8例儿童先天性冠状动脉瘘的介入治疗

目的总结先天性冠状动脉瘘（CAF）的临床特征及介入治疗效果，探讨经导管介入治疗CAF的方法及治疗原则。方法2006-2011年在该中心行心导管介入治疗8例先天性CAF患儿，对患儿的临床表现、CAF类型及其介入治疗路入途径、堵闭器类型、堵闭效果及随访进行回顾性分析。结果8例患儿均成功封堵，术后随访6个月至5年，无残余分流及其他并发症。结论经导管介入治疗先天性CAF安全、有效，应严格掌握手术适应证。

房间隔缺损患儿介入封堵术前后心脏储备功能的评估

目的:用基于心力-心音关系的方法和指标对房间隔缺损(Atrial septal defect,ASD)患儿介入术前后心脏储备功能的改变进行初步研究。方法:把实验对象分为单纯ASD患儿(n=20)组,ASD伴肺动脉高压(Pulmonary hypertension,PAH)患儿组(n=20)和对照组(n=20)3组,采用运动心力监测仪记录前2组介入前,介入后1 d,介入后6个月的静息状态下心音图,用同样方法记录对照组心音图,用心脏储备软件测量第一心音幅值(S1)、第二心音幅值(S2)、舒张期(D)和收缩期(S)时限,比较第一心音与第二心音幅值之比(S1/S2),舒张期与收缩期的时限之比(D/S)在各组间的差异。结果:与对照组相比,介入前ASD患儿S1/S2比值和D/S比值均降低,其中ASD伴PAH组降低更明显;S1/S2比值、D/S比值介入后升高,介入后6个月升高更明显。结论:ASD患儿介入前心脏储备功能降低,介入后心脏储备功能增加。

经胸超声心动图诊断儿童肺静脉异位连接

目的探讨儿童肺静脉异位连接的超声表现以及经胸超声心动图(TTE)诊断价值。方法回顾性分析经手术证实的31例肺静脉异位连接患儿,其中男22例,女9例,年龄22天～10岁,完全型肺静脉异位连接(TAPVC)18例,部分型肺静脉异位连接(PAPVC)13例。结果31例APVC在TTE中均有右心负荷增加表现。18例TAPVC的解剖分型为心上型9例(50%),心内型9例(50%),16例(88.89%)经胸超声心动图诊断与手术结果完全或基本符合,2例(11.11%)误诊为部分型房室间隔缺损。13例PAPVC的解剖分型为心内型12例(92.31%),心上型1例(7.69%),均合并房间隔缺损,其中9例(69.23%)合并静脉窦型房间隔缺损;9例(69.23%)TTE诊断与手术结果完全或基本符合,4例(30.67%)误诊为单纯房间隔缺损。结论超声心动图发现右心增大时,无论是否伴有房间隔缺损,均应注意常规检查4条肺静脉入口位置及血流方向。

解剖M型超声心动图对正常儿童心房功能的初步研究

目的应用解剖M型超声心动图分析正常儿童左、右心房和房间隔的机械功能特点。方法随机选取正常儿童30例,取心尖四腔心切面,清楚显示左、右心房和房间隔,测量并计算心房及房间隔运动参数。结果正常儿童心房及房间隔的运动参数随心动周期呈动态变化:心房壁在心室收缩期末最薄,于心室舒张期增厚,至心室舒张末期最厚;房间隔于心室收缩期末期突向右房,于心室舒张末期突向左房。左、右心房壁及房间隔厚度、增厚幅度比较差异无统计学意义;左、右心房最大横径比较差异无统计学意义;左心房最大横径缩短幅度大于右心房(P<0.05)。结论解剖M型超声心动图可以动态分析正常儿童心房运动特点,为心房功能检测提供了新方法。

儿童房间隔缺损介入术前后凝血机能的变化

目的探讨儿童房间隔缺损(ASD)介入治疗封堵器植入前后凝血机能的变化及ASD介入治疗的安全性。方法采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测19例儿童ASD患者介入封堵前后血浆凝血酶原片段1+2(F1+2)、β-血小板球蛋白(β-TG)、血浆组织型纤溶酶原激活物(t-PA)、D二聚体(D-dimer)浓度。结果与封堵术前比较,血浆F1+2、t-PA、D-dimer浓度术后即刻明显升高,术后1日较术前水平仍高,但差异无统计学意义,术后1个月基本恢复至术前水平;β-TG术后即刻明显升高,术后1天基本恢复至术前水平。结论儿童ASD介入封堵术后出现了凝血酶、纤溶系统的激活及血小板的活化,短期内恢复至术前水平;儿童ASD介入术后使用阿司匹林抗凝已足够;介入治疗ASD安全、有效。

CITED2基因CpG岛甲基化与先天性心脏病的关系

目的研究先天性心脏病患儿CITED2基因启动子区CpG岛的甲基化情况,并探讨其在该病发病中所起的作用。方法收集43例先天性心脏病患儿及2例意外死亡儿童右心耳组织,对CITED2基因进行突变筛查,同时利用生物信息学筛选,分别用亚硫酸氢盐修饰结合测序(BSP)及甲基化特异性PCR(MSP)检测CITED2基因启动子区CpG岛的甲基化情况,并运用实时荧光定量PCR检测CITED2基因mRNA的表达。结果先天性心脏病组启动子区存在4例杂合子突变(均为-341 T>G),此突变对CITED2基因mRNA的表达无影响。其中BSP法成功检测到先天性心脏病组甲基化阳性率为83.3%(10/12),MSP法分析发现甲基化阳性率为84.2%(16/19),同时CITED2基因异常甲基化使其mRNA的表达明显减低(P<0.05)。结论先天性心脏病中存在CITED2基因CpG岛的异常甲基化,此甲基化下调了CITED2基因mRNA的表达。

肝素对先天性心脏病患儿介入治疗后血小板及凝血功能的影响

目的观察肝素对先天性心脏病患儿介入治疗后血小板及凝血功能的影响。方法回顾性分析308例行心导管介入治疗的先天性心脏病患儿的临床资料,按照术中肝素的用量将患儿分为高剂量肝素组(148例)和低剂量肝素组(160例)。比较手术前后及不同剂量组患儿的血小板计数、凝血五项及D-二聚体水平。结果 308例患儿,平均年龄(5.6±8.4)岁,其中<1岁患儿占18.83%,男性患儿148例,占48.05%。入组患儿中,以动脉导管未闭最为常见,占43.18%;而肺动脉及主动脉瓣狭窄较为少见,仅占2.92%。术后患儿的血小板计数、纤维蛋白原、D-二聚体水平均低于术前,凝血酶原时间、凝血酶原时间-国际标准化比、活化部分凝血酶原时间、凝血酶时间均高于术前,差异均具有统计学意义(P<0.05)。高剂量肝素组凝血酶原时间、凝血酶原时间-国际标准化比均高于低剂量肝素组,差异具有统计学意义(P<0.05);而两组其他指标比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论肝素对先天性心脏病介入治疗后患儿的血小板及凝血功能具有不同程度的影响,但不同剂量的肝素使用对于患儿抗血栓的有效性和出血风险的安全性并无显著的影响。肝素在先天性心脏病介入治疗患儿中的使用安全有效。

小儿室间隔缺损3种不同手术方式的对比分析

目的:对经皮导管介入封堵术、直视修补术和经胸微创封堵术3种治疗小儿室间隔缺损(ventricular septal defect,VSD)的手术方式进行回顾性对比分析以有助于VSD手术方式的合理化选择。方法:2011年1月1日至2011年12月31日在我院分别行经皮导管介入封堵术(介入组,n=123)、直视修补术(直视组,n=104)和经胸微创封堵术(微创组,n=23)的VSD患儿共250例,比较3组的手术时间、输血量、术后机械通气时间、术后重症监护室(intensive care unit,ICU)监护时间、术后住院时间、成功率和并发症发生率。结果:直视组手术时间、输血量、术后机械通气时间、术后ICU监护时间、术后住院时间明显大于介入组和微创组(P<0.001)。介入组无需输血、机械通气和ICU监护;微创组手术时间和术后住院时间明显长于介入组(P<0.001)。3组手术成功率和主要并发症发生率比较无统计学差别(P>0.05)。结论:3种手术方式均是治疗VSD安全、有效的方法。应充分评估病情,根据不同的手术适应证选择合适的手术方式。

乙醇及其代谢产物对心肌祖细胞的毒性及H3K9表突变作用

目的探讨乙醇及其代谢产物对心肌祖细胞的毒性作用及H3K9表突变作用。方法以心肌祖细胞株为研究对象,分别用不同剂量乙醇(200、100、50mmol/L)、乙醛(16、12、8、4mmol/L)和乙酸(16、12、8、4mmol/L)处理。应用MTT实验筛选出乙醇及其代谢产物的干预浓度,Westernblot检测组蛋白H3K9乙酰化作用,实时定量PCR检测心脏发育相关基因GATA4、Mef2c、Tbx5mRNA表达量的变化。结果 MTT结果显示低浓度组50mmol/L乙醇、4mmol/L乙醛、4mmol/L乙酸的细胞活力与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),不影响心肌祖细胞增殖;高浓度组200mmol/L乙醇、12mmol/L乙醛、16mmol/L乙酸对心肌祖细胞抑制率分别为31.5%、36.0%、32.1%,抑制细胞增殖(P<0.05)。低浓度组乙醇、乙酸分别使组蛋白H3K9乙酰化水平升高2.4、2.2倍(P<0.05)。心脏发育相关基因表达无明显变化(P>0.05);高浓度组乙醇、乙酸分别使组蛋白H3K9乙酰化水平升高5.3、5.6倍,同时心脏发育相关基因GATA4、Mef2c表达均增加,与对照组及相应低浓度组比较均有统计学差异(P<0.05);乙醛则无论低浓度还是高浓度对组蛋白H3K9乙酰化水平及基因表达均无明显影响(P>0.05)。结论高浓度的乙醇及其代谢产物对心肌祖细胞均有毒性作用,而乙醇及乙酸具有组蛋白H3K9表突变作用,可能为酒精致先心病发病机制之一。

缬沙坦对心力衰竭幼鼠心功能及肌浆网Ca^(2+)-ATP酶活性的影响

目的:研究缬沙坦对心力衰竭(Heart failure,HF)(简称心衰)幼鼠心功能及肌浆网(Sarcoplasmic reticulum,SR)Ca2+-ATP酶(Ca2+-ATPase,SERCA2a)活性和Ca2+重吸收量的影响。方法:采用腹主动脉-下腔静脉造瘘术建立幼鼠心衰模型,术后8周随机分为2组:心衰组和缬沙坦治疗组,另设假手术组;缬沙坦灌胃给药,每日观察幼鼠的呼吸、皮毛颜色、活动量等发育情况;术后12周高频超声检测心功能;定磷法测定SR膜SERCA2a酶活性;荧光分光光度仪检测钙离子(Ca2+)的重吸收量。结果:与假手术组(n=15)比较,对照组(n=20)幼鼠左室舒张末期内径(LVIDd)、左室收缩末期内径(LVIDs)、左室舒张末期容积(LVEDV)、左室收缩末期容积(LVESV)均明显升高(P<0.01),左室射血分数(EF)、左室短轴缩短率(FS)均明显降低(P<0.01);与对照组比较,缬沙坦治疗组(n=15),LVIDd、LVIDs、LVEDV、LVESV均明显降低(P<0.01),FS、EF升高(P<0.01);对照组的SERCA2a活性较假手术组明显降低(P<0.01),而经缬沙坦治疗后,酶活性接近假手术组(P>0.05);若分别向含有3组SR的缓冲液加入0.5mmol/L ATP后,对照组的Ca2+的重吸收量同假手术组比较,明显降低(P<0.01),与对照组比较,缬沙坦组Ca2+的重吸收量显著提高(P<0.01)。结论:对照组幼鼠心功能显著降低,心肌细胞SERCA2a活性降低,Ca2+重拾量减少,缬沙坦可提高SERCA2a的Ca2+重拾能力,改善细胞收缩、舒张功能,进一步提高心脏功能并有效抑制心室重塑。

小鼠胚胎干细胞分化为心肌细胞的体外实验

目的:探索提高胚胎干细胞(ESC)体外诱导分化为心肌细胞的实验方法.方法:采用悬滴—悬浮—贴壁三步法(悬滴三步法)和悬浮—贴壁两步法(悬浮两步法),按诱导剂的不同分为Ⅰ组:丹参+5-氮杂胞苷(5-aza)组;Ⅱ组:丹参+维甲酸(RA)组;Ⅲ组:5-aza组;Ⅳ组:丹参组;Ⅴ组:RA组;Ⅵ组:阴性对照组6组进行诱导培养,比较在2种培养方法下各组心肌细胞的分化率.结果:Ⅰ,Ⅲ,Ⅳ,Ⅴ,Ⅵ组采用悬滴三步法培养的心肌细胞分化率分别为(77.78±5.09)%,(66.67±8.82)%,(51.11±1.92)%,(44.44±5.09)%,(23.33±3.34)%;采用悬浮两步法培养的心肌细胞分化率分别为(42.22±6.94)%,(36.67±8.82)%,(25.55±10.71)%,(17.78±5.09)%,(10.00±2.84)%.各组心肌细胞分化率悬滴三步法较悬浮两步法高,差异具有统计学意义(P<0.05).采用悬滴三步法培养Ⅰ组心肌细胞分化率最高可达78%,与其它各组相比较差异具有统计学意义(P<0.05).结论:悬滴三步法联合采用中药丹参与5-aza为诱导剂,可为体外ESC分化为心肌细胞的实验方法提供理论依据.

制备人血白蛋白改良载紫杉醇纳米微泡及其特性的实验观察

目的探讨人血白蛋白(HSA)改良载紫杉醇纳米微泡的制备,并观察其性能表征。方法 采用薄膜分散法及机械振荡法制备HSA改良的载紫杉醇微泡,观察其外观、形态,检测其粒径大小、分布、Zeta电位及包封率;行CEUS观察兔髂动脉的显影情况。结果 HSA改良载紫杉醇纳米微泡外观为乳白色混悬液,光镜下其分布均匀,呈圆球状,平均粒径为(772.9±6.2)nm,表面电位(-13.2±0.3)mV,浓度为(8.64±1.38)×109/ml;其包封率为(93.51±2.07)%,高于未加入HSA的载紫杉醇纳米微泡[(84.88±4.14)%,P<0.05]。经外周静脉注射HSA改良载紫杉醇纳米微泡后,兔髂动脉超声增强显影。结论 HSA改良载紫杉醇纳米微泡理化性质稳定,药物包封率高,可达到动脉增强显影效果。

Nesprin-1在C_2C_(12)肌原细胞系分化过程中的作用

目的探讨Nesprin-1在肌细胞分化过程中的作用。方法将C2C12肌原细胞分化成肌小管,采用Western blot和免疫荧光技术检测Nesprin-1蛋白表达水平和亚细胞定位在肌小管分化成熟过程中的改变;同时利用RNA干扰技术抑制Nesprin-1蛋白的表达,观察其对C2C12肌原细胞分化的影响。结果 Nesprin-1各亚型在C2C12肌原细胞系分化过程中表达水平以及在细胞中的定位有明显改变。Nesprin-1 siRNA组与对照组相比,分化前后C2C12细胞中Nesprin-1蛋白表达明显降低,同时分化后肌组织分化成熟的蛋白标志肌球蛋白(myosin)的表达量以及肌小节的数量比对照组均明显减少(P<0.001)。结论本文证实Nesprin-1了对骨胳肌细胞分化至关重要,不同分子大小Nesprin-1亚型在C2C12肌原细胞分化过程中发挥各自的特殊作用,在该细胞质与细胞核中的也有不同的作用。

nesprins基因在胚胎干细胞分化为心肌细胞过程中的表达

目的:探讨nesprins基因在小鼠胚胎干细胞(Embryonic stem cell,ESC)分化为心肌细胞过程中的表达及作用。方法:体外培养小鼠ESC,采用5-氮杂胞苷为诱导剂诱导ESC分化为心肌细胞,并进行心肌细胞鉴定;RT-PCR检测分化过程中各时间点(d7、d7+3、d7+6、d7+9、d7+20)nesprin-1、nesprin-2基因mRNA的表达;免疫荧光检测各时间点nesprin-1蛋白的细胞定位。结果:nesprin-1、nesprin-2基因mRNA在ESC分化为心肌细胞过程中均有表达;nesprin-1基因mRNA在d7、d7+3、d7+6均表达较高,无显著性差异,随后表达呈下降趋势,在d7+20时表达最低(P<0.05);nesprin-2基因mRNA在d7时表达最高,与d7+3、d7+6组间均有显著性差异(P<0.05),且随着分化时间的延长表达逐渐下降,在d7+20时表达最低;nesprin-1蛋白在ESC分化过程中均有表达,定位于核被膜及核周间隙。结论:nesprin-1、nesprin-2基因表达高峰在生心细胞的诱导和特化时期,推测nesprins对维持心肌细胞发育,使ESC更完全的向心肌细胞分化起重要作用。

运动心力监测仪检测儿童心脏储备可行性研究

目的探讨运动心力监测仪对儿童心脏储备检测的可行性。方法将2008年9月重庆医科大学附属儿童医院97名小学6～9岁儿童分为6～7岁组(46名)和>7～9岁组(51名),采用运动心力监测仪及心脏储备软件,在静息状态下记录儿童心音图,测量第1心音幅值(S1)、第2心音幅值(S2)、心动周期、舒张期(D)和收缩期(S)时限;计算S1/S2比值、D/S比值和心率(HR)。结果S1/S2比值、D/S比值和HR在6～7岁组分别为(2.15±1.68)、(1.46±0.26)、(95±13)次/min;>7～9岁组分别为(2.43±1.94)、(1.39±0.26)、(92±14)次/min;两组比较差异无统计学意义。结论运动心力监测仪系统可量化儿童心脏储备,其检测结果对于儿童体育教练和儿科临床医师评估儿童心脏状态可能有参考价值。

球囊扩张术建立幼兔动脉狭窄模型的可行性研究

目的建立幼兔髂动脉狭窄模型。方法新西兰大白兔70只,(60±15)d,随机分为手术组、假手术组、正常组。手术组采用球囊扩张损伤髂动脉内皮,观察其术后管腔面积,内、中膜面积变化情况,并计算其术后狭窄率。结果与正常组相比,手术组术后4周狭窄率高达80.24%。术后内膜、中膜面积显著高于正常组(P<0.001)。假手术组与正常组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论球囊损伤可用于建立幼兔髂动脉狭窄模型,为进一步临床研究提供实验基础。

临床诊疗限制型心肌病的研究进展

限制型心肌病的临床症状无明显特异性,且易与缩窄性心包炎误诊,其临床诊断比较困难。由于限制型心肌病的预后较差,目前的根治手术为心脏移植,故其早期诊断及早期干预治疗对于防治心力衰竭的发生及进展尤为重要。本文就限制型心肌病的临床诊断、基因诊断及治疗和预后的研究进展进行综述。

p300特异性siRNA载体的构建及其对心肌细胞GATA4表达的影响

目的构建并筛选小鼠p300特异性siRNA载体,并观察p300表达降低对心脏特异性转录因子的调控作用,为进一步研究p300介导的组蛋白乙酰化失衡对心脏发育的影响奠定基础。方法针对小鼠p300基因的保守序列区域设计并构建3个重组质粒p300RNAi1,p300RNAi2和p300RNAi3。利用阳离子脂质体将其分别转染入体外培养的乳鼠心肌细胞,分别利用RT-PCR和免疫荧光从mRNA和蛋白水平检测p300表达,判断抑制效率,并检测心脏特异性转录因子GATA4的表达水平。结果 pSOS-HUS组和p300RNAi2组中p300mRNA水平表达较正常对照组无明显降低,而p300RNAi1组和p300RNAi3组中p300mRNA表达量较正常组有明显降低(分别为0.2208±0.0200,0.1708±0.0400,vs0.5095±0.0300),且差别有统计学意义(P<0.05),抑制率分别为56.7%和66.5%。转染p300RNAi1组和转染p300RNAi3组的GATA4mRNA表达水平(分别为0.4231±0.1100,0.2627±0.0800)明显低于正常组(0.8564±0.0700)和阴性对照组(0.8415±0.0400),差别有统计学意义(P<0.05)。结论 p300特异性siRNA质粒载体构建成功,p300RNAi1和p300RNAi3具有确切阻断p300蛋白表达的作用,并下调GATA4的表达。

载紫杉醇脂质体微泡联合低频超声干预低龄兔血管结构重建对肝肾功能的影响

目的:评价载紫杉醇脂质体微泡(Paclitaxel-carrying liposome microbubbles,PLM)联合低频超声干预低龄兔血管结构重建对肝肾功能的影响。方法:新西兰大白兔24只,日龄(60±15)d,随机平均分为正常组、手术组及干预组,经球囊扩张术建立髂动脉狭窄模型,术后3周采用PLM联合低频超声对狭窄段血管进行处理,处理后1周观察其髂动脉血管管腔面积及内-中膜面积变化情况,并对肝功能及肾功进行检测。结果:与正常组相比,手术组髂动脉内-中膜增厚,细胞排列紊乱,狭窄率高达(80.22±6.7)%,与正常组相比具有显著差异性(P<0.05);干预组髂动脉部分内膜增厚,中膜细胞排列整齐,狭窄率为(16.17±10.45)%,与手术组及正常组相比均具有显著差异(P<0.05);各组肝功能及肾功能检测比较均未见统计学差异(P>0.05)。结论:PLM联合低频超声对低龄兔血管狭窄具有一定干预作用,同时对其肝功能及肾功能无影响。

川崎病(KD)患者血清中抵抗素对人冠状动脉内皮细胞(HCAEC)ET-1及NO/eNOS的作用

目的探讨抵抗素与川崎病(Kawasaki disease,KD)患儿冠状动脉内皮细胞ET-1及NO/eNOS的关系。方法收集川崎病患儿和健康儿童血清,加入人冠状动脉内皮细胞培养体系,分为4组:KD患儿血清组(KD组)、抵抗素组(Re组)、正常人血清组(N组)、KD患儿血清加抵抗素抗体组(KD+antiRe组)。干预24h后,硝酸酶还原法测定细胞上清液中NO水平,real-time PCR测定细胞ET-1及eNOS的mRNA表达,ELISA检测细胞上清抵抗素及eNOS蛋白的表达水平。结果各组抵抗素水平:与N组比较,KD组与Re组抵抗素水平明显增高(P<0.05),KD+antiRe组抵抗素水平明显下降(P<0.05),KD组较Re组降低(P<0.05)。各组NO水平:与N组比较,KD组和KD+antiRe组NO水平明显升高(P<0.05),Re组下降(P<0.05);KD+antiRe组较KD组NO水平升高更明显(P<0.05)。各组ET-1mRNA表达水平:与N组及KD+antiRe组比较,KD组、Re组的ET-1mRNA表达水平升高(P<0.05),N组与KD+antiRe组间差异无统计学意义,KD组与Re组间差异无统计学意义。各组eNOS mRNA及蛋白表达水平:KD组、Re组与KD+antiRe组较N组均降低(P<0.05),KD组较Re组及KD+antiRe组降低(P<0.05),Re组较KD+antiRe组降低(P<0.05)。结论抵抗素参与了KD患儿冠状动脉内皮细胞损伤,其机制可能与调节ET-1及NO/eNOS表达有关。