氰酸盐诱导人脐静脉内皮细胞氧化应激损伤

该研究探讨尿素水解产物氰酸盐(cyanate)对体外培养的血管内皮细胞氧化应激和功能障碍的作用。培养人脐静脉内皮细胞系(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),通过CCK8法检测氰酸盐对内皮细胞活力的影响;采用DCFH-DA法检测ROS水平;用比色法测定NO水平;分别用细胞免疫荧光和Western blot检测ICAM-1(intercelluar adhesion molecule-1)、e NOS(endothelial nitric oxide synthase)表达。氰酸盐呈浓度依赖性影响内皮细胞活力,与对照组相比,当氰酸盐浓度为1.00 mmol/L时,细胞活力受到明显抑制(P<0.05);与正常组和阴性对照组(甘露醇组)相比,氰酸盐诱导内皮细胞内ROS水平明显升高;NO水平明显减少(P<0.05)。免疫荧光结果显示,氰酸盐作用内皮细胞24 h后,ICAM-1荧光明显增强,e NOS明显减弱(P<0.05)。Western blot结果显示,内皮细胞内ICAM-1水平随氰酸盐浓度升高和负荷时间延长上调,而e NOS水平下调(P<0.05)。氰酸盐诱导血管内皮细胞氧化应激产生和功能障碍。

氰酸盐诱导氧化应激促进肾小管上皮细胞上皮–间充质转化

该研究探讨氰酸盐(cyanate)诱导肾小管上皮细胞氧化应激损伤和促进肾纤维化的作用。氰酸盐作用HK-2肾小管上皮细胞后, CCK8法检测其对细胞活力的影响;倒置显微镜观察细胞形态的改变; DCFH-DA法检测细胞ROS水平;细胞免疫荧光和Western blot分别检测E-cadherin、Fibronectin、α-SMA的表达; Western blot检测TGF-β的表达水平。结果显示, 2 mmol/L氰酸盐明显下调HK-2细胞的活力(P<0.05),细胞形态变为长梭形。氰酸盐作用24 h后, HK-2细胞内ROS水平呈浓度依赖性升高。免疫荧光和Western blot结果均显示,氰酸盐作用24 h后, HK-2的Fibronectin、α-SMA表达升高, E-cadherin表达下降; TGF-β的表达水平随氰酸盐浓度升高而上调(P<0.05)。以上结果表明,氰酸盐诱导肾小管上皮细胞产生过量ROS,上调TGF-β水平促进细胞上皮–间充质细胞转化(epithelia-mesenchymal transition, EMT)。