MEST/PEG1对绒毛外滋养层细胞侵袭和迁移能力的影响及其在子痫前期中的意义

目的:通过研究人中胚层特异性转录基因(mesoderm-specific transcript,MEST)对人绒毛滋养细胞迁移和侵袭等生物学功能的影响,探讨其在子痫前期(preeclampsia,PE)中发病的机制。方法:用免疫组化法和Western blot法检测正常和PE患者胎盘中MEST及DNA甲基转移酶(DNA methyltransferase,DNMT)的表达。并检测2组胎盘中MEST甲基化水平。用Western blot法检测缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)和MEST si RNA处理人滋养细胞株HTR8/Svneo后缺氧诱导因子(hypoxia-inducible factor 1α,HIF1α)及MEST表达水平;并检测si RNA转染后对各组细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。结果:MEST在正常胎盘中的表达(4.524±0.586)明显高于PE胎盘(2.640±0.334)且在PE胎盘中处于高甲基化状态。H/R后HIF1α表达明显升高(3.692±0.441,7.091±0.698),而MEST表达明显降低(4.856±0.169,2.205±0.318),特异性敲低MEST后HTR-8细胞侵袭和迁移能力均明显下降(1.057±0.061,0.551±0.029)(1.113±0.087,0.477±0.034),差异均有统计学意义(P<0.05);而增殖能力无明显影响(0.170±0.010,0.158±0.010)(P>0.05)。结论:推测MEST DNA甲基化异常可能影响滋养细胞的迁移和侵袭,从而参与子痫前期的发病。

TXNIP激活NLRP3炎性小体在子痫前期发病中的作用

目的:探讨硫氧还蛋白结合蛋白(thioredoxin-interacting protein,TXNIP)激活核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLR family pyrin domain containing 3,NLRP3)炎性小体与子痫前期(preeclampsia,PE)发病的关系。方法:收集重庆医科大学附属第一医院2013年12月至2014年6月分娩的15例PE和15例正常产妇的胎盘组织,应用Western blot检测胎盘中TXNIP与NLRP3的表达水平。以人绒毛外滋养细胞(human transformed primary extravillous trophoblast cell line,HTR8/SVneo)体外培养,分为正常对照组(N)组、缺氧复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)组、H/R+Scrambled si RNA(H/R+NC)组和H/R+TXNIP si RNA(H/R+si RNA)组。各组处理后使用Western blot检测细胞TXNIP和NLRP3蛋白表达水平,应用半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)活性检测试剂盒检测Caspase-1活性,应用蛋白质免疫共沉淀法(Co-Immunoprecipitation,Co-IP)检测TXNIP与NLRP3、凋亡相关的斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing CARD,ASC)之间的相互作用,并实时检测细胞侵袭与增殖。结果:TXNIP与NLRP3在PE组胎盘组织中的表达明显高于N组(P=0.003、P=0.002);在细胞模型中,H/R处理后,TXNIP与NLRP3的表达明显升高(P=0.011、P=0.022),相互之间作用明显加强;抑制TXNIP后,NLRP3表达明显降低(P=0.000),ASC蛋白水平也明显下降(P=0.001),而且降低H/R对侵袭与增值能力的抑制作用(P=0.001、P=0.038)。结论:TXNIP介导的NLRP3炎性体激活可能在PE发病中起作用。