新型吴茱萸碱衍生物抗小细胞肺癌活性效应的初步评价

目的研究吴茱萸碱(evodiamine, EVO)的两种衍生物:硝基吴茱萸碱衍生物(10-nitro evodiamine derivatives, END)与氨基吴茱萸碱衍生物(10-amino evodiamine derivatives, EAD)对小细胞肺癌细胞株H1688的抗癌活性及机制。方法 H1688细胞分别用不同浓度的吴茱萸碱EVO、END、EAD处理24、48、72 h后用MTT法检测其存活率;10μmol/L的EVO、END、EAD处理H1688细胞24 h后,流式细胞术检测其凋亡与周期;同样浓度处理48 h后提取总蛋白,Western blot检测Caspase 12、Caspase 9、Caspase 3、细胞色素C(cytochome C, Cyt C)的表达。结果 MTT结果显示,0.625μmol/L的END或EAD处理24 h后,即可观察到药物对H1688的抑制作用,20μmol/L EVO、END和EAD处理24、48、72 h后,与0μmol/L组存活率相比显著降低。END和EAD处理组H1688存活率分别为16.45%和61.20%(P_(END)=0.000,P_(EAD)=0.046, 24 h)、9.10%和43.37%(P_(END)=0.000,P_(EAD)=0.000, 48 h)、5.24%和29.55%(P_(END)=0.000,P_(EAD)=0.000, 72 h);而EVO处理组存活率为60.81%(P=0.038,24 h)、21.99%(P=0.000,48 h)、18.51%(P=0.000,72 h),其中20μmol/L END对H1688抑制效果最好。10μmol/L的END、EAD处理H1688 24 h后,细胞凋亡率明显升高,凋亡率分别为54.98%(P=0.000)和19.73%(P=0.029),且分别有79.78%(P=0.001)和77.72%(P=0.001)的细胞被阻滞在G_2/M期。END、EAD处理48 h后,与Control组相比,H1688细胞中Caspase 9(P_(END)=0.011,P_(EAD)=0.026)、Caspase 12(P_(END)=0.031,P_(EAD)=0.018)、Caspase 3(P_(END)=0.002,P_(EAD)=0.043)、Cyt C(P_(END)=0.023,P_(EAD)=0.028)等凋亡相关蛋白均上调。与EVO相比,END对Caspase 3(P=0.026)和Cyt C(P=0.002)作用都明显强于EVO,而EAD对Caspase家族与Cyt C的作用则与EVO类似。结论 EVO的两种衍生物END、EAD都对小细胞肺癌细胞株H1688有体外抗肿瘤作用,这种作用呈时间、浓度依赖性,END体外抗肿瘤效果更好。