TLR4基因3’非翻译区11367位点多态性与婴幼儿喘息性疾病的研究

目的检测TLR4基因3’非翻译区(3’UTR)11367位点的多态性,探讨该多态性与喘息性疾病的易感性、气道分泌物的细胞因子水平、病原学以及临床表型的关系。方法采用单管双向等位基因特异性扩增技术检测TLR4基因3’UTR11367位点的基因多态性。通过酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测喘息组患儿气道分泌物中细胞因子的水平。采用免疫荧光法进行呼吸道合胞病毒检测。结果TLR4G11367C位点核苷酸存在G/C二态性,表现为GG纯合、GC杂合两种基因型。喘息组和对照组该位点基因型、等位基因分布频率之间均存在显著性差异(P均为0.002)。GG型患儿IL-8水平、病原菌感染阳性率均明显高于GC型。不同基因型的临床表型无显著性差异。结论TLR4基因3’UTR基因多态性与喘息性疾病易感性相关,且与气道分泌物中IL-8水平、机体对RSV易感性、气道细菌定植有关。

NEMO基因新突变致少汗型外胚层发育不良伴免疫缺陷病1例

目的探讨1例少汗型外胚层发育不良伴免疫缺陷(ectodermal dysplasia and immunodeficiency,EDA-ID)患儿的临床特征和基因突变。方法患儿于2014年12月收入我院肾脏免疫科,根据其临床表现及家族史,常规免疫学筛查除外常见原发性免疫缺陷病(primary immunodeficiency disease,PID),qRT-PCR在mRNA水平检测患儿与对照(患儿父亲)IL-12/IFN-γ通路的完整性,并对患儿及其家系的NEMO基因进行分析。结果患儿反复发热,皮肤苍白干燥,头发稀疏,前额轻微突出,无牙胚发育,有真菌和卡介苗(BCG)感染。全血经BCG与IFN-γ联合刺激后,与单独的BCG刺激比较,患儿IL-12B的mRNA表达降低(P<0.05),而健康对照组IL-12B表达明显增加。患儿NEMO基因第10外显子出现一个纯合错义突变位点c.1241T>A,p.V414D,其母亲与二姨为相同位点的杂合突变。结论反复发热伴BCG感染的男性患儿合并皮肤苍白无汗、毛发稀疏、无牙等外胚层发育不良表型时,应考虑NEMO基因突变,母系家族色素失禁的病史有助于诊断,结合IL-12/IFN-γ轴的功能完整性检测和基因分析,可以早期诊断EDA-ID。

呼吸道合胞病毒感染中性粒细胞Toll样受体-4表达及其功能

目的:观察呼吸道合胞病毒(RSV)感染中性粒细胞Toll样受体-4(TLR4)的表达及对炎症介质产生的影响,探讨地塞米松(DEX)干预对RSV感染后中性粒细胞TLR4表达及炎症介质的作用。方法:RSV感染中性粒细胞,流式细胞术(FCM)检测中性粒细胞TLR4表达及代表中性粒细胞呼吸爆发功能的过氧化氢(H2O2),ELISA检测中性粒细胞培养上清的IL-6和IL-8水平,并观察阻断TLR4信号通路及DEX干预对RSV感染中性粒细胞功能的影响。结果:(1)RSV感染中性粒细胞TLR4表达增加;RSV感染中性粒细胞IL-6的产生增加,阻断TLR4信号传导,RSV感染组IL-6产生减少(阻断组IL-6:391.307±43.45ng/L;RSV感染组IL-6:466.03±36.478ng/L;对照组IL-6:21.205±15.059ng/L);RSV感染中性粒细胞IL-8和H2O2的产生均明显增加,阻断TLR4信号传导对IL-8和H2O2的产生没有影响。(2)DEX下调RSV感染后中性粒细胞TLR4表达,减少RSV感染的中性粒细胞产生IL-6、IL-8和H2O2的产生;阻断TLR4,与DEX协同抑制RSV感染中性粒细胞IL-6的产生,逆转DEX对RSV感染中性粒细胞H2O2产生的抑制作用。结论:TLR4信号通路在RSV感染后中性粒细胞炎症介质产生及呼吸爆发功能中起重要作用;阻断TLR4信号通路和DEX联合作用可能成为临床治疗的新靶点。

1例白细胞黏附分子缺陷病Ⅰ型的临床及分子特征分析

目的探讨1例白细胞黏附分子缺陷病Ⅰ型(LAD-1)患儿的临床特征和CD18蛋白表达异常及基因突变特征。方法总结患儿临床资料,常规免疫学筛查,流式细胞术检测白细胞表面CD18分子,PCR测序分析患儿及其父母ITGB2基因。结果男性患儿,5岁2月,2个月大时以脐炎起病,之后反复肺炎、中耳炎、鹅口疮、牙龈炎伴乳牙早脱。3+岁起反复皮疹、皮肤感染,伤口愈合延迟。患儿白细胞总数显著增高,以中性粒细胞为主,免疫球蛋白升高。淋巴细胞、中性粒细胞、单核细胞表面CD18分子表达患儿分别为10.14%、0.67%、2.54%,为中度缺陷,而父母表达正常(父分别为96.01%、99.05%、96.58%;母分别为91.12%、92.98%、81.43%)。ITGB2基因分析显示第13号外显子出现1个纯合错义突变c.1768T>C(p.C590R),其父母均为相同位点杂合突变。结论反复严重皮肤黏膜及软组织感染,尤其伴有脐炎、伤口愈合延迟、反复牙龈炎伴乳牙早脱、白细胞总数显著增高、以中性粒细胞为主、伴免疫球蛋白升高的患儿需警惕LAD-1。流式细胞术检测白细胞表面CD18分子可快速诊断LAD-1,ITGB2基因分析是诊断的金标准。

X染色体失活致女性X连锁慢性肉芽肿病

目的通过对1例罕见婴幼儿女性X连锁慢性肉肿病(X-CGD)患儿临床及产前产后CYBB基因特征的分析,丰富对该病的认识,并对该病的产前诊断予以警示。方法流式细胞术检测患儿及其父母中性粒细胞呼吸爆发功能及gp91phox蛋白表达情况;PCR直接测序法分析CYBB基因;患儿及父母DNA经酶切后,采用荧光标记PCR扩增,产物用毛细管电泳法检测计算X染色体失活程度。结果患儿,女,2个孪生哥哥均为X-CGD患者,母亲为突变基因携带者。曾行胎儿羊水细胞DNA分析,显示为CYBB exon9 c.1123delG杂合突变,是女性携带者。2月龄时,以肛周脓肿为首发症状,外周血中性粒细胞呼吸爆发功能明显异常,SI=0.65,NBT=0%;gp91phox蛋白无表达。患儿外周血细胞cDNA测序结果显示CYBB exon9 c.1123delG纯合缺失突变。X染色体失活检测,患儿失活率99.5%,其母亲失活率76.1%。结论由于女性携带者有出现正常X染色体失活的可能性,所以产前诊断时,要对胎儿的DNA及cDNA均进行分析,且应对女性CYBB基因杂合突变胎儿行脐带血中性粒细胞呼吸爆发功能检查明确是否为女性患者。

干扰素-γ受体1部分缺陷病临床及分子特征分析

目的本研究纳入1例8月龄时发生播散性卡介苗病的女性患儿,旨在探讨IFNGR1缺陷病的临床及分子特征。方法总结1例常染色体显性遗传IFNGR1部分缺陷病患儿临床资料,Q-RT-PCR检测IL-12-IFN-γ轴功能,流式细胞术检测PHA刺激的T细胞表面IFNGR1蛋白表达,Sanger测序法分析IFNGR1基因。结果患儿常规免疫功能无异常。患儿抗凝血经BCG+rhIFN-γ同时刺激后IL-12B的表达水平比单独使用BCG刺激略有增加(P>0.05),但较健康对照显著降低(P<0.05);IFNGR1蛋白表达高于健康对照。基因测序发现患儿IFNGR1第6外显子存在c.819822del4(p.N274Hfs*2)杂合突变,父母均无此突变。结论常染色体显性遗传IFNGR1基因部分缺陷病极为罕见,易发生播散性分枝杆菌感染,应尽早检测IL-12-IFN-γ轴功能、相关蛋白表达并行基因分析确诊。

原发性免疫缺陷病免疫功能评估进展

原发性免疫缺陷病(PID)是一组高度异质性疾病,以自幼反复严重感染为主要临床表现,由于其诊断和鉴别诊断困难,顽固反复感染,难于治疗,多数PID为疑难病例。近年来随着对免疫系统了解的深入以及新型免疫学检测技术的进展,越来越多的PID患者被明确诊断和适当治疗。文章就目前PID免疫功能评估进展及应用做简单论述,包括流式细胞术、定量分析T细胞剪切环、检测T细胞受体β链可变区谱型多样性等方面。

STAT1基因突变相关原发性免疫缺陷病

STAT1是细胞多种信号传导途径相交叉的枢纽，STAT1基因突变导致的原发性免疫缺陷病分为四类：（1）常染色体隐性遗传STAT1完全缺陷；（2）常染色体隐性遗传STAT1部分缺陷；（3）常染色体显性遗传STAT1缺陷；（4）常染色体显性遗传STATI功能增强性突变。其中前三种疾病发病机制主要与IFN-γ、IFN-α/β信号通路受损有关，而最后一种疾病发病机制可能与IFN-α/β信号通路增强有关。该文就STAT1基因突变相关原发性免疫缺陷病的发病机制、临床表现及诊断治疗进行综述。