芍药苷对局灶性大鼠脑缺血再灌注脑组织中SOD、Nrf2表达的影响及神经保护作用

目的:研究芍药苷(paeoniflorin,PF)对局灶性大鼠脑缺血再灌注模型脑组织中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、核因子E2相关因子2(nuclear factor E2-related factor 2,Nrf2)在各时间点的表达情况及其神经保护作用。方法:将108只健康成年雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、给药组,每组在3、6、12、24、48、72 h进行神经功能评分,黄嘌呤氧化酶法测定SOD活性,RT-PCR、Western blot技术测定Nrf2 mRNA、蛋白分子的表达。结果:与假手术组相比,模型组的神经功能评分明显升高,SOD活性明显下降,Nrf2的表达有所增加,差异具有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,给予PF(20 mg/kg)能使模型组的神经功能评分降低,SOD活性有所升高,Nrf2的表达持续上调,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:PF能通过提高机体消除自由基能力和增加Nrf2表达来减轻局灶性脑缺血再灌注损伤后自由基引起的氧化损伤作用,从而对缺血性脑组织起到脑保护作用。

β-石竹烯通过上调miR-183的表达减轻小鼠缺血性中风损伤

目的探讨β-石竹烯(β-caryophyllene,BCP)是否对缺血性中风有保护作用,以及这种保护作用是否与miR-183和NF-κB的表达有关。方法在动物实验中,将90只C57BL/6雄性小鼠(20~25 g)编号后,根据随机数字法分为3组(n=30):假手术组、模型组、BCP(72 mg/kg)组。模型组和BCP(72 mg/kg)预处理组中动脉栓塞1 h后,再灌注24 h,构建小鼠缺血性中风模型。对小鼠进行神经行为学评分,TTC法测量小鼠脑梗死体积,HE染色和Nissl染色切片观察小鼠大脑神经元、炎性细胞和凋亡小体的病理变化,检测miR-183、NF-κB、p-NF-κB、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)的表达,双荧光素酶标记法检测miR-183与NF-κB的靶向关系。提取小鼠的原代神经元,分为3组:正常组、糖氧剥夺(oxygen-glucose deprivation,OGD)损伤组、BCP(10μmol/L)组。OGD损伤组与BCP(10μmol/L)预处理组神经元糖氧剥夺1 h后,正常培养24 h,构建神经元缺血性中风模型。观察神经元形态和数量的变化,测定细胞损伤率,测定神经元内miR-183、NF-κB和p-NF-κB的表达,检测炎性因子在神经元内的表达。结果动物实验中,与假手术组相比,模型组小鼠神经行为出现障碍,脑梗死体积增大(P<0.05)。脑组织切片HE染色和Nissl染色显示,缺血一侧的神经元等细胞受到严重损伤。同时,miR-183的表达下降(P<0.05),NF-κB被活化成p-NF-κB,炎性因子NF-κB、IL-1β和IL-6表达升高(P<0.05)。与模型组相比,BCP预处理能改善造模后小鼠神经行为障碍,减少脑梗死体积,保护神经元的形态,减少炎性细胞和凋亡小体的数量,增加皮质中的尼氏阳性细胞数量(P<0.05)。BCP预处理上调miR-183的表达,抑制NF-κB的活化,降低炎性因子的表达(P<0.05)。在神经元实验中,OGD后神经元受损严重,而BCP预处理则保护了神经元,降低神经元死亡率(P<0.05)。BCP预处理还上调神经元中miR-183的表达,抑制NF-κB的活化,降低神经元中炎性因子的表达(P<0.05)。结论缺血性中风后,BCP可能通过上调miR-183表达进一步抑制NF-κB的活化,减少炎性因子释放,从而减轻炎症,发挥脑保护作用。

手性自组装短肽Sciobio Ⅱ、Sciobio Ⅳ用于细胞三维培养和兔前交叉韧带损伤修复

目的 探究手性自组装短肽SciobioⅡ、 SciobioⅣ对前交叉韧带损伤修复效果。方法 通过圆二色谱仪、透射电镜、苯胺蓝染色分析自组装短肽SciobioⅡ、 SciobioⅣ的结构;利用吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)染色、异硫氰酸荧光素标记的鬼笔环肽染色检测三维环境中人韧带成纤维细胞(HLF)的活性和形态;建立兔前交叉韧带损伤模型,通过HE染色、免疫组织化学技术分析短肽对韧带修复的作用。结果 短肽SciobioⅡ、 SciobioⅣ可在盐离子触发下形成稳定的β折叠,并进一步自组装为纳米纤维网络结构,满足细胞三维培养条件;在自组装短肽构成的三维环境中HLF细胞呈圆球形空间生长且生长良好;动物实验表明,短肽SciobioⅡ可促进兔前交叉韧带损伤修复。结论 手性自组装短肽SciobioⅡ、 SciobioⅣ可用于细胞三维培养及韧带组织修复。

DC靶向适配体修饰的载铜绿假单胞菌DNA疫苗递送系统的构建及体外评价

构建了一种DC靶向适配体修饰的铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)DNA疫苗递送系统。采用乙醇注入法制备阳离子脂质体,静电吸附法制备载pVAX1-OprF-VP22的阳离子脂质体(Lip-pOprF-VP22),探讨不同DOTAP/pDNA质量比的Lip-pOprF-VP22对pVAX1-OprF-VP22的包封效果、对DC2.4的细胞毒性及转染率,筛选最佳质量比的Lip-pOprF-VP22测定其粒径及Zeta电位;后插法制备DC靶向适配体修饰的载pVAX1-OprF-VP22的阳离子脂质体(Apt-Lip-pOprF-VP22),检测其转染DC2.4后OprF蛋白的表达量及对小鼠骨髓来源树突状细胞(bone marrow-derived dendritic cells,BMDCs)成熟的影响。结果表明,Lip-pOprF-VP22随着DOTAP/pDNA质量比增加包封率逐渐增加,当质量比为5∶1时即能很好的包封pVAX1-OprF-VP22;当Lip-pOprF-VP22作用于DC2.4 24 h或48 h后,不同质量比的Lip-pOprF-VP22对DC2.4的存活率均在80%以上;当DOTAP/pDNA质量比由2∶1增加到10∶1,转染率表现为先增加、后降低的趋势,其中DOTAP/pDNA质量比为4∶1、5∶1时转染率相对较高;当DOTAP/pDNA质量比为5∶1时,Lip-pOprF-VP22粒径为(171.67±1.27)nm,Zeta电位为(11.30±0.57)mV;Apt-Lip-pOprF-VP22转染DC2.4后可表达更多OprF蛋白且可明显促进BMDCs的成熟。

长链非编码RNA调控脑缺血/再灌注损伤作用机制的研究进展

缺血性脑卒中(ischemia stroke,IS)具有高发病率和高致死率特征。现有治疗IS的方法临床效果有限,仍需探寻治疗IS的新方法。越来越多的研究证实长链非编码RNA(long noncoding RNA,LncRNA)对脑缺血/再灌注损伤有保护作用,被期望成为治疗IS的潜在靶点。本文就LncRNA对脑缺血/再灌注损伤的保护作用及其机制研究进展作一综述,以期为LncRNA对IS作用的临床研究提供思路;提出在进一步做临床研究前,需要研究LncRNA是否有诱发IS颅内出血转化的安全性问题,并设计研究适合人用的剂型和给药方式。

贝沙罗汀上调线粒体自噬减轻小鼠脑缺血/再灌注损伤

目的探讨贝沙罗汀(Bexarotene)对脑缺血/再灌注(ischemia reperfusion,I/R)损伤的保护作用及对线粒体自噬的影响。方法将C57BL/6雄性小鼠随机分为假手术组(Sham)、模型组(I/R)、药物组(Bexarotene),运用线栓法构建小鼠中动脉栓塞(transient middle cerebral artery occlusion,tMCAO)模型。术前连续5 d,每日一次腹腔注射给药。术后24 h对脑梗死体积及神经功能进行评价;HE染色观察海马神经元病理改变;免疫荧光染色及Western blot检测自噬相关蛋白LC3、P62及线粒体膜蛋白TOM20表达;透射电镜观察线粒体形态变化;检测线粒体ATP含量及膜电位水平评估各组线粒体功能。结果与I/R组相比,Bexarotene干预后可明显改善tMCAO小鼠神经行为学的评分,有效阻止tMCAO后脑组织形态学的改变,降低脑梗死体积,下调tMCAO小鼠脑组织P62、TOM20表达,上调LC3的表达,增加损伤部位自噬小体,维持了更好的线粒体功能。结论贝沙罗汀通过适度上调线粒体自噬,及时清除脑I/R后受损线粒体,减轻小鼠脑损伤。

贝沙罗汀对氧糖剥夺/再灌注诱导HT22损伤的神经保护作用及机制研究

目的探究贝沙罗汀对氧糖剥夺/再灌注(OGD/R)诱导的海马神经元细胞系HT22损伤的保护作用及其机制。方法在体外培养HT22,并将细胞随机分为对照组(Control组)、模型组(OGD/R组)、药物干预组(OGD/R+Bex组)、JNK特异性抑制剂(SP)组(OGD/R+SP组)及药物干预合并SP组(OGD/R+Bex+SP组),使用不同浓度贝沙罗汀(0.1~9μmol·L^(-1))或SP干预细胞,MTT检测HT22的生存率,流式细胞仪检测细胞凋亡水平,显微镜下观察各组细胞形态,Western blot检测各组细胞JNK信号通路相关蛋白的表达。结果在体外模拟的HT22损伤的OGD/R模型中,与OGD/R组相比,9μmol·L^(-1)贝沙罗汀能显著提高OGD/R状态下HT22生存率(P<0.05),减少HT22凋亡(P<0.05)。与OGD/R组相比,9μmol·L^(-1)贝沙罗汀能显著降低凋亡相关蛋白P-JNK、P-C-Jun、Bax、Cleaved-Caspase-3表达水平(P<0.05),减轻HT22损伤。结论贝沙罗汀在体外对OGD/R引起的HT22损伤具有保护作用,其作用机制可能与抑制JNK/Caspase-3信号通路的激活有关。