重庆市巴南地区学龄前儿童维生素A营养状况与红细胞生成素水平的关系

目的了解重庆市巴南地区学龄前儿童的维生素A(vitamin A,VA)营养状况,全血中血红蛋白(hemoglo-bin,Hb)及红细胞生成素(erythropoietin,EPO)的水平,进一步探讨VA缺乏与贫血的相关机制。方法采用分层与整群抽样相结合的方法 ,在重庆市巴南区鱼洞镇7所规模>200名的幼儿园中随机选取3所中的所有3～6岁符合纳入标准的349名学龄前儿童。采用反相高效液相色谱法(high-performance liquid chromatography,HPLC)测静脉血中血清VA浓度,化学发光免疫测定法测定EPO浓度,氰化高铁法测量Hb浓度,并分析相关性。结果该地区学龄前儿童VA缺乏、边缘型VA缺乏及贫血发生率分别为1.72%、22.64%和22.64%;VA缺乏较VA正常儿童贫血的发生率有显著性差异(P<0.05),VA缺乏儿童的贫血发生率是VA正常儿童的2.32倍。Hb水平与EPO浓度呈显著性负相关(P<0.01)。贫血儿童较正常Hb水平儿童,EPO有显著差异(P<0.05)。在贫血儿童中,低VA水平(vitaminA<1.05μmol/L)儿童Hb浓度与EPO水平呈较强负相关(r=-0.46,P<0.05);在总体学龄前儿童中,低VA水平较VA正常儿童Hb浓度与EPO水平有较强的负相关性(r=-0.23,r=-0.16,P<0.05),Lg(EPO)与Hb回归方程斜率低VA较VA正常儿童增加0.0002。结论机体VA的营养水平影响Hb浓度对EPO的反馈性调节作用。

PBL教学法在小儿胃肠外科临床教学中对研究生成绩的影响

目的 分析问题教学法(problem-based learning,PBL)在小儿胃肠外科临床教学中对研究生成绩的影响。方法 选择于重庆市医科大学附属儿童医院2020年3月—2022年3月学习的60名儿外科专业型研究生作为研究对象,根据教学方法的不同将其分为观察组和对照组,各30名,其中对照组学生采用常规教学方案,观察组使用PBL教学法,对比两组学生的教学效果以及对教学的评价。结果 在经过教学考核后,观察组学生的理论考核成绩、病例分析成绩均高于对照组,差异有统计学意义(P <0.05);且观察组学生在学习积极性、学习兴趣、学习效率、分析解决问题能力、团队协作以及沟通能力方面的评价均优于对照组,差异有统计学意义(P <0.05)。结论 在小儿胃肠外科临床教学当中,随着PBL教学法的应用,能够提高学生的学习成绩,同时培养良好的学习态度,加强解决实际分析的能力,以综合的角度促使学生形成临床思维,值得研究和借鉴。

临床教师队伍研究方法学知识能力的现状及需求调研

目的:在倡导医教研并重的教学医院,提升临床教师的科研能力,契合当今国家对在校学生加强创新思维培养的主旋律。在调查临床教师科研能力现状的基础上,提出提升其研究能力的培训计划。方法:通过对全国16个省市的94名临床教师进行问卷调查,收集其科研能力的现状、参与研究科研方法提升培训及需求情况,采用卡方检验分析不同职称人员间的差异。结果:临床教师参与科研项目的比例为74.47%,主要研究类型为临床医学研究为65.71%,对数据分析方法(34.29%)、数据管理(32.86%)、论文撰写和发表(34.29%)及报告撰写(4.29%)的掌握程度不够。临床教师认为研究设计(90.43%)、数据分析方法(94.68%)、质量控制(62.77%)与样本量计算(60.64%)是统计学知识的重点并希望在该方面得到更多的学习机会。临床教师希望科研培训可以安排在休息时间,采取线上与线下相结合的方式最佳。结论:临床教师对提升自身科研能力的有关研究设计与数据分析方法的教育培训具有较强的需求。应针对需求并考虑其工作性质开设可提高科研知识应用能力的培训,提升其教学科研技能。

低氧促进尿源性干细胞迁移与融合能力的作用研究

目的体外实验中探讨低氧对尿源性干细胞(Urine derived stem cells,USCs)迁移及融合能力的影响及该过程中细胞骨架结构和极性的改变。方法常氧(20%)或低氧(3%)条件下培养USCs 48h,应用划痕实验、Transwell实验检测USCs迁移能力;共聚焦显微镜及流式细胞术观察并测定USCs与肝细胞(HP14-19和HepG2)的融合能力;透射电子显微镜及鬼笔环肽荧光探针观察细胞骨架结构;免疫荧光、流式细胞术及Real-time PCR实验检测细胞极性相关蛋白RhoA、Cdc42及Rac1的表达。结果与常氧组USCs相比,低氧组USCs的迁移能力及与HP14-19和HepG2的细胞融合能力明显提升。透射电镜及鬼笔环肽荧光染色可见低氧处理后USCs细胞骨架重塑,微丝微管排列更加有序且规律。免疫荧光、流式细胞术及Real-time PCR结果提示,低氧组USCs极性相关蛋白RhoA、Cdc42及Rac1的表达量较常氧组明显增加。结论低氧处理USCs可促进细胞的迁移及融合能力,其机制可能与细胞骨架的重塑和细胞极性上调有关。

膜片钳技术在成年大鼠海马脑片应用的初步研究

目的:制备成年大鼠海马脑片,使其适应于膜片钳全细胞记录,并观察海马锥体神经元的电生理特性。方法:选200 g左右的成年SD大鼠,雌雄不拘,10%水合氯醛腹腔注射麻醉,四肢固定,剪开胸腔,夹闭下腔静脉,以0℃切片液进行心脏灌注,断头,取下全脑,置入0℃切片液中冰镇3 min,再修块,切片,厚度约350μm,移入37℃预热的人工脑脊液中孵育1 h后,转入23℃水浴中孵育30 min备用。倒置相差显微镜和红外微分干涉相差显微镜观察脑片的神经元形态;全细胞膜片钳记录脑片神经元的电生理学特性。结果:海马CA1区神经元光泽度好,立体感强且突起明显;在进行膜片钳全细胞记录时,封接顺利,并且可以记录到电流和动作电位的变化图形。结论:本方法制备的成年大鼠脑片,可以耐受离体后缺血缺氧造成的损伤,保持电生理活性而适应膜片钳全细胞记录模式。

维生素A、锌对学龄前儿童红细胞生成素的影响

目的对学龄前儿童补充维生素A（vitamin A，VA）、锌（Zinc，Zn），论证分析VA/Zn影响血红蛋白（hemoglobin，Hb）与红细胞生成素（erythropoietin，EPO）的反馈调节机制。方法在重庆市近郊7所规模〉200人的幼儿园中随机选取2所中的所有3～6岁符合纳入标准的232名学龄前儿童，按分层随机整群抽样的方法，以幼儿园为单位，分成单独补VA组（A组）和补VA加Zn组（AZ组）。A组与AZ组儿童又按不同VA与Hb基础水平分组，干预前贫血合并VA不足的儿童定义为Ⅰ组，Hb正常合并VA不足的为Ⅱ组，贫血合并VA正常的为Ⅲ组。营养素补充6个月，补充干预前后分别检测Hb、VA、Zn和EPO水平。结果营养素干预6个月后，血清VA水平AZ组显著升高0.05 μmol/L（P〈0.05），但A组无明显变化。A组和AZ组儿童血清Zn水平干预前后分别显著升高了2.95 μmol/L和3.67 μmol/L（P〈0.05, P〈0.01）；Hb和EPO水平较干预前均显著升高，贫血的发生率均显著下降（P〈0.05, P〈0.01），但两组间变化值差异均没有统计学意义（P〉0.05）。A组Log10 EPO与Hb的直线回归方程斜率干预后显著下降了-0.009 9（P〈0.05），但AZ组无明显变化（P〉0.05）。Ⅰ组和Ⅲ组干预后Hb水平均显著升高（P〈0.05），其中Ⅲ组Hb水平升高较Ⅱ组有统计学差异（P〈0.05）；Ⅰ组儿童Log10 EPO水平变化较其他2组更明显（P〈0.05）。结论VA调节EPO的生成能力可受机体Hb水平的影响，机体VA的营养水平影响Hb浓度对EPO的反馈性调节作用。

母体炎性暴露对子代小鼠受IRBP抗原诱导的葡萄膜炎的影响

目的 探讨母体葡萄膜炎暴露对子代小鼠受光感受器间视黄醇结合蛋白(interphotoreceptor retinoid-binding protein, IRBP)诱导的实验性自身免疫性葡萄膜炎(experimental autoimmune uveitis, EAU)免疫效应的影响。方法 从本课题组前期获得的受双亲EAU暴露的子代C57BL/6J小鼠眼球的RNA测序转录组数据中,筛选免疫相关差异表达基因(differentially expressed genes, DEGs)。利用基因本体论(Gene Ontology, GO)和京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes, KEGG)的富集分析,确定这些免疫相关的差异表达基因生物学途径。通过蛋白质互作网络(protein-protein interaction networks, PPI)分析交集基因以此鉴定出枢纽基因。进一步通过荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time PCR,qPCR)确定筛选出的异常表达的枢纽基因是否也在受母体葡萄膜炎影响的子代小鼠中差异表达,最后通过视网膜抗原IRBP_(651-670)诱导受母体活动期炎症影响的子代以评价母体葡萄膜炎对子代患葡萄膜炎的易感性以及相关免疫效应的影响。结果 从受双亲葡萄膜炎影响的子代小鼠眼球组织中鉴定出72个免疫相关差异基因。这些基因主要富集参与Toll样受体信号通路、MAPK信号通路以及B细胞受体信号通路等。进一步进行PPI网络互作分析,筛选出proteasome 26S subunit, ATPase 5 (Psmc5)、proteasome 26S subunit, ATPase 3 (Psmc3)、proteasome 26S subunit ubiquitin receptor, non-ATPase 4 (Psmd4)和proteasome 26S subunit, non-ATPase 8 (Psmd8)这4个枢纽基因。qPCR检测证实受母体葡萄膜炎影响的子代小鼠中也上调表达这4个枢纽基因。而且与健康子代相比,150μg IRBP抗原诱导可增加受活动期炎症影响的子代EAU临床表现的严重程度和病理组织学损伤(P=0.0087,P=0.0410);另外,受母体活动期炎症影响的子代在IRBP诱导的EAU中脾T细胞增殖功能增强,其血清中产生的细胞因子IL-17和IL-6增加(P=0.0450,P=0.0300)。结论 母体活动性炎症暴露加剧子代小鼠受IRBP诱导的EAU疾病的严重性,增强抗原特异性T细胞增殖以及血清中IL-17、IL-6的产生,可能与受影响的子代上调表达的4个枢纽基因Psmc5、Psmc3、Psmd4、Psmd8相关。

AP2α荧光素酶报告基因的构建及在BMPs诱导成骨分化研究中的应用

目的构建一种携带转录蛋白AP2α效应元件的荧光素酶报告基因载体,并应用于筛选BMPs对AP2α转录活性的影响。方法设计4个串联的AP2α效应元件(AP2α-RE),将其克隆至经Bam HⅠ和MluⅠ双酶切的pBGLuc荧光素酶报告基因质粒构建pBGLuc-AP2α-RE载体。重组腺病毒Ad-AP2α及其两种显性负性突变体Ad-dnAP2α感染小鼠间充质干细胞C3H10,通过Realtime PCR、Western blot检测AP2α的mRNA和蛋白水平表达,EMSA检测AP2α的DNA结合能力。pBGLuc-AP2α-RE转染C3H10细胞,荧光素酶报告基因检测同上各组AP2α的转录活性。Ad-BMPs感染pBGLuc-AP2α-RE转染的C3H10细胞,荧光素酶报告基因筛选BMPs对AP2α转录活性的影响。结果经PCR、酶切及测序鉴定,证实AP2α-RE正确克隆至pBGLuc-AP2α-RE荧光素酶报告基因载体,Ad-AP2α感染能显著提高AP2α的表达及结合DNA的能力。显性负性突变体可以表达各自的突变体,EMSA结果显示Ad-dnAP2α-△bHLH组能显著抑制AP2α结合DNA的能力,而Ad-dnAP2α-△TAD组结合的DNA探针强于对照组。荧光素酶报告基因提示AP2α过表达组能促进AP2α转录活性,而两种显性负性突变体均能抑制AP2α转录活性。重组腺病毒BMPs感染组的AP2α转录活性均有增高,其中BMP9最为显著。结论成功构建携带转录蛋白AP2α效应元件的荧光素酶报告基因载体用于检测AP2α的转录活性,并初步发现BMP9对AP2α的转录活性有明显的促进作用。

病毒适合度的研究进展

RNA病毒是一种普遍存在的细胞生物,几乎可以在所有生命体中找到.由于RNA聚合酶和逆转录酶缺乏严密的自我校正功能,因而具有高突变率,即使最新克隆出的病毒种群(Populations),也可能是由一个或多个位点不同、但基因组相近的病毒所组成的混合群体[1].RNA病毒由于种群高度地异质性,形成由相关基因组构成的动态突变种群就叫作病毒准种(Quasispecies).正是由于病毒准种的存在,使得病毒种群能够在选择压力下生存.任何促进传染新宿主的疾病特性均可成为病原体正向进化选择压力的主体,当一种或一系列更适合在改变的环境中复制生存的突变产生后,病毒种群的适合度(Viral fitness)就增加了,流行也更加迅速了.……

血糖波动对危重患儿预后影响的前瞻性研究

目的:探究血糖波动与危重患儿不良预后的关系,寻找代表血糖波动的最优指标。方法:前瞻性收集2020年1月1日至2020年8月31日重庆医科大学附属儿童医院重症医学科(pediatric intensive care unit,PICU)收治的280例危重患儿资料,以入PICU后28 d转归情况分为生存组和死亡组,记录入住PICU后72 h内的生理参数及结局资料,运用受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线及logistic回归分析等统计学方法进行统计分析。结果:(1)不同血糖波动指标中,血糖标准差(standard deviation,SD)(AUC=0.759,95%CI=0.688~0.830,P<0.001)和血糖不稳定指数(glycemic lability index,GLI)(AUC=0.752,95%CI=0.680~0.825,P<0.001)对预后具有更好的评价效能。多因素logistic回归分析显示,调整了疾病严重程度、血管活性药物评分、心肺复苏等其他影响死亡率的混杂因素及平均血糖后,SD所代表的血糖波动(OR=3.356,95%CI=1.536~7.332,P=0.002),PIM(pediatric index of mortality)评分(OR=1.155,95%CI=1.023~1.303,P=0.020)及PICU住院时间(OR=0.895,95%CI=0.837~0.956,P=0.001)是PICU患儿28 d死亡率的独立危险因素。(2)进一步将平均血糖水平及血糖波动分层分析,高血糖波动组的死亡率均高于低血糖波动组,具有低平均血糖同时具有高血糖波动的患儿死亡率最高。结论:危重患儿血糖波动是独立于平均血糖的死亡危险因素,SD、GLI可能是代表血糖波动的优势指标。临床医生关注平均血糖水平的同时更要关注血糖波动。

低氧低糖及血清剥夺联合处理抑制Nrf2信号通路诱发大鼠骨髓间充质干细胞氧化应激和凋亡

目的探讨低氧低糖血清剥夺(GSDH)处理对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)氧化应激及凋亡的影响。方法在体外对提取纯化后的原代BMSCs利用低氧(1%O_(2))、低糖(1.0 g/L)及血清剥夺联合处理建立BMSCs细胞损伤模型。采用集落形成实验、细胞周期测定以及CCK-8实验检测细胞增殖能力;划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移能力;通过细胞凋亡试剂(AnnexinV-FITC/PI)、线粒体膜电位检测试剂(JC-1)染色和线粒体荧光探针(Mito-Trancker)检测细胞凋亡;细胞活性氧簇(ROS)和钙离子(Fluo-4AM)检测细胞氧化应激水平;Western blotting检测抗氧化应激相关分子谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)等以及核因子红细胞系2相关因子2(Nrf2)信号通路中关键分子的蛋白表达水平。结果大鼠原代BMSCs表面标志物高表达CD29、CD71,低表达CD45、CD34;GSDH处理抑制BMSCs细胞增殖(P<0.05)和迁移(P<0.05),增加ROS和钙离子水平(P<0.05),且抑制抗氧化应激相关分子GPX4等蛋白表达(P<0.01);与空白对照组相比,GSDH处理后BMSCs凋亡显著升高(P<0.05),线粒体膜电位降低(P<0.01),网络化减少(P<0.01)。Nrf2信号通路中Nrf2蛋白及下游关键分子的蛋白表达水平均降低(P<0.05)。结论GSDH处理诱发的BMSCs氧化应激及进一步导致的凋亡损伤与Nrf2信号通路被抑制有关。

膳食维生素A和体重的比值与儿童高血压的相关性

目的探讨膳食维生素A(VitA)和体重的比值与儿童高血压的相关性,为通过膳食营养干预改善儿童血压水平与降低儿童期高血压的患病风险提供参考。方法利用2014—2019年在重庆城乡地区建立的健康儿童队列研究基线调查与随访样本资料,采用结构式定量膳食问卷和自行设计的调查表调查15279名儿童膳食摄入量与社会经济学指标,测量血压、身高与体重等检测指标。儿童膳食VitA与体重的比值按照四分位数分为≤P_(25)(Q1),>P_(25)~P50(Q2),>P50~P_(75)(Q3),>P_(75)(Q4)4组。采用广义线性回归模型与Logistic回归模型分析膳食VitA和体重的比值与血压水平及高血压患病率的相关性。结果2014年基线调查结果表明,在校正人口统计学指标及营养摄入指标等混杂因素后,不同儿童膳食VitA摄入与体重比值组收缩压(SBP)、舒张压(DBP)、平均动脉压(MAP)的差异均有统计学意义(F值分别为157.57,44.71,95.92,P值均<0.05)。2014年儿童膳食VitA和体重的比值与SBP[β值(95%CI)=-0.65(-0.89~-0.42)]、DBP[β值(95%CI)=-0.22(-0.42~-0.01)]和MAP[β值(95%CI)=-0.36(-0.56~-0.16)]均呈负相关(P值均<0.05);与Q1组比较,Q4组中儿童高血压的患病风险降低[OR值(95%CI)=0.63(0.49~0.81),P<0.01]。2014年儿童基线膳食VitA和体重的比值与2019年随访SBP、DBP、MAP均呈负相关[β值分别为-0.77(-1.34~-0.19),-0.62(-1.21~-0.02),-0.77(-1.34~-0.19),P值均<0.05];与Q1组相比,Q4组中的2019年儿童高血压患病风险也降低[OR值(95%CI)=0.18(0.08~0.42),P<0.01]。结论膳食VitA和体重的比值与儿童血压水平呈负相关,膳食VitA缺乏为儿童高血压的独立危险因素。应采取措施积极调整儿童膳食营养,降低儿童期高血压的患病风险。

姜黄素对新生大鼠坏死性小肠结肠炎模型NF-κB,TNF-α及IL-6表达的影响

目的:探讨姜黄素作用于新生大鼠坏死性小肠结肠炎(NEC)模型的疗效、抗炎作用及其机制.方法:经人工喂养、缺氧复氧冷冻及脂多糖灌胃后建立NEC动物模型.实验分为正常对照组(A组)、NEC模型组(B组)、姜黄素干预组(C组)及溶剂组(D组).各组于第4日处死大鼠,取近回盲部肠组织做病理切片,采用HE染色观察组织学变化并做组织损伤评分;免疫组化法检测NF-κB的表达.其他肠组织制备组织匀浆取上清用ELISA法检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)的含量.结果:A,D组大鼠无NEC症状,B组大鼠出现典型的NEC症状,C组大鼠与B组相比NEC症状出现的较晚、较轻.B组与A,D组相比肠组织病理学评分及NF-κB,TNF-α,IL-6的表达显著增高(P<0.01);C组与B组相比表达显著降低(P<0.05).结论:姜黄素对NEC大鼠具有保护作用,其机制可能是通过抑制NF-κB,TNF-α及IL-6的表达从而发挥抗炎效应.

FAS基因突变导致自身免疫性淋巴细胞增生综合征(ALPS)一例

目的探讨1例FAS基因突变导致ALPS的临床特征、基因变异及其蛋白表达水平。方法患儿为男性,婴幼儿期起病,慢性、非恶性淋巴结和肝脾肿大,伴自身免疫性溶血性贫血、血小板减少及粒细胞减少。采用流式细胞仪检测双阴性T淋巴细胞和FAS蛋白表达。采用PCR方法扩增患儿及父母FAS基因组DNA。采用RT-PCR扩增患儿及父母FAS mRNA。PCR产物直接进行双向序列测定及FAS突变基因表达频率测定。结果患儿CD3+CD4-CD8-TCRαβ+T细胞12.68%,T淋巴细胞上FAS蛋白的表达为9.96%,较正常对照降低。基因检测为患儿FAS基因4号外显子93位碱基错义突变(T>A),导致FAS蛋白第143位氨基酸由丝氨酸替换为半胱氨酸(Ser14Cys),其父为携带者。患儿FAS基因突变基因表达频率为95%,其父为60%。结论经临床、免疫学筛查和基因分析,患儿可诊为ALPS(g:18451T>A c:773T>A Ser143Cys),突变基因表达的频率可能影响疾病外显率。

P糖蛋白/Caveolin-1在血脑屏障定位及表达特点

目的:研究P糖蛋白在血脑屏障的确切细胞定位,并在形态学上验证P糖蛋白与Caveolin-1的表达部位是否存在相关性.方法:建立脑胶质瘤动物模型,获得标本50%用40g/L多聚甲醛固定后,通过HE染色以及免疫组化的方法证明其生物学特性;另50%制作冰冻切片,分别用FITC(绿色荧光)和TRITC(红色荧光)对Caveolin-1和P糖蛋白进行荧光标记,激光共聚焦显微镜下观察两种蛋白在血脑屏障上的定位及表达特点.结果:①脑肿瘤毛细血管内皮细胞的腔膜面有强的绿色荧光信号表达,而且星型胶质细胞的足突也有一定的绿色荧光信号表达;②Caveolin-1在血管内皮细胞的腔膜面以及基底面均有很强的红色荧光信号表达;③合并图像后发现在内皮细胞的腔膜面及部分腔膜面与基底面的交界处存在两种荧光信号共表达的区域.结论:P-gp除主要表达于脑肿瘤毛细血管内皮细胞的腔膜面外,也部分表达于胶质细胞的足突,共同发挥药物外排功能.从形态学上证实P-gp与Caveolin-1在细胞膜上存在共表达现象,有助于进一步从生化水平上深入研究此两种蛋白在血脑屏障内皮细胞的表达特点及作用机制.

HIF-1α在青紫型先天性心脏病患儿心脏慢性缺氧适应机制中的作用

目的探讨慢性缺氧对先天性心脏病患儿心脏缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)表达的影响。方法收集非青紫型先天性心脏病患儿16例、青紫型先天性心脏病患儿12例,体外循环前留取右心耳组织,采用半定量RT-PCR方法检测右心耳组织中HIF-1α mRNA水平,用免疫组织化学方法检测右心耳组织中HIF-1α蛋白的表达。结果青紫型先天性心脏病患儿心脏组织HIF-1α mRNA相对表达量与非青紫组比较差异无统计学意义(P>0.05),青紫型先天性心脏病患儿心脏组织HIF-1α蛋白表达量与非青紫组比较差异有统计学意义(P<0.001)。结论慢性缺氧上调先天性心脏病患儿心脏组织HIF-1α蛋白表达,该作用可能参与介导青紫型先天性心脏病患儿心脏慢性缺氧适应的分子机制。

应用主动学习策略优化医学生超声诊断学教学的体会

目的探讨主动学习策略改进传统讲授型教学在医学生超声诊断学教学中的应用价值。方法将60名重庆医科大学医学影像专业大学四年级本科生随机分为2组(试验组和对照组各30名),试验组采用经主动学习策略改造后的讲授型方法教学,对照组采用未经任何改动的传统方法教学。通过问卷调查分析试验组学生获取知识的实用性和认同度;通过理论测验比较两组的考核成绩和合格率。结果问卷调查结果显示,试验组学生认为经主动学习策略改进后的教学方法有助于理解当堂课程内容者27名(90.0%),有助于提高课堂专注程度、延长专注时间者25名(83.3%),有助于课后复习者25名(83.3%),认为对课堂自学感到负担者6名(20.0%),认为改进后的教学方法应继续推广者24名(80.0%)。理论测验结果显示,试验组平均考核成绩高于对照组[(83.54±7.52)分vs(.71.73±10.14)分],试验组合格率高于对照组(86.7%vs.63.3%),差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论主动学习策略有助于提高超声诊断学的课堂教学效果,可在今后的教学工作中推广应用。

生态系统论视角下217例青少年癌症患儿心理危机现状及影响因素分析

目的:调查了解青少年癌症患儿心理危机现状,基于生态系统论分析其影响因素,为构建青少年癌症患儿心理危机干预模式提供参考依据。方法:纳入8~18岁青少年癌症患儿及健康青少年,采用DASS-21(depression anxiety stress scale 21)量表现场调查,问卷数据双遍录入后进行分析。从生态系统论的微观、中观、外观、宏观系统分析患儿个体、家庭、环境、疾病等因素的关联度及相互影响,以明确其关键影响因素。结果:调查青少年癌症患儿218人,进入研究分析217人,心理危机检出率为45.6%,其中抑郁检出率(26.7%)高于健康青少年(12.5%),焦虑检出率(45.6%)高于健康青少年(13.5%),压力检出率(24.4%)高于健康青少年(8.5%)。在各影响因素里面,男性抑郁检出率高于女性,独生子女抑郁、压力检出率高于非独生子女,专制型家庭教养患儿抑郁、压力检出率高于民主型家庭教养患儿,首诊及定期随访患儿焦虑检出率高于未定期随访患儿,差异有统计学意义(P<0.05),将P<0.05的变量纳入多因素logistic分析,发现专制型家庭教养方式的青少年癌症患儿发生心理危机风险最高。结论:青少年癌症患儿存在焦虑、抑郁、压力等心理危机,独生子女及专制型家庭患儿表现尤为突出,需要医院、家庭、社会、学校多方位联合,实施预防性干预,为患儿营造良好的生态系统,促进其身心健康。

重组siRARγ腺病毒构建及其对小鼠肝脏祖细胞分化的影响

目的构建并筛选小鼠RARγ基因的siRNA腺病毒载体,并探讨抑制RARγ表达对小鼠肝脏祖细胞分化的影响。方法设计3对特异性针对小鼠RARγ基因的siRNA序列,体外退火形成双链,与SfiⅠ酶切后的pSES-HUS质粒连接,随后在BJ5183中与pAdEasy-1骨架质粒同源重组获得pAd-siRARγ重组腺病毒质粒,并在HEK293细胞中包装腺病毒Ad-siRARγ。腺病毒感染小鼠肝脏祖细胞HP14.5d,real-time PCR及Western blot检测RARγ的表达,1μmol/L ATRA诱导肝细胞分化,ALB-Gluc活性及PAS染色检测肝脏细胞分化的状态。结果 PCR、酶切鉴定均证实siRNA正确克隆至腺病毒质粒中,测序结果与设计的siRNA序列一致。腺病毒在HEK293细胞中包装10 d可见红色荧光细胞的云雾状扩增,HP14.5d细胞的48 h腺病毒感染率为60%。其中,Ad-siRARγ2、3可有效抑制小鼠HP14.5d细胞中RARγ的表达(P<0.05)。ATRA可诱导肝细胞分化,ALB-Gluc活性及PAS染色阳性细胞明显高于对照组,Ad-siRARγ2,3可显著抑制ATRA诱导的小鼠HP14.5d细胞的ALB表达和糖原合成能力(P<0.05)。结论成功构建并筛选出能有效抑制RARγ表达的siRNA腺病毒,感染小鼠肝脏祖细胞HP14.5d能显著抑制ATRA诱导的肝细胞成熟分化。

5种耐药基因蛋白在肝癌和肝母细胞瘤中的表达比较及临床意义

目的通过对成人肝癌和小儿肝母细胞瘤5种耐药基因蛋白的检测,研究肝癌和肝母细胞瘤的表达特点及临床意义,并探讨成人与小儿恶性肿瘤耐药基因蛋白表达的异同。方法应用SP免疫组织化学法检测20例肝癌和20例肝母细胞瘤标本P-gp、MRP1、LRP、GST-π、Topo-Ⅱ的表达。结果(1)总体上P-gp、MRP1、LRP、Topo-Ⅱ在小儿肝母细胞瘤中的表达低于成人肝癌;(2)GST-π在肝母细胞瘤中的表达明显高于肝癌;(3)肝癌P-gp的表达与AFP水平有关(P<0.05),肝母细胞瘤P-gp和LRP的表达与AFP水平有关(P<0.05)。结论(1)血清AFP的水平可作为临床上动态监测肝癌和肝母细胞瘤P-gp表达变化的参考指标;(2)除GST-π外,小儿肿瘤的耐药基因蛋白表达低于成人肿瘤,化疗效果较好。