造血干细胞移植后归巢的研究进展

近年来，造血干细胞移植（Hematopoietic stem cell trans—plantation，HSCT）在国内外已得到广泛开展，成为治疗恶性血液病、多种实体瘤、某些遗传性疾病等的有效方法，尤其在白血病治疗中应用较多Ⅲ。目前常用的移植方法是从外周静脉输注造血干细胞（Hematopoietic stem cell，HSC），HSC随血液循环，最初出现在包括骨髓、脾、肝、肺、甲状腺等多个器官，而后特异性地停留在骨髓（鼠类还有脾）中，

骨髓间充质干细胞移植对大鼠溃疡性结肠炎的修复

目的:观察移植骨髓间充质干细胞(BMSCs)对溃疡性结肠炎(UC)大鼠结肠病变的修复.方法:分离培养、荧光标记SD大鼠BMSCs.A,B,C组大鼠制作UC模型,D组为非模型组.4组大鼠均经尾静脉注射1 mL液体:A组为生理盐水;B,D组为BMSCs;C组为加表皮生长因子(EGF)的BMSCs.移植后3,7,14 d各处死5只大鼠,荧光显微镜下观察荧光标记BMSCs在结肠的分布,光镜观察结肠病变以及TNF-α和IL-10的表达.结果:移植第3日各组均可见BMSCs分布于结肠黏膜,病灶处多于正常结肠黏膜.移植第14日,B,C组结肠BMSCs高于D组(P<0.05);与A组比较,B,C组结肠黏膜高表达IL-10,低表达TNF-α,其黏膜损伤修复程度也明显优于A组.B,C组间差异不明显(P>0.05).结论:移植BMSCs可促进UC大鼠结肠损伤的修复.单次给予EGF不能促进BMSCs向病灶的迁移和损伤的修复.

姜提取物通过抑制炎症因子表达减轻高果糖喂养SD大鼠的肾损伤

目的观察姜提取物对高果糖喂养SD大鼠肾损伤的影响,并探讨其潜在的机制。方法 20只雄性SD大鼠随机均分为对照组、果糖组、20 mg/kg姜提取物组、50 mg/kg姜提取物组。观察大鼠的一般情况及肾脏的组织病理学变化;反转录PCR检测肾脏单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)mRNA的表达;ELISA检测肾脏组织匀浆上清中MCP-1、TNF-α、IL-6含量变化。结果与对照组相比,果糖组大鼠肾质量和肾指数明显降低,并伴有肾小管损伤;50 mg/kg姜提取物能明显改善果糖组大鼠肾小管损伤,抑制大鼠肾脏MCP-1、TNF-α、IL-6 mRNA的表达(P<0.05);50 mg/kg姜提取物能显著降低果糖组大鼠肾脏组织匀浆上清中MCP-1、TNF-α、IL-6的含量(P<0.05)。结论姜提取物能够改善果糖所致肾损伤,可能与抑制炎性细胞因子的表达有关。

白血病K562细胞株中CD34^+细胞群的分离及其生物学特性

目的分离白血病K562细胞株中CD34+细胞群,并分析其生物学特征,为从干细胞角度治疗白血病提供实验依据。方法采用免疫磁性分选法分离K562细胞中CD34+细胞群,台盼蓝拒染法检测细胞活性;流式细胞术检测CD34+细胞比例及细胞周期;单细胞克隆培养检测CD34+细胞自我更新能力;RT-PCR法检测CD34+细胞分化相关指标促红细胞生成素(Erythropoietin,EPO)和粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(Granulocyte macrophage colony stimulatingfactor,GM-CSF)基因mRNA的转录水平;并检测CD34+细胞耐药蛋白P-gp(P-glycoprotein)的表达。结果免疫磁性分选法可有效分离出CD34+细胞群,细胞活性为99%～100%;分离的CD34+细胞含量占细胞总数的78.5%～85.3%,细胞大部分处于静止状态,G0/G1期细胞比例达80%左右,显著高于分离前的K562细胞;CD34+细胞群具有形成混合集落的能力;与K562细胞相比,CD34+细胞EPO和GM-CSF基因mRNA的转录水平明显下降(P<0.01),P-gp表达阳性。结论成功从K562细胞株中分离了CD34+细胞群,其具有自我更新和多向分化的能力,表明其具有白血病干/祖细胞的生物学特点。

人参皂苷Rg_(1)对移植性白血病模型小鼠的作用

目的研究人参皂苷Rg_(1)对移植性白血病模型小鼠的作用。方法采用免疫磁性分选法(MACS)从K562细胞中分离、纯化CD34^(+)CD38^(-)人白血病干细胞(CD34^(+)CD38^(-)LSCs),流式细胞术检测分选细胞纯度,台盼蓝染色测定分选细胞活性。将6~8周雌性NOD/SCID小鼠27只随机分为对照组、模型组、人参皂苷Rg_(1)(200 mg/kg)组,每组9只,模型组和人参皂苷Rg_(1)组通过尾iv移植CD34^(+)CD38^(-)LSCs构建白血病小鼠模型,ip给药30 d。观察各组小鼠一般情况及腹部包块变化;全自动血常规检测仪检测外周血白细胞、红细胞、血红蛋白、血小板水平;免疫组化法检测肝、脾脏病理学变化;流式细胞仪分析骨髓细胞周期;CCK-8法检测各组骨髓细胞的增殖能力;细胞免疫荧光染色鉴定骨髓细胞CD34阳性表达情况。结果分选前K562细胞中CD34^(+)CD38^(-)LSCs细胞群百分比为(9.64±1.14)%,分选后CD34^(+)CD38^(-)LSCs纯度可达(96.45±1.63)%;台盼蓝染色显示分选后细胞活性为(95.26±2.16)%。与对照组比较,模型组小鼠腹部包块明显,生存情况较差,体质量显著下降(P<0.05);白细胞数显著增高,红细胞数、血红蛋白水平、血小板数均显著下降(P<0.05);肝、脾脏结构被破坏,有大量白细胞浸润;骨髓细胞周期检测显示G;/G;期比例显著下降(P<0.05),S期比例显著升高(P<0.05);骨髓细胞增殖活力显著升高(P<0.05)。与模型组比较,人参皂苷Rg_(1)组小鼠腹部包块明显减小,生存情况好转,体质量显著增加(P<0.05);白细胞总数显著下降(P<0.05),红细胞数、血红蛋白水平、血小板数均显著升高(P<0.05);肝、脾脏结构明显恢复;骨髓细胞G_(0)/G_(1)期比例显著升高(P<0.05),G_(0)/M期和S期比例显著下降(P<0.05)。细胞免疫荧光检测显示,模型组和人参皂苷Rg_(1)组中小鼠的骨髓细胞中存在大量的人源白血病细胞。结论 NOD/SCID小鼠尾iv移植CD34^(+)CD38^(-)LSCs可成功构建急性髓系白血病小鼠模型,人参皂苷Rg_(1)能有效缓解NOD/SCID小鼠的白血病症状。