺癌细胞株MDA-MB-231,生长曲线结果显示BMP2组和BMP4组生长曲线向左上移位,而BMP7组和BMP11组向右下移位;划痕修复实验提示BMP2组和BMP4组划痕愈合提前,而BMP7组和BMP11组延迟;与空病毒组(105±7.0)相比,BMP2组(125±10.0)和BMP4组(130±12.5)穿膜细胞数增加,而BMP7组(82±5.0)和BMP11组(71±9.5)的穿膜细胞数显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论BMPs与乳腺癌的发生和转移密切相关,尤其是BMP2、4、7、11值得进一步关注。

ALB启动子基因报告质粒的构建及VEGF对肝前体细胞诱导分化作用的初步研究

目的:构建白蛋白(ALB)启动子调控的荧光素酶报告质粒,以方便检测ALB的表达.并用该方法初步检测血管内皮生长因子(VEGF)对肝前体细胞分化诱导的影响.方法:PCR扩增ALB的启动子及增强子片段,插入pBGLuc载体,构建pBGLuc-ALB荧光素酶报告质粒,并经经酶切、测序及荧光素酶活性检测验证.包装成逆转录病毒感染肝前体细胞株E14.5d,构建稳定细胞株E14.5-ALB-LUC.以重组腺病毒载体Ad-VEGF感染E14.5-ALB-LUC细胞株,通过荧光素酶活性检测观察其分化程度,并用RT-PCR、PAS染色验证其结果.结果:构建pBGLuc-ALB重组质粒,经酶切、测序及荧光素酶活性检测证实其正确效性.建立稳定细胞株E14.5-ALB-LUC.Ad-VEGF感染后,与对照组相比,荧光素酶的表达明显升高.RT-PCR证实肝前体细胞分化早期指标DLK,CK19降低,晚期指标ALB升高.PAS染色可见阳性细胞明显增加.结论:成功构建pBGLuc-ALB荧光素酶报告质粒,为进一步研究肝前体细胞分化打下基础,并在此基础上发现VEGF能诱导肝前体细胞分化为类肝细胞.

BMP4-siRNA重组腺病毒的构建及鉴定

目的构建靶向抑制骨形态发生蛋白BMP4基因RNA的siRNA腺病毒,为进一步研究其在乳腺癌骨转移中的作用打下基础。方法以PCR扩增获得BMP4全长片段,插入筛选质粒pSOS载体,同时设计6段靶向BMP4基因RNA的干扰片段,分别经酶切、连接及鉴定后获得pSOS-sirBMP4。脂质体转染293细胞,根据荧光表达量筛选获得干扰效率较高的4个干扰片段,插入穿梭质粒pSES-HUS,经重组、HEK-293细胞包装获得BMP4-siRNA腺病毒。感染乳腺癌细胞系MDA-MB-231,RT-PCR、Western blot检测其干扰效率。MTT法检测其对MDA-MB-231细胞增殖的影响。结果筛选获得4个干扰效率较高的片段,插入穿梭质粒,经重组、包装获得腺病毒pAd-sirBMP4。感染乳腺癌细胞系MDA-MB-231后,明显抑制BMP4的表达并促进MDA-MB-231细胞增殖。结论成功构建具有较高干扰效率的腺病毒pAd-sirBMP4,为进一步研究BMP4在乳腺癌中的作用打下基础。

下肢动脉硬化闭塞症治疗方法的研究现状

下肢动脉硬化闭塞症(1ower extremity atherosclerotic occlusive disease,LEAOD)是老年人常见疾病。随着社会老龄化和生活水平的提高,LEAOD的发病率逐年增加,对该病的治疗也受到广泛关注[1]。其经典的治疗方法包括:药物、内膜下血管成形术、旁路转流术和球囊扩张支架成形术等,但均有一定的指征和局限性。现就下肢动脉硬化闭塞症的各种治疗方法综述如下。

Skp2反义寡核苷酸对大肠癌细胞SW480生长和增殖的影响

目的研究S期激酶相关蛋白2反义寡核苷酸(Skp2antisense oligodeoxynucleotide,Skp2ASODN)对大肠癌细胞生长和增殖的影响及可能机制。方法采用脂质体介导不同浓度的Skp2ASODN转染SW480细胞,终浓度分别设置0.050、0.125、0.250、0.500、1.000、2.000、4.000μmol/L,以Skp2无义寡核苷酸(NSODN)及空白组作对照。采用倒置显微镜观察、噻唑蓝比色法(MTT)和流式细胞术(FCM),观察不同浓度的Skp2ASODN对SW480细胞生长、增殖和细胞周期的影响。运用RTPCR和免疫细胞化学检测SW480细胞中Skp2、P27kip1 mRNA和蛋白表达情况。结果倒置显微镜下观察见SW480细胞形态未见改变,生长速度减慢。Skp2ASODN浓度达到0.125μmol/L时,抑制率为14.48%(P<0.05)。随着Skp2ASODN浓度增加,其对SW480细胞的生长和增殖的抑制作用增强(P<0.01),并存在浓度依赖效应。SW480细胞G0/G1期增多(P<0.01),S期减少(P<0.05),细胞周期进程受到阻滞。RT-PCR及免疫细胞化学显示:Skp2mRNA及Skp2蛋白表达降低(P<0.05),P27kip1mRNA未见改变(P>0.05),但其蛋白表达明显升高(P<0.01)。结论 Skp2ASODN对SW480细胞的生长和增殖具有抑制作用。其可能的机制为通过Skp2ASODN的基因封闭作用,降低了Skp2对P27kip1泛素化降解作用,从而阻滞细胞周期进行。

3次胃塑形技术在腹腔镜袖状胃切除术中的应用体会

目的探讨3次胃塑形技术在腹腔镜袖状胃切除术中的应用价值。方法回顾性分析2021年1–12月期间成都市第三人民医院普外科肥胖与代谢性疾病中心采用3次胃塑形技术行腹腔镜袖状胃切除术患者的临床资料,记录手术时间和术后30 d内恶心/呕吐、胃漏、出血、梗阻/扭转等短期并发症发生情况。结果共收集966例患者,其中男294例,女672例;年龄16~65岁、(32.8±8.6)岁;身体质量指数27.5~47.2kg/m2、(34.2±3.5)kg/m2。手术均顺利完成,无中转开腹,手术时间为45~170 min、(100.2+33.4)min。术后出现恶心/呕吐484例(50.10%),出血2例(0.21%,腹腔内出血1例、胃腔内出血1例),胃漏1例(0.10%,B级漏),无围手术期死亡病例。住院时间4~24 d、(7.55±2.47)d。术后随访30 d内因恶心/呕吐再次入院患者2例(0.21%),经内科保守治疗后缓解出院。结论采用3次胃塑形技术的袖状胃切除术更符合生理,安全性较好,适宜推广。

减重代谢手术在肥胖症综合治疗中的应用

肥胖症是一种以异常或过度脂肪蓄积并威胁人体健康为特征的疾病状态。随着经济社会的飞速发展和生活方式的改变,肥胖在我国高度流行并成为威胁人群健康的重要疾病。与传统非手术治疗不同,减重代谢手术疗效确切,不易反弹,安全性好,临床获益证据充分,能够让许多肥胖症尤其是中重度肥胖症患者能够得到充分的救治,目前已经成为肥胖症综合治疗中的一个重要手段。笔者拟从减重手术指征、手术方式选择和围手术期多学科干预3个方面对减重代谢手术在肥胖症综合治疗中的运用进行阐述。

乌斯他丁和环磷酰胺对乳腺癌细胞增殖和侵袭及MMP-9表达的影响

目的观察乌斯他丁(UTI)和环磷酰胺(CTX)对体外培养的乳腺癌细胞MCF-7(雌激素受体阳性)和乳腺癌细胞MDA-MB-231(雌激素受体阴性)增殖、侵袭及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响。方法将体外培养的乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231分别分为8组:对照组、UTI高、中、低剂量组、CTX组、CTX+UTI高、中、低剂量组,分别用相应药物处理。采用MTT法检测细胞的增殖能力;流式细胞仪分析细胞周期;RT-PCR检测细胞MMP-9基因的表达;Boyden小室侵袭试验检测两种细胞的浸袭能力。结果UTI可明显抑制MCF-7和MDA-MB-231细胞的增殖,使细胞周期阻滞在G2/M期,并能使2株细胞中MMP-9基因的转录水平下降,细胞的增殖侵袭能力降低。CTX与UTI联合应用,其作用效果优于CTX单独使用。结论UTI能增强CTX诱导的乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231的增殖抑制作用,二者具有协同效应。其机制可能与UTI降低细胞MMP-9基因的表达等有关。

乌司他丁和泰索帝对人乳腺癌细胞MDA-MB-231中uPA、uPAR、ERK表达的影响

目的探讨乌司他丁(Ulinastatin,UTI)和泰索帝(Taxotere,TXT)对体外培养的人乳腺癌细胞MDA-MB-231中u-PA、uPAR、ERK表达的影响。方法将MDA-MB-231(ER-)细胞分为4组:UTI组(UTI 800 U/ml)、TXT组(TXT 3.7μg/ml)、UTI+TXT组(UTI 800 U/ml+TXT 3.7μg/ml)、对照组(等量生理盐水)。给药后24 h,分别采用荧光定量RT-PCR检测各组细胞中uPA、uPAR、ERK基因mRNA的水平,Western blot法检测各组细胞中uPA、uPAR、p-ERK1/2蛋白的表达水平。结果 UTI组和UTI+TXT组MDA-MB-231(ER-)细胞中uPA和uPAR基因mRNA的水平均明显低于对照组(P<0.05),而TXT组中二者的表达水平均明显高于对照组(P<0.01),各组间ERK基因mRNA的水平差异无统计学意义(P>0.05);UTI组和UTI+TXT组中uPA、uPAR和p-ERK1/2蛋白的表达水平均明显低于对照组(P<0.01),而TXT组中3种蛋白的表达水平均明显高于对照组(P<0.05)。结论UTI可抑制MDA-MB-231细胞中uPA、uPAR、p-ERK的表达,而TXT可上调三者的表达。