重庆市巴南地区学龄前儿童维生素A营养状况与红细胞生成素水平的关系

目的了解重庆市巴南地区学龄前儿童的维生素A(vitamin A,VA)营养状况,全血中血红蛋白(hemoglo-bin,Hb)及红细胞生成素(erythropoietin,EPO)的水平,进一步探讨VA缺乏与贫血的相关机制。方法采用分层与整群抽样相结合的方法 ,在重庆市巴南区鱼洞镇7所规模>200名的幼儿园中随机选取3所中的所有3～6岁符合纳入标准的349名学龄前儿童。采用反相高效液相色谱法(high-performance liquid chromatography,HPLC)测静脉血中血清VA浓度,化学发光免疫测定法测定EPO浓度,氰化高铁法测量Hb浓度,并分析相关性。结果该地区学龄前儿童VA缺乏、边缘型VA缺乏及贫血发生率分别为1.72%、22.64%和22.64%;VA缺乏较VA正常儿童贫血的发生率有显著性差异(P<0.05),VA缺乏儿童的贫血发生率是VA正常儿童的2.32倍。Hb水平与EPO浓度呈显著性负相关(P<0.01)。贫血儿童较正常Hb水平儿童,EPO有显著差异(P<0.05)。在贫血儿童中,低VA水平(vitaminA<1.05μmol/L)儿童Hb浓度与EPO水平呈较强负相关(r=-0.46,P<0.05);在总体学龄前儿童中,低VA水平较VA正常儿童Hb浓度与EPO水平有较强的负相关性(r=-0.23,r=-0.16,P<0.05),Lg(EPO)与Hb回归方程斜率低VA较VA正常儿童增加0.0002。结论机体VA的营养水平影响Hb浓度对EPO的反馈性调节作用。

维生素A、锌对学龄前儿童红细胞生成素的影响

目的对学龄前儿童补充维生素A（vitamin A，VA）、锌（Zinc，Zn），论证分析VA/Zn影响血红蛋白（hemoglobin，Hb）与红细胞生成素（erythropoietin，EPO）的反馈调节机制。方法在重庆市近郊7所规模〉200人的幼儿园中随机选取2所中的所有3～6岁符合纳入标准的232名学龄前儿童，按分层随机整群抽样的方法，以幼儿园为单位，分成单独补VA组（A组）和补VA加Zn组（AZ组）。A组与AZ组儿童又按不同VA与Hb基础水平分组，干预前贫血合并VA不足的儿童定义为Ⅰ组，Hb正常合并VA不足的为Ⅱ组，贫血合并VA正常的为Ⅲ组。营养素补充6个月，补充干预前后分别检测Hb、VA、Zn和EPO水平。结果营养素干预6个月后，血清VA水平AZ组显著升高0.05 μmol/L（P〈0.05），但A组无明显变化。A组和AZ组儿童血清Zn水平干预前后分别显著升高了2.95 μmol/L和3.67 μmol/L（P〈0.05, P〈0.01）；Hb和EPO水平较干预前均显著升高，贫血的发生率均显著下降（P〈0.05, P〈0.01），但两组间变化值差异均没有统计学意义（P〉0.05）。A组Log10 EPO与Hb的直线回归方程斜率干预后显著下降了-0.009 9（P〈0.05），但AZ组无明显变化（P〉0.05）。Ⅰ组和Ⅲ组干预后Hb水平均显著升高（P〈0.05），其中Ⅲ组Hb水平升高较Ⅱ组有统计学差异（P〈0.05）；Ⅰ组儿童Log10 EPO水平变化较其他2组更明显（P〈0.05）。结论VA调节EPO的生成能力可受机体Hb水平的影响，机体VA的营养水平影响Hb浓度对EPO的反馈性调节作用。

骨形成发生蛋白9的siRNA筛选及功能检测

目的筛选特异性沉默小鼠BMP9基因的siRNA序列,在BNLCL.2胚胎肝细胞及C3H10细胞进行功能鉴定。方法体外退火获得4组simBMP9双链DNA序列,克隆至含有BMP9靶基因的pSOS-BMP9质粒中获得pSOS-simBMP9质粒,脂质体转染HEK293细胞,GFP检测筛选有功能的simBMP9片段,将筛选出的simBMP9构建腺病毒,感染BNLCL.2胚胎肝细胞,通过RT-PCR,Westernblotting检测BMP9的表达,simBMP9与BMP9腺病毒共感染C3H10细胞,碱性磷酸酶活性检测simBMP9对BMP9成骨诱导的抑制作用。结果在HEK293细胞中,四组simBMP9中有两组的GFP表达明显降低,同时,腺病毒介导的这两对simBMP9均能抑制胚胎肝细胞中内源性的BMP9表达,抑制率为50%～70%,BMP9能诱导C3H10细胞的成骨分化,碱性磷酸酶的活性明显高于对照组(P<0.01),而两组simBMP9与BMP9共感染组C3H10细胞的ALP活性均明显的低于BMP9组(P<0.01)。结论成功筛选出两对特异性沉默BMP9基因的siRNA片段,能有效抑制内源性和外源性的BMP9表达,为研究BMP9在肝细胞成熟分化中的作用及具体机制提供重要的分子手段。