改进的细粒棘球蚴生发细胞分离培养方法与鉴定

目的探讨细粒棘球蚴生发细胞原代培养的改进方法。方法剪碎自然感染的绵羊棘球蚴包囊组织,用胶原酶与胰蛋白酶等比混合液消化解离,对获得的细胞以显微镜、电镜以及免疫荧光试验方法进行形态学研究及鉴定。结果分离出足量细胞进行体外培养且细胞具有生发细胞样形态和免疫特征。结论改良的胶原酶消化法是一种简单有效的生发细胞分离培养方法 。

刚地弓形虫培养上清对卵巢癌SKOV-3细胞的影响

目的:研究体外培养条件下的弓形虫培养上清对卵巢癌细胞SKOV-3细胞增值的影响及诱导其凋亡的情况.方法:取对数生长期的SKOV-3细胞(数量为5×107/L)分别接种于不同细胞培养板,对照组加入RPMI-1640孵育,试验组加入相同体积不同数量(3×1010/L,6×1010/L,12×1010/L)弓形虫速殖子培养上清,四甲基氮噻唑蓝(MTT)法检测吸光度(A490nm值)并计算SKOV-3细胞增值抑制率;Annexin-V-FITC/PI染色细胞后上流式细胞仪检测各个时间点细胞凋亡率;并以荧光显微镜观察SKOV-3细胞形态改变情况;以琼脂糖凝胶电泳观察SKOV-3细胞凋亡DNA条带.结果:MTT法检测结果显示SKOV-3细胞增殖抑制率随着弓形虫速殖子培养上清数量和作用时间增加均明显增大,12×1010/L数量组72h抑制率最高可达(33.52±2.63)%,弓形虫速殖子培养试验组抑制率与对照组之间比较差异均有统计学意义(P<0.05).弓形虫培养上清流式细胞仪检测显示SKOV-3细胞凋亡率随着时间增加有升高趋势,48h达到凋亡最高值(18.23%),48h后凋亡率开始下降,死亡率增加.荧光显微镜观察到试验组培养不同时项的SKOV-3细胞出现不同时期凋亡特征性改变.琼脂糖凝胶电泳见DNA梯形条带.结论:弓形虫速殖子培养上清对体外培养SKOV-3细胞增殖有明显的抑制作用,并可诱导SKOV-3细胞凋亡.

香菇多糖促BALB/c小鼠腹腔巨噬细胞抗弓形虫感染的研究

目的:研究香菇多糖预处理对弓形虫感染后BALB/c小鼠巨噬细胞免疫功能的影响。方法:将45只周龄、体重相近的雌性BALB/c小鼠随机均分为3组,即空白对照(无菌生理盐水)、模型(无菌生理盐水)和香菇多糖组(0.5g·L-1)。各组小鼠以每次1mL、每天1次腹腔注射给药,连续给药5d后,第6天模型与香菇多糖组各用3×104·mL-1弓形虫速殖子腹腔接种,空白对照组不予采取处理措施。于弓形虫感染第2、4、6天,取各组小鼠腹腔巨噬细胞培养,测其上清液相关细胞因子和一氧化氮(NO)水平。结果:相同感染时间内,与模型组比较,香菇多糖组的上清液中白介素-12(IL-12)、γ-干扰素(IFN-γ)的含量显著升高(P<0.01),NO表达水平增强(P<0.01)。结论:香菇多糖能够有效激发弓形虫RH株感染的BALB/c小鼠Th1型免疫应答的建立,对抗弓形虫感染。

刚地弓形虫RH株感染对BALB/c小鼠情绪行为的影响

目的研究刚地弓形虫RH株感染对BALB／c小鼠学习记忆行为的影响及可能机制。方法将72只周龄、大小相近的雄性BALB／c小鼠采用随机数字表分为生理盐水对照组与不同数量（3×10^3／ml、3×10^4／ml、3×10^5／m1）弓形虫RH株感染组，每组18只。于感染第5周从每组各随机抽取6只分别进行高架十字迷宫实验、旷场实验及强迫游泳实验，观察各组小鼠在实验中情绪行为变化。并记录各项指标进行统计分析。结果在高架迷宫试验与旷场实验中，3×10^3／ml弓形虫感染组小鼠与生理盐水对照组小鼠比较，各项行为学指标无明显差异。在3×10^4／ml、3×10^5／ml弓形虫感染组小鼠与对照组小鼠比较出现明显降低（P〈0．05）．以3×10^5／ml感染组最为明显，其小鼠运动活力（0E＋cE）、进入开放臂次数比例（OE％）、开放臂停留时间比例（OT％）小鼠爬行总格数、中央格在总格数中比例分别为11．08±2．12、28．73±0．59％、25．62±2．33％、32．30±17．26、2．42±0．65％。在强迫游泳试验中，各弓形虫感染组小鼠游泳的静止时间均高于对照组小鼠（P〈0．05），3×10^5／ml感染组静止时间最长，达226．6±1．9S。结论刚地弓形虫RH株感染可引起小鼠情绪行为改变，具有焦虑抑郁倾向。