妊娠期肝内胆汁淤积症孕妇头发代谢组学研究

目的:探讨妊娠期肝内胆汁淤积症(ICP)早、中孕期孕妇头发(简称母发)中的代谢物以寻找特异性代谢分子。方法:纳入21例ICP孕妇和21例正常健康孕妇,分别采集早、中孕期头发,运用气相色谱-质谱法(GC-MS)进行相关代谢分子检测。结果:两组间共鉴定出164种代谢物,早孕期两组间的差异代谢物仅2种(P<0.05),而中孕期有19种差异代谢物(P<0.05),其中17种代谢物在ICP组增加,2种降低。中孕期的甘氨酸(glycine)是唯一满足OPLS-DA模型的变量[重要性因子(VIP)值>1,P<0.05]的代谢物,其曲线下面积(AUC)可达0.755。经过筛选的5种中孕期差异代谢物在7条通路有明显富集现象,包括乙醛和二羧酸代谢、氨酰tRNA生物合成、柠檬酸循环、谷胱甘肽代谢、甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢、硫胺素代谢、牛磺酸和亚牛磺酸代谢。其中,甘氨酸参与了5条代谢通路的功能调控。结论:作为ICP早期诊断的生物标志物,中孕期母发样本中的差异代谢物有着不可低估的潜力,中孕期母发的甘氨酸是最有潜力的差异代谢分子。头发代谢组学的兴起将为ICP的机制研究及诊治策略提供新思路。

加拿大妇产科医师协会《早产儿及足月儿的脐带管理指南》(2022年版)解读

脐带管理及结扎时限一直是产科存在争议的议题。恰当的脐带处理有助于新生儿肺泡扩张,增加新生儿的血容量、氧合、血压和血红蛋白量,同时可以降低缺血的风险。研究已经证实,在单胎早产儿中实施延迟脐带结扎可以降低包括脑室内出血在内的发病率及死亡率。

产后出血子宫切除对生活质量的影响

产后出血仍是全球孕产妇死亡的主要原因。早识别、早处理、避免严重出血带来的一系列并发症极其重要。当出血无法控制危及产妇生命时,及时行子宫切除术是最有效的治疗手段。子宫切除术后对患者的性生活及心理健康状况有一定的影响。

缺氧诱导滋养细胞野生型p53诱导磷酸酶上调代偿凋亡的机制

目的探讨野生型p53诱导磷酸酶(wild-type p53-induced phosphatase, Wip1)依赖p53途径调控滋养细胞凋亡的机制,为子痫前期发病机制提供新的研究方向。方法收集2017年6月至2018年12月于重庆医科大学附属第一医院剖宫产分娩的正常孕妇(15例)与子痫前期孕妇(13例)的胎盘组织,收集早孕期(10例)人工流产者的绒毛和蜕膜组织;取绒毛外滋养细胞株HTR8/SVneo细胞,采用物理缺氧和化学缺氧方法进行缺氧培养。利用蛋白质印迹法和实时荧光定量聚合酶链反应分别检测胎盘组织中Wip1蛋白和mRNA水平;免疫组织化学方法和免疫荧光法检测Wip1组织细胞定位;采用病毒感染和缺氧干扰Wip1表达后,通过流式细胞技术检测细胞凋亡水平变化,蛋白质印迹法检测p53、磷酸化p53(phospho-p53, p-p53)、鼠双微同源体2(mouse double minute 2 homolog,Mdm2)和切割型含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved caspase3, cl-cas3)凋亡通路相关分子的变化,并利用免疫共沉淀检测Wip1对Mdm2与p53相互作用的影响,并结合运用Mdm2-p53特异性抑制剂NVP-CGM097封闭结合位点进一步验证Wip1经Mdm2-p53途径调控滋养细胞凋亡。采用Student-t检验、Welch's-t检验和单因素方差分析进行统计学分析。结果(1)胎盘组织中Wip1主要表达于滋养细胞,在子痫前期胎盘(mRNA:1.711±0.141与0.860±0.126,t=4.496;蛋白:0.449±0.027与0.192±0.019,t=7.902)和物理缺氧(蛋白:1.376±0.086与0.977±0.114,t=2.792)、化学缺氧(蛋白:1.243±0.057与0.381±0.045,t=11.910)培养细胞中较相应对照组显著上调(P值均<0.05)。(2)与不影响Wip1表达的相应对照组比较,过表达Wip1可降低p53蛋白(物理缺氧:0.185±0.024与0.572±0.072;化学缺氧:0.400±0.067与0.803±0.064)、cl-cas3蛋白(物理缺氧:0.243±0.034与0.529±0.072;化学缺氧:0.179±0.011与0.368±0.025)和p-p53/53水平(物理缺氧:1.326±0.129与2.100±0.187;化学缺氧:0.473±0.028与0.925±0.036),降低细胞凋亡率[物理缺氧:(8.925±1.092)%与(17.610±1.980)%;化学缺氧:(13.910±1.886)%与(24.650±1.622)%],继而促进Mdm2-p53结合;敲降Wip1可引起相反效应(P值均<0.05)。(3)在结合运用NVP-CGM097封闭Mdm2-p53结合位点情况下,过表达和敲降Wip1表达均不能影响p53和cl-cas3表达。结论缺氧状态下,滋养细胞通过上调Wip1促进Mmd2-p53结合以代偿细胞因缺氧造成的p53累积,外源性上调滋养细胞Wip1水平可使细胞因缺氧所致的凋亡水平得以恢复。

阴道分娩新生儿窒息的预防

新生儿窒息是阴道分娩过程中常见的急危重症,也是引起新生儿不良结局的重要原因。应在围产期对母体及胎儿情况进行充分评估,明确高危因素,严密观察产程进展,正确判读胎心监护图形,及时给予必要的产科干预,从而降低新生儿窒息的发生率,降低新生儿重症监护病房住院率,改善母儿结局。

piR-3127964经PIWIL-3/载唾液酸蛋白途径调控滋养细胞侵袭力的机制

目的研究子痫前期与非病理妊娠胎盘组织之间差异表达的piR-3127964调控滋养细胞侵袭力的分子机制。方法收集2020年11月至2021年8月于重庆医科大学附属第一医院产科就诊的非病理性早产(对照组,n=12)与子痫前期孕妇(子痫前期组,n=10)经剖宫产分娩的胎盘以及早孕期人工流产者的绒毛组织(早孕期人工流产组,n=10)。提取对照组和子痫前期组胎盘组织的总RNA进行测序,利用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative-polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测piR-3127964在各类组织中的相对表达量。利用蛋白质印迹法检测3组中PIWIL-1、PIWIL-2和PIWIL-3的表达量。外源性调节HTR-8/SVneo细胞内piR-3127964的水平,通过qRT-PCR检测下游候选靶分子,即鸟嘌呤核苷酸结合蛋白样3-样蛋白(guanine nucleotide-binding protein-like 3-like,GNL3L)和载唾液酸蛋白(sialophorin,SPN)mRNA的相对表达量,利用qRT-PCR检测GNL3L和SPN mRNA在对照组和子痫前期组胎盘组织中的相对表达量。进一步通过双荧光素酶报告基因试验验证上述两者与piR-3127964的相互作用。通过荧光原位杂交和免疫荧光结合的方式明确piR-3127964和SPN在早孕期人工流产组绒毛组织中的定位。通过Transwell细胞侵袭实验探究piR-3127964对HTR-8/SVneo细胞侵袭能力的影响和潜在机制。采用独立样本t检验及单因素方差分析及LSD事后检验对数据进行统计学分析。结果(1)差异表达的piR-3127964预测的下游靶基因的富集通路与细胞运动相关;piR-3127964在早孕期人工流产组绒毛、对照组和子痫前期组胎盘组织中差异有统计学意义(分别为2.950±0.853、1.036±0.303与0.254±0.155,F=27.35,P<0.05);且piR-3127964定位于早孕期人工流产组绒毛的绒毛外滋养细胞(extravillous cytotrophoblasts,EVTs)中。(2)子痫前期组胎盘组织中PIWIL-3蛋白表达量明显低于对照组胎盘组织和早孕期人工流产组绒毛组织(0.810±0.400与3.175±0.429和6.843±1.379,LSD检验,P值均<0.05)。(3)与阴性对照相比,piR-3127964外源性模拟物(piR-mimics)和外源性抑制剂(piR-inhibitor)可显著改变SPN mRNA水平(分别为0.971±0.045与0.732±0.010、1.076±0.073与1.293±0.092,LSD检验,P值均<0.05);而GNL3L mRNA水平与piR-3127964水平无明显相关性。(4)野生型SPN(wild type SPN,SPN-WT)双荧光素酶报告基因质粒的荧光素酶活性在经piR-mimics(1.010±0.049与0.645±0.047,t=9.34)和piR-inhibitor(1.035±0.058与1.397±0.015,t=-10.60)的处理后出现显著变化(P值均<0.05)。(5)与对照组胎盘组织相比,SPN mRNA在子痫前期胎盘组织中显著上调(1.305±0.290与2.097±0.239,t=-4.22,P=0.006),而GNL3L mRNA在这两类组织中差异无统计学意义;免疫荧光实验提示SPN定位于早孕绒毛的EVTs中。(6)piR-inhibitor可显著抑制HTR-8/SVneo细胞的侵袭能力,敲低SPN后能逆转piR-inhibitor引起的侵袭能力下降效应(160.714±53.860与371.667±103.061和344.333±120.268,LSD检验,P值均<0.05)。结论piR-3127964在子痫前期胎盘中异常下调,通过上调SPN抑制滋养细胞侵袭力,可能是子痫前期的病理基础。