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FAS基因突变导致自身免疫性淋巴细胞增生综合征(ALPS)一例
被引量:
4
1
作者
余春梅
张宇
+3 位作者
邹庆
唐雪梅
于洁
赵晓东
《免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第10期883-887,共5页
目的探讨1例FAS基因突变导致ALPS的临床特征、基因变异及其蛋白表达水平。方法患儿为男性,婴幼儿期起病,慢性、非恶性淋巴结和肝脾肿大,伴自身免疫性溶血性贫血、血小板减少及粒细胞减少。采用流式细胞仪检测双阴性T淋巴细胞和FAS蛋白...
目的探讨1例FAS基因突变导致ALPS的临床特征、基因变异及其蛋白表达水平。方法患儿为男性,婴幼儿期起病,慢性、非恶性淋巴结和肝脾肿大,伴自身免疫性溶血性贫血、血小板减少及粒细胞减少。采用流式细胞仪检测双阴性T淋巴细胞和FAS蛋白表达。采用PCR方法扩增患儿及父母FAS基因组DNA。采用RT-PCR扩增患儿及父母FAS mRNA。PCR产物直接进行双向序列测定及FAS突变基因表达频率测定。结果患儿CD3+CD4-CD8-TCRαβ+T细胞12.68%,T淋巴细胞上FAS蛋白的表达为9.96%,较正常对照降低。基因检测为患儿FAS基因4号外显子93位碱基错义突变(T>A),导致FAS蛋白第143位氨基酸由丝氨酸替换为半胱氨酸(Ser14Cys),其父为携带者。患儿FAS基因突变基因表达频率为95%,其父为60%。结论经临床、免疫学筛查和基因分析,患儿可诊为ALPS(g:18451T>A c:773T>A Ser143Cys),突变基因表达的频率可能影响疾病外显率。
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关键词
自身免疫性淋巴细胞增生综合征
FAS基因
基因突变
双阴性T细胞
下载PDF
职称材料
利用反向遗传技术制备重组人类偏肺病毒
被引量:
7
2
作者
张金辉
葛金英
+2 位作者
任妍
步志高
赵晓东
《微生物学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第8期1239-1243,共5页
利用反向遗传技术,将包含人偏肺病毒2个血清型A和B代表株NL/1/00和NL/1/99全基因组cDNA的质粒及其4种辅助蛋白N、P、L、M2.1的表达质粒pCITE-N、pCITE-L、pCITE-P、pCITE-M2.1分别共转染BSR-T7细胞以制备重组hMPV。3μg全长cDNA质粒,辅...
利用反向遗传技术,将包含人偏肺病毒2个血清型A和B代表株NL/1/00和NL/1/99全基因组cDNA的质粒及其4种辅助蛋白N、P、L、M2.1的表达质粒pCITE-N、pCITE-L、pCITE-P、pCITE-M2.1分别共转染BSR-T7细胞以制备重组hMPV。3μg全长cDNA质粒,辅助蛋白质粒pCITE-N、pCITE-L、pCITE-P、pCITE-M2.1分别为0.3μg、0.15μg、0.3μg和0.24μg,通过Lipofectamine2000转染BSR-T7细胞,转染后3天,将BSR-T7细胞于?80°C冻融一个循环以裂解细胞,取上清液感染VeroE6细胞。接种后的VeroE6细胞,6天细胞可观察到明显的细胞病变效应;RT-PCR检测出符合预期目标大小的450bp条带;间接免疫荧光实验检测感染后的VeroE6细胞可在荧光显微镜下可观察到特异性绿色荧光,结果一致表明全基因组cDNA及其辅助质粒产生了有感染性的重组hMPV病毒。用细胞病变法和测试重组病毒的病毒滴度和生长曲线,重组病毒6天时A型代表株NL/1/00在VeroE6细胞滴度为106.4TCID50/mL,B型代表株NL/1/99为105.33TCID50/mL。
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关键词
反向遗传技术
人偏肺病毒
病毒拯救
原文传递
绿色荧光标记重组人偏肺病毒空斑形成滴度测定方法的建立
被引量:
2
3
作者
余春梅
陈昕
+3 位作者
张金辉
王永
步志高
赵晓东
《中华微生物学和免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第8期771-774,共4页
目的 建立用于绿色荧光标记的重组人偏肺病毒(GFP-rhMPV)空斑形成滴度测定方法.方法 基因组中插入绿色荧光蛋白基因的hMPV全序列cDNA质粒和主要蛋白质表达质粒转入细胞293T后获得感染性重组hMPV.GFP-rhMPV在Vero-E6细胞中连续传代提...
目的 建立用于绿色荧光标记的重组人偏肺病毒(GFP-rhMPV)空斑形成滴度测定方法.方法 基因组中插入绿色荧光蛋白基因的hMPV全序列cDNA质粒和主要蛋白质表达质粒转入细胞293T后获得感染性重组hMPV.GFP-rhMPV在Vero-E6细胞中连续传代提升病毒滴度并保存.将等倍稀释的重组病毒液接种常规制备的Vero-E6细胞单层,用含或不含胰酶的低熔点琼脂精凝胶覆盖细胞,孵育一定时间后,采用荧光显微镜下计数荧光空斑数和抗原抗体蓝斑形成法计算病毒滴度.结果 感染后3 d,荧光显微镜下GFP-rhMPV可在低熔点琼脂糖凝胶覆盖层下形成分界较为清晰的绿色荧光集落,接种后3 d荧光空斑相对独立,便于计数.蓝斑形成法在感染后第5天蓝斑较大,易观察.此前拯救获得的GFP-rhMPV在宿主细胞Vero-E6中的复制滴度可达1×10^6 PFU以上.结论 成功建立了GFP-rhMPV的空斑形成实验滴度定量检测方法,为hMPV的致病机制、防治手段研究奠定了基础.
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关键词
人偏肺病毒
空斑形成实验
滴度测定
原文传递
题名
FAS基因突变导致自身免疫性淋巴细胞增生综合征(ALPS)一例
被引量:
4
1
作者
余春梅
张宇
邹庆
唐雪梅
于洁
赵晓东
机构
重庆医科大学附属儿童医院儿研所p
重庆医科大学附属儿童医院
肾脏免疫科
重庆医科大学附属儿童医院
急诊科
重庆医科大学附属儿童医院
血液科
出处
《免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第10期883-887,共5页
基金
教育部新世纪优秀人才支持计划(教技函[2006]6号NCET-05-0074)
重庆市杰出青年基金(编号CSCT
2008BA5040)
文摘
目的探讨1例FAS基因突变导致ALPS的临床特征、基因变异及其蛋白表达水平。方法患儿为男性,婴幼儿期起病,慢性、非恶性淋巴结和肝脾肿大,伴自身免疫性溶血性贫血、血小板减少及粒细胞减少。采用流式细胞仪检测双阴性T淋巴细胞和FAS蛋白表达。采用PCR方法扩增患儿及父母FAS基因组DNA。采用RT-PCR扩增患儿及父母FAS mRNA。PCR产物直接进行双向序列测定及FAS突变基因表达频率测定。结果患儿CD3+CD4-CD8-TCRαβ+T细胞12.68%,T淋巴细胞上FAS蛋白的表达为9.96%,较正常对照降低。基因检测为患儿FAS基因4号外显子93位碱基错义突变(T>A),导致FAS蛋白第143位氨基酸由丝氨酸替换为半胱氨酸(Ser14Cys),其父为携带者。患儿FAS基因突变基因表达频率为95%,其父为60%。结论经临床、免疫学筛查和基因分析,患儿可诊为ALPS(g:18451T>A c:773T>A Ser143Cys),突变基因表达的频率可能影响疾病外显率。
关键词
自身免疫性淋巴细胞增生综合征
FAS基因
基因突变
双阴性T细胞
Keywords
Autoimmune lymphoproliferative syndrome
FAS gene
Gene mutation
Double negative T cell
分类号
R551.2 [医药卫生—血液循环系统疾病]
下载PDF
职称材料
题名
利用反向遗传技术制备重组人类偏肺病毒
被引量:
7
2
作者
张金辉
葛金英
任妍
步志高
赵晓东
机构
重庆医科大学附属儿童医院儿研所p
中国农业科学院哈尔滨兽医
研
究所
出处
《微生物学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第8期1239-1243,共5页
基金
国家自然科学基金重点资助项目(No.30730098)
文摘
利用反向遗传技术,将包含人偏肺病毒2个血清型A和B代表株NL/1/00和NL/1/99全基因组cDNA的质粒及其4种辅助蛋白N、P、L、M2.1的表达质粒pCITE-N、pCITE-L、pCITE-P、pCITE-M2.1分别共转染BSR-T7细胞以制备重组hMPV。3μg全长cDNA质粒,辅助蛋白质粒pCITE-N、pCITE-L、pCITE-P、pCITE-M2.1分别为0.3μg、0.15μg、0.3μg和0.24μg,通过Lipofectamine2000转染BSR-T7细胞,转染后3天,将BSR-T7细胞于?80°C冻融一个循环以裂解细胞,取上清液感染VeroE6细胞。接种后的VeroE6细胞,6天细胞可观察到明显的细胞病变效应;RT-PCR检测出符合预期目标大小的450bp条带;间接免疫荧光实验检测感染后的VeroE6细胞可在荧光显微镜下可观察到特异性绿色荧光,结果一致表明全基因组cDNA及其辅助质粒产生了有感染性的重组hMPV病毒。用细胞病变法和测试重组病毒的病毒滴度和生长曲线,重组病毒6天时A型代表株NL/1/00在VeroE6细胞滴度为106.4TCID50/mL,B型代表株NL/1/99为105.33TCID50/mL。
关键词
反向遗传技术
人偏肺病毒
病毒拯救
Keywords
Reverse genetics technique, Human metapneumovirus, Rescue of virus
分类号
R346 [医药卫生—基础医学]
原文传递
题名
绿色荧光标记重组人偏肺病毒空斑形成滴度测定方法的建立
被引量:
2
3
作者
余春梅
陈昕
张金辉
王永
步志高
赵晓东
机构
重庆医科大学附属儿童医院儿研所p
中国农业科学院哈尔滨兽医
研
究所人兽共患病实验室
重庆医科大学附属儿童医院
肾脏免疫科
出处
《中华微生物学和免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第8期771-774,共4页
基金
国家自然科学基金(30730098)
重庆市杰出青年基金(2008BA5040)
文摘
目的 建立用于绿色荧光标记的重组人偏肺病毒(GFP-rhMPV)空斑形成滴度测定方法.方法 基因组中插入绿色荧光蛋白基因的hMPV全序列cDNA质粒和主要蛋白质表达质粒转入细胞293T后获得感染性重组hMPV.GFP-rhMPV在Vero-E6细胞中连续传代提升病毒滴度并保存.将等倍稀释的重组病毒液接种常规制备的Vero-E6细胞单层,用含或不含胰酶的低熔点琼脂精凝胶覆盖细胞,孵育一定时间后,采用荧光显微镜下计数荧光空斑数和抗原抗体蓝斑形成法计算病毒滴度.结果 感染后3 d,荧光显微镜下GFP-rhMPV可在低熔点琼脂糖凝胶覆盖层下形成分界较为清晰的绿色荧光集落,接种后3 d荧光空斑相对独立,便于计数.蓝斑形成法在感染后第5天蓝斑较大,易观察.此前拯救获得的GFP-rhMPV在宿主细胞Vero-E6中的复制滴度可达1×10^6 PFU以上.结论 成功建立了GFP-rhMPV的空斑形成实验滴度定量检测方法,为hMPV的致病机制、防治手段研究奠定了基础.
关键词
人偏肺病毒
空斑形成实验
滴度测定
Keywords
Human metapneumovirus Plaque assay Titration
分类号
R5 [医药卫生—内科学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
FAS基因突变导致自身免疫性淋巴细胞增生综合征(ALPS)一例
余春梅
张宇
邹庆
唐雪梅
于洁
赵晓东
《免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2010
4
下载PDF
职称材料
2
利用反向遗传技术制备重组人类偏肺病毒
张金辉
葛金英
任妍
步志高
赵晓东
《微生物学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2009
7
原文传递
3
绿色荧光标记重组人偏肺病毒空斑形成滴度测定方法的建立
余春梅
陈昕
张金辉
王永
步志高
赵晓东
《中华微生物学和免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2010
2
原文传递
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