重庆地区儿童2000年至2004年首位革兰阴性细菌和阳性细菌的耐药性监测

目的了解重庆地区儿童感染的分离至临床标本的首位革兰阴性细菌和阳性细菌对常用抗生素的耐药趋势,指导临床合理使用抗生素。方法常规方法分离、培养细菌,应用美国德灵公司W alkAway-40细菌鉴定仪对2000年至2004年我院细菌室分离至临床标本的首位革兰阴性细菌和阳性细菌共2854株进行细菌鉴定及药敏试验。结果2000年至2004年检出的首位革兰阴性细菌和阳性细菌分别为大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌。2000年至2004年前5位革兰阴性菌5777株,革兰阳性菌1565株,其中大肠埃希菌2090株,金黄色葡萄球菌764株,分别占36.2%和48.8%;5年间大肠埃希菌对氨苄西林、头孢吡肟、头孢西丁、庆大霉素、亚胺培南、环丙沙星、头孢噻肟、头孢他啶的总耐药率分别为80.9%、37.5%、15.4%、54.0%、0.8%、34.0%、46.6%、46.2%;金黄色葡萄球菌对青霉素、红霉素、复方新诺明、万古霉素、阿莫西林/克拉维酸的总耐药率分别为95.6%、63.4%、5.8%、0%、11.0%。结论通过细菌耐药监测发现:大肠埃希菌对常用抗生素的总耐药率变化不大,金黄色葡萄球菌对常用抗生素的总耐药率有下降趋势,应引起临床医生重视。

探讨临床检验医师的培养方式

了解检验医师不同的培养目标,探讨检验医师培养方式,就如何通过检验医师在检验与临床相结合的岗位上的桥梁,对检验医师的培养模式上努力实践,对在临床科研、检验技能、临床疾病的诊断、治疗上进行临床思维的训练和实践动手能力的培养、分析提高学生的综合素质提出看法和建议,旨在检验医师培养工作中有所借鉴。

儿童肺炎克雷伯菌血流感染临床特征及菌株药物敏感性分析

目的 探讨儿童肺炎克雷伯菌血流感染(Klebsiella pneumoniae bloodstream infection, KPBSI)临床特征及肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae, KP)对常用抗菌药物的敏感性,为儿童KPBSI合理治疗提供参考。方法 回顾性分析2014年1月至2019年12月在重庆医科大学附属儿童医院住院的KPBSI患儿临床资料。结果 共纳入110例患儿,64例(58.2%)为院内感染,72例(65.5%)有基础疾病,以血液系统肿瘤最多见。110例患儿PRISMⅢ评分为16.0(7.0~20.8),其中74例(67.3%)发生脓毒症,15例(13.6%)发生脓毒性休克,18例(16.4%)发生呼吸衰竭,15例(13.6%)需有创机械通气,院内死亡共13例(11.8%)。KP菌株对阿米卡星、碳青霉烯类抗菌药物敏感率>90%,对头孢噻肟、头孢曲松和头孢他啶的敏感率分别为58.3%、60.9%和70.9%,对头孢哌酮/舒巴坦和哌拉西林/他唑巴坦的敏感率分别为59.5%和82.7%。检出ESBLs+菌株39株(39/86,45.3%),耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)菌株10株(10/110,9.1%),ESBLs+KP菌株和CRKP在各年龄组间分布无统计学差异。结论 儿童KPBSI多见于有基础疾病的患儿,脓毒症、脓毒性休克和呼吸衰竭发生率高;KP菌株对头孢他啶和哌拉西林/他唑巴坦敏感性较高,可经验性治疗轻症KPBSI患儿。

儿童金黄色葡萄球菌脓毒症抗生素治疗现状分析

目的回顾性分析金黄色葡萄球菌脓毒症患儿经验性抗生素治疗现状,探讨治疗模式对其预后的影响。方法将2014年1月至2017年8月收治的78例金黄色葡萄球菌脓毒症患儿,依据血培养报告金黄色葡萄球菌生长前经验性首选抗生素治疗类型分为碳青霉烯类治疗组(n=16)、β-内酰胺类治疗组(n=37)、万古霉素治疗组(n=15)、万古霉素+β-内酰胺类治疗组(n=10)。收集各组患儿的一般情况、基础疾病、急性生理功能与慢性健康状况评分系统Ⅱ(APACHE II)、免疫抑制剂使用史、甲氧西林耐药性及预后资料,进行回顾性分析。采用logistic回归探讨经验性抗生素治疗方案对金黄色葡萄球菌脓毒症患儿临床疗效及预后的影响。结果各组患儿一般情况、基础疾病、免疫抑制剂使用史、APACHE II评分、院内感染、MRSA检出率比较差异无统计学意义(P>0.05)。四组间脓毒性休克、院内死亡率比较差异有统计学意义(P<0.05),其中碳青霉烯类治疗组脓毒性休克、院内死亡率均最高(分别为69%、50%)。多因素logistic回归分析结果提示,经验性抗生素治疗类型是金黄色葡萄球菌脓毒症患儿发生脓毒性休克和院内死亡的独立危险因素(P<0.05);APACHE II评分≥15是金黄色葡萄球菌脓毒症患儿发生脓毒性休克的独立危险因素(P<0.05);与使用万古霉素治疗组相比,碳青霉烯类治疗组发生脓毒性休克和院内死亡的风险高(P<0.05)。结论不恰当的经验性使用抗生素治疗可能导致儿童金黄色葡萄球菌脓毒症预后不佳。临床疑诊金黄色葡萄球菌脓毒症患儿,不建议经验性使用碳青霉烯类抗菌药物治疗。

101例重型β-地中海贫血基因谱及其临床表现

目的:研究重型β-地中海贫血(β-Thalassemia major,β-TM)基因突变类型分布情况,探讨基因突变类型与临床特征的相关性。方法:回顾性分析2010年至2012年重庆医科大学附属儿童医院住院治疗的101例重型β-TM患儿临床资料,采用方差分析或秩和检验比较不同基因型的临床特征差异。结果:本研究中患儿主要症状及体征包括贫血(101例,100%)、黄疸(81例,80.2%)、肝脾肿大(70例,69.3%;89例,88.1%)。外周血大多呈小细胞低色素贫血表现,血红蛋白电泳及基因检查发现其中10例患儿为β-TM复合Hb E病,所有初诊Hb F均明显增高,平均64.39%;101例β-TM患儿中1例合并缺铁性贫血;基因检测共发现10种β基因突变类型,前5位突变位点为CD41-42(64/202,31.68%)、CD17(57/202,28.22%)、IVS-2-654(51/202,25.25%)、TATAbox-28(8/202,3.96%)和TATAbox-29(4/202,1.98%)。发病例数较多的基因突变类型有CD17/CD17(13/101,12.9%)、CD41-42/CD41-42(13/101,12.9%)、CD17/IVS-2-654(11/101,10.9%)、CD17/CD41-42(14/101,13.9%)、CD41-42/IVS-2-654(17/101,16.8%),组间的发病年龄、红细胞计数(erythrocyte count,RBC)、血红蛋白水平(hemoglobin,Hb)、胆红素水平、肝脾肿大程度及输血间隔时间无明显差异,CD17/CD17组的平均红细胞体积(mean corpuscular volume,MCV)低下程度较CD17/CD41-42明显(P=0.007)。101例β-TM患儿中失访率达44.6%,输血治疗率75%,祛铁治疗率26.8%。结论:β-TM患儿的主要临床表现为贫血、黄疸、肝脾肿大;β-TM复合Hb E病可表现为重型;β-TM可合并缺铁性贫血;本研究中β-TM基因突变以CD41-42、IVS-2-654、CD17、TATAbox-28和TATAbox-29为主;β0/β+与β0/β0表型比较临床表现及实验室检查发现仅β0/β0组的MCV较β0/β+低;本研究中患者失访率高,治疗率偏低,故其管理十分重要。

荧光定量PCR法和ELISA检测儿童呼吸道感染病原体的意义

儿童呼吸道感染是儿童秋冬季节常见的疾病,临床症状以发热、咳嗽、流涕等为主,近年来除了常见的细菌与病毒感染以外,肺炎支原体（mycoplasma pneumoniae,MP）和肺炎衣原体（chlamydiapliel pneumoniae,CP）也逐渐成为急性呼吸道感染的主要病原体。由于该两类病原体的分离培养方法复杂,所需时间长,不便于临床快速诊断[1],早期检测出病原体而成为临床诊断棘手的问题。目前大多数医院对该两类病原体的检测仍以血清学方法（如ELISA）为主。

外周血单个核细胞多药耐药相关基因含量监测在儿童恶性肿瘤中的应用

目的:建立检测多药耐药(multi-drug resistance,MDR)相关基因荧光定量RT-PCR方法,并动态监测肿瘤患者外周血MDR相关基因(MDR1、MRP1和LRP)含量,探讨是否根据这些基因含量来指导肿瘤化疗。方法:利用Taq-Man探针方法,建立检测MDR相关基因的荧光定量RT-PCR方法。以健康对照组50例,肿瘤(含淋巴瘤、神经母细胞瘤、卵黄囊瘤等)组262例,化疗不同时期抽取患者外周血950份,提取RNA,检测单个核细胞内MDR相关基因(MDR1、MRP1和LRP)含量,分析这些基因的含量与肿瘤化疗方案的关系。结果:成功建立以Taq-Man探针为基础的MDR相关基因荧光定量RT-PCR方法。①与健康对照组相比,肿瘤组患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear,PBMC)MDR1基因起始含量较高,尤以神经母细胞瘤和卵黄囊瘤为甚,这2类肿瘤可能存在一定程度的原发耐药性。②对同一肿瘤患者,化疗后PBMC MDR1含量随化疗疗程增加而逐渐增高,以神经母细胞瘤和卵黄囊瘤最为敏感。结论:MDR1、MRP1和LRP含量与肿瘤的化疗方案密切相关,PBMC和肿瘤组织中MDR1的表达与化疗疗效呈显著负相关。检测外周血中MDR1基因的含量能够动态监测肿瘤患者的MDR,利用荧光定量RT-PCR方法动态监测肿瘤患者化疗前后外周血MDR相关基因(MDR1、MRP1和LRP)的含量,对化疗疗效监测及预后判定具有一定的参考价值,可以用来指导相关基因底物的肿瘤药物化疗。

6038例儿科临床标本深部真菌检出率及其药敏分析

目的了解儿童常见深部真菌的种类及耐药状况,指导临床合理用药。方法对785株深部真菌用YBC鉴定卡鉴定到种,用ATB-FUNGS试剂盒进行药物敏感试验。结果785株真菌中白色念珠菌占72.2%,其次是光滑念珠菌、热带念珠菌、克柔念珠菌,分别占17.2%、8.7%、1.3%。呼吸科、心内科、新生儿科、血液科真菌的检出率分别为:30.1%、13.5%、13.1%、12.1%;785株真菌对5-氟胞嘧啶、两性霉素B、制霉菌素、咪康唑、益康唑、酮康唑总的敏感率分别为93.2%、85.2%、87.4%、30.5%、61.8%、45.4%。结论儿童深部真菌以白色念珠菌最多。785株真菌对5-氟胞嘧啶、两性霉素B、制霉菌素的敏感性较高,它们仍然是治疗深部真菌感染的有效药物,而咪康唑、益康唑、酮康唑的敏感性较低,应引起临床医生的重视。

4例Chediak-Higashi综合征的临床特征和LYST基因分析

目的探讨4例Chediak-Higashi综合征(Chediak-Higashi syndrome,CHS)的临床特征和LYST基因突变情况。方法分析4例CHS的临床资料和实验室检查结果;提取患儿及父母等亲属外周血DNA和RNA;采用DNA-PCR/RT-PCR直接测序法分析患儿的致病基因LYST;根据患儿突变点对亲属相应位点做PCR扩增和测序,确认携带者。结果 4例CHS患儿均为女性,平均年龄3岁2个月。均有色素减退,双眼震颤,显微镜见头发黑色素减少为小点状分布。病例1～3还有发热、血细胞2系以上降低、骨髓有核细胞巨大包涵体等特征,诊断Chediak-Higashi综合征(加速期)。病例4年幼,表现不典型,临床诊断CHS。病例1～3存在LYST基因突变,各含2个突变位点,病例1(c.3113C>T,Q980X和c.6788A>T,K2205X),病例2(c.5327C>T,R1718X和c.608C>T,R145X),病例3(c.5411-5414 del TTTC,L1741fsX1758和c.7975 C>T,R2596X)。6个突变均为新型突变。共确认8位携带者。病例4暂未发现LYST基因突变。结论 Chediak-Higashi综合征具有色素减退、双眼震颤、头发黑色素减少为小点状分布和骨髓有核细胞巨大包涵体的临床特征,通过LYST基因分析,发现其中3例存在6个新型突变点。

433株不动杆菌的临床分布与耐药性分析

目的:探讨我院分离的不动杆菌的感染分布及耐药情况。方法:收集临床标本分离的不动杆菌,细菌鉴定及药敏试验采用BD Phoenix全自动微生物鉴定药敏系统。结果:360株(83.1%)不动杆菌来自于痰标本。47株来自于伤口分泌物(10.9%)。临床分布以呼吸内科为主(32.6%),其次为重症监护室和新生儿病房,均占12.9%。14种抗菌药物中,鲍曼不动杆菌对多黏菌素耐药率较低(0.78%)。对亚胺培南和美罗培南的耐药率分别为6.01%和1.57%。洛菲不动杆菌对多种药物的耐药率低于鲍曼不动杆菌。结论:不动杆菌主要来自于痰和呼吸内科,耐药率较高,应加强不动杆菌的耐药性检测,选择合理的抗生素。

婴幼儿腹泻的病原学分析

目的了解婴幼儿腹泻的病原分布以及合理使用抗生素情况。方法对本院消化感染科2008年1月至12月1 306例腹泻患儿的临床病历进行回顾性地随机分层抽样调查;采取病史资料和实验室检测项目结合分析腹泻患儿的病原分布规律以及抗生素的合理使用情况。结果感染性腹泻占87.1%,非感染性腹泻占12.9%。感染性腹泻病原主要以轮状病毒(RV)为主,占65.9%,其次是细菌6.7%,腺病毒3.4%,真菌0.8%,寄生虫0.4%。轮状病毒秋冬季节感染率最高,容易重复感染和合并乳糖不耐受。细菌感染以痢疾杆菌多见,占2.22%。非感染性腹泻以糖原性腹泻和抗生素相关性腹泻为主,分别为4.8%和2.1%。腹泻患儿院外抗生素使用率30%,院内抗生素使用率15%,抗病毒药物和微生态制剂使用率高达90%和100%。结论轮状病毒是婴幼儿腹泻的主要病原;院外抗生素使用率相对较高,院内抗生素使用率基本合理。

肺炎链球菌实验室检测技术研究进展

肺炎链球菌（streptococcus pneumoniae，SP）是儿童呼吸道感染主要致病菌之一，还可引起中耳炎、鼻窦炎、脑膜炎和菌血症。据统计，全球每年有300多万儿童死于由肺炎链球菌感染引起的菌血症或脑膜炎。现就肺炎链球菌的实验室检测技术作一综述。

21号染色体STR多态与Down's综合征基因诊断的研究

目的:探讨应用短串联重复序列(Short tandem repeat,STR)进行Down's综合征诊断的可行性,同时对Down's综合征患儿双亲进行分析,找寻该病的遗传规律。方法:选择21号染色体上D21S1l和D21S1414 2个STR基因座,应用聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction,PCR)、变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(8%)、硝酸银染色技术分别对100例Down's综合征患儿及20例患儿父母的基因组进行分析。结果:(1)正常人在1个STR基因座上的基因型有2种情况:①2个不同等位基因构成的杂合子,凝胶电泳上表现为粗细一样的2条带。②2个相同等位基因构成的纯合子,凝胶上是2条相同等位基因条带的重叠,其宽度和浓度约为单个等位基因条带的2倍。(2)Down's综合征患儿的等位基因数目和(或)条带浓度有3种特征性改变:①3个不同的等位基因,电泳图上为浓度相同的3条带。②3个等位基因中的2个相同,电泳图上为2条带,其中1条的浓度足另外1条的2倍。③3个相同的等位基因,电泳图上为1条带,这条带的浓度和宽度约为正常对照条带的3倍。(3)20例Down's综合征双亲分析显示,Down's综合征患儿电泳条带包含了母亲的全部电泳条带,而与父亲的电泳条带只有部分相同。结论:(1)利用21号染色体STR位点作为遗传标记,采用PCR扩增技术结合变性聚丙烯酰胺凝胶电泳及硝酸银染色技术,可用于诊断和筛查Down's综合征。(2)Down's综合征患儿与双亲比对电泳结果表明,Down's综合征发病与父母的核型无关,多余的1条21号染色体一般来自于母亲。

婴幼儿腹泻的病原学分析

腹泻是婴幼儿的一种常见病和多发病,特别在发展中国家（尤其是经济落后的农村）,腹泻是导致婴幼儿死亡的主要原因之一。婴幼儿腹泻的病原类型复杂、多样,临床表现多样。按病理生理可分为渗透性腹泻、分泌性腹泻、渗出性腹泻和吸收不良性腹泻;按病因分为感染性腹泻和非感染性腹泻。在诊治中重视鉴别感染性腹泻或非感染性腹泻,及时明确病原,对合理应用抗生素具有重要意义。本文通过对本院肠道感染科病房2008年1-12月婴幼儿腹泻病例资料进行回顾性调查,分析婴幼儿腹泻病原学的分布规律及抗生素的合理使用情况。现报告如下。

DOWN′S综合征遗传规律探讨

目的探讨Down′s综合征的遗传规律。方法Down′s综合征患儿及其双亲21号染色体上D21S11和D21S14142个短串联重复序列用聚合酶链反应进行扩增,用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(8%)、硝酸银染色技术对扩增后的产物进行分离。结果Down′s综合征患儿电泳条带包含了母亲的全部电泳条带,而与父亲的电泳条带只有部分相同。结论Down′s综合征发病与父母的核型无关,它是减数分裂时不分离的结果,多余的一条21号染色体一般来自母亲。

血红素加氧酶-1联合C反应蛋白对川崎病冠状动脉病变的预测研究

目的探讨川崎病(kawasaki disease,KD)患儿血清血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)与C反应蛋白(C reactive protein,CRP)水平变化对川崎病冠状动脉病变(coronary artery lesions,CAL)的预测作用。方法采集KD患儿外周血89例,分为无冠脉病变(NCAL)组35例、扩张内径<5 mm冠脉病变(CAL<5 mm)组44例,及扩张内径≥5 mm冠脉病变(CAL≥5 mm)组10例,并设置发热对照(F)组34例和健康对照(N)组45例。检测血清丙二醛(malondialdehyde,MDA)、HO-1、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD),并结合CRP和Hb进行分析,对部分患儿IVIG治疗前后以上指标进行对比。结果急性期,KD各组MDA水平显著增高;CAL<5 mm组HO-1明显高于其他4组;仅CAL≥5 mm组SOD水平低于N组;CAL≥5 mm组CRP显著高于其他4组。在HO-1≥9 ng/m L的30例KD患者中,当CRP>44 mg/L时,CAL的发生率为56.52%(13/23),明显高于NCAL(0%,0/7)。在HO-1<9 ng/m L的31例CAL患者中,当CRP>85 mg,CAL≥5 mm的发生率为(88.89%,8/9),明显高于CAL<5 mm的发生率(36.36%,8/22)。CAL组HO-1与Hb呈负相关(r=-0.37,P<0.05)。IVIG治疗后,KD患者H0-1明显升高,仅CAL组MDA水平下降明显,SOD的改变并不显著(P>0.05)。结论联合应用HO-1与CRP的水平变化,可能对于川崎病急性期预测冠脉病变发生与否及严重程度具有重要的意义。

3种不同B型流感嗜血杆菌结合疫苗的多糖抗体水平比较

目的:评价国内外市场上常见的3种B型流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae type b,HIB)结合疫苗的免疫效果。方法:将3种以破伤风类毒素为载体的HIB结合疫苗(PRP-tetanus tozoia conjugaye,PRP-t)分别免疫大鼠,设生理盐水为对照,ELISA法测定血清中HIB多糖抗体浓度,分析其免疫效果。结果:不同HIB疫苗组内免疫前后抗体浓度差异有显著统计学意义(P<0.01),免疫后各试验组与对照组组间差异均有显著统计学意义(P<0.01),而各试验组间在免疫前及免疫后1、2、4周差异均无显著统计学意义(P>0.01)。结论:3种HIB结合疫苗均具有良好的免疫效果。不同疫苗对大鼠血清抗体水平影响差异无统计学意义,对血清抗体水平影响较小,但不同时间的抗体水平有显著性变化。

造血干细胞Hdac3基因促进鼠淋巴细胞分化

目的建立造血干细胞特异性Hdac3条件性敲除小鼠模型,探讨Hdac3基因对小鼠造血发育的影响。方法 Hdac3^(fl/fl)小鼠与Mx1-Cre小鼠杂交获得Hdac3^(fl/fl)Mx1-Cre小鼠,PCR鉴定小鼠基因型。连续注射poly(I:C),诱导Cre表达,得到造血干细胞Hdac3敲除鼠Hdac3^(fl/fl)Mx1-Cre^+(CKO)及对照组小鼠Hdac3^(+/+)Mx1-Cre^+(WT),Q-PCR分析Hdac3 mRNA表达水平。流式细胞术检测小鼠外周血淋巴细胞数量及比例。HE染色观察小鼠胸腺、脾脏形态学改变。流式细胞术检测小鼠外周血CD3^+、B220^+细胞比例。克隆形成实验分析小鼠造血干/祖(LSK)细胞的分化能力。结果成功建立造血干细胞Hdac3^(fl/fl)Mx1-Cre^+(CKO)小鼠模型。与对照组相比,CKO小鼠外周血淋巴细胞绝对数量(P<0.001)及比例(P<0.01)均显著降低;细胞亚群分析显示,CKO小鼠外周血CD3^+淋巴细胞及B220^+淋巴细胞显著减少(P<0.01,P<0.001),CD11b^+髓系细胞比例显著增加(P<0.01)。HE染色结果显示,实验组鼠胸腺和脾淋巴细胞数减少。克隆形成实验显示,实验组小鼠粒系克隆数无差异,前B细胞样克隆缺失。结论造血干细胞中Hdac3基因促进造血干细胞向淋巴细胞分化。

全自动微生物系统在临床肺炎链球菌药敏试验中的应用

肺炎链球菌（Streptococcus Pneumoniae，SP）是儿童呼吸道感染的主要致病菌之一，还可以引起中耳炎、鼻窦炎、脑膜炎和菌血症[1-2]。我国1996-2000年全国5岁以下儿童死亡监测结果表明，死因第一位是肺炎，

新生期小鼠非致死性肺炎链球菌感染模型的建立

目的探讨建立新生期BALB/c小鼠非致死性肺炎链球菌感染模型的方法。方法将新生期BALB/c小鼠随机分为肺炎链球菌感染1次组(于新生期第7天分别经鼻腔滴注肺炎链球菌D39株107、108、109、1010CFU菌液各10μl)、感染2次组(于新生期第6、7天连续2 d经鼻腔滴注肺炎链球菌D39株107、108、109、1010CFU菌液各10μl)和对照1、2组(于第7天和第6、7天分别经鼻腔滴注PBS液10μl),每组20只。最后1次鼻腔滴注后24 h随机抽取10只小鼠处死,取肺组织匀浆,进行细菌培养及鉴定,HE染色观察肺组织病理改变。剩余10只观察感染后5 d的体重变化及存活情况。结果感染2次109CFU肺炎链球菌组小鼠出现安静少动,皮肤苍白,体重增长下降;感染率与存活率均>85%;病理显示肺部出现炎症改变,肺泡间隔增厚,血管周围和支气管周围有一定程度的炎症细胞浸润,以中性粒细胞为主。结论新生期第6、7天感染109CFU肺炎链球菌可能是成功建立新生期BALB/c小鼠非致死性肺炎链球菌感染模型的较好方法。