CXCL13、IL-31在原发性肝癌患者血清中的表达及临床意义

目的:检测原发性肝癌(Primary hepatic carcinoma,PHC)患者血清CXCL13、IL-31的表达情况,探讨其对原发性肝癌诊断治疗和预后评估的临床价值。方法:收集78例PHC患者和36例健康体检者血清标本,采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测CXCL13、IL-31的表达水平,统计软件分析与临床病理特征和实验室指标的关系,Spearman相关分析检验与肝功能预后指标的相关性,ROC曲线分析CXCL13、IL-31、AFP对PHC的诊断价值。结果:PHC患者血清CXCL13表达明显高于对照组(P<0.001),与肿瘤大小、转移、TNM分期密切相关(P<0.05),与Child-pugh评分(Child pugh score)呈正相关;CXCL13联合AFP的ROC曲线下面积为0.938(P<0.05),灵敏度和特异性分别为82.8%、100%,较两种指标单独诊断时明显增高。然而,PHC患者血清IL-31的表达与对照组无显著差异,与临床各项指标均不相关。结论:CXCL13在PHC患者血清中高表达,其表达水平与肿瘤大小、转移、TNM分期密切相关,并未发现IL-31在PHC患者血清中存在表达增高的现象。因此,CXCL13可作为原发性肝癌诊断治疗及预后评估的血清学标志物。

CRISPR靶向切割毒力因子tcdB基因抑制致病艰难梭菌生长

目的应用CRISPR/Cas9系统对艰难梭菌主要毒力因子tcdB基因进行切割,达到特异性抑制致病艰难梭菌生长的效果。方法在线设计针对tcdB的sgRNA,分别将sgRNA与Cas9单独或共同作用于tcdB基因扩增产物,验证体外切割效能;分别将穿膜肽(CPP)-sgRNA或单独的sgRNA与CPP-Cas9单独或共同作用于产毒艰难梭菌,通过监测菌液A值和菌落计数,观察对细菌生长的抑制效果。同样的方法处理肠道其他细菌,验证特异性。结果sgRNA和Cas9共同作用可把tcdB扩增产物有效切割,而单独加入sgRNA或Cas9均无切割作用;单独加入CPP-sgRNA、CPP-Cas9、CPP对细菌生长没有影响;CPP-sgRNA与CPP-Cas9共同作用,无细菌生长;单独sgRNA与CPP-Cas9共同作用,细菌生长轻度受抑。用同样的方法将CPP-sgRNA+CPP-Cas9处理肠道其他细菌后,菌液A值和菌落计数与空白对照无差别。结论建立的针对tcdB的sgRNA与Cas9混合可在体外高效切割tcdB基因,抑制细菌生长;CPP可提高sgRNA转染进入细菌的效率。

CarbaNP法与改良Hodge试验检测产碳青霉烯酶肠杆菌的方法学评价

近年来，随着碳青霉烯类抗生素的使用增加，耐碳青霉烯肠杆菌相继在多个国家出现和报道，其中产碳青霉烯酶是其最主要的耐药机制，因此，快速准确地检测产碳青霉烯酶菌株显得尤为重要。2009年美国临床与实验室标准化协会（CLSI）曾推荐改良Hodge试验作为检测产碳青霉烯酶菌株的参考方法，然而近年来相关文献证实该方法存在一定局限性，其假阳性或假阴性结果比率较高。

融合蛋白CTP-FoxM1诱导C57BL/6小鼠骨髓来源树突状细胞的活化

树突状细胞(dendritic cells,DCs)疫苗负载的肿瘤抗原可以使DCs大量表达表面分子II类组织相容性抗原(major histocompatibility complex class-II,MHC-II)及共刺激分子CD40、CD80、CD86,促进Th1(T helper 1)型细胞因子的分泌,从而可以将肿瘤抗原充分递呈给T淋巴细胞,诱导机体产生杀伤肿瘤细胞的免疫应答。其中,肿瘤抗原是否能充分活化DCs是机体发挥抗肿瘤免疫应答的关键。该研究以融合蛋白CTP-Fox M1(cytoplasmic transduction peptide-forkhead box M1)为研究对象,探讨其对C57BL/6小鼠骨髓来源DCs的活化作用。首先,分别将胞质转导肽(cytoplasmic transduction peptide,CTP)、Fox M1(forkhead box M1)抗原相关基因连接入p COLD-TF-DNA,构建重组原核表达质粒p COLD-TF-CTP-Fox M1,转化感受态大肠杆菌BL21,IPTG(isopropylβ-Dl-thiogalactopyranoside)诱导表达,经亲和纯化、Western blot验证得到融合蛋白CTP-Fox M1。然后,用CCK-8试剂盒检测经不同浓度的融合蛋白CTP-Fox M1处理48 h后的DCs的存活率;用激光共聚焦显微镜观察融合蛋白CTP-Fox M1在DCs的定位情况;流式细胞仪检测DCs表面MHC-II类分子和共刺激分子CD40、CD80、CD86的表达情况;ELISA法检测DCs培养上清中细胞因子白介素-12(interleukin-12,IL-12)的分泌水平。结果显示:CTP-Fox M1对DCs的生长有一定的抑制作用,且与其浓度有关,浓度为1μg/m L的融合蛋白CTP-Fox M1处理组的DCs存活率(80.93%±8.36%)明显高于浓度为2μg/m L融合蛋白CTP-Fox M1处理组DCs的存活率(70.13%±5.38%,P<0.001)和4μg/m L融合蛋白CTP-Fox M1处理组DCs的存活率(62.97%±4.06%,P<0.001)。在激光共聚焦显微镜下可以观察到该融合蛋白能够在DCs胞质内定位,与对照组相比,该融合蛋白可以上调DCs表面MHCII类分子和共刺激分子CD40、CD80、CD86的表达量(P<0.01,P<0.05)及细胞因子IL-12的分泌量(P<0.001)。结果提示,融合蛋白CTP-Fox M1能促进DCs的活化,对肝癌的免疫治疗有一定的潜能,为下一步探索融合蛋白CTP-Fox M1负载的DCs是否能够在体内发挥免疫效应奠定了一定的基础。

利奈唑胺耐药肠球菌的分子流行病学和感染危险因素分析

目的探究利奈唑胺耐药肠球菌（LRE）的分子流行病学特点和感染危险因素。方法2011至2013年共收集重庆医科大学附属第一医院13株利奈唑胺耐药肠球菌，采用微量肉汤稀释法对菌株进行验证，并通过法国生物梅里埃Vitek2对12种抗生素进行MIC检测；多位点序列分型（MLST）、脉冲场凝胶电泳（PFGE）、Diversilab进行分子流行病学调查；对患者病例资料进行回顾性分析，采用Logistic回归模型来明确利奈唑胺耐药肠球菌的独立危险因素。结果13株利奈唑胺耐药肠球菌均对利奈唑胺呈现低水平耐药，对四环素、红霉素、环丙沙星多表现耐药，对青霉素、氨苄西林、替加环素等多表现敏感；我院以ST480型别为主，其中2013年7至9月有3株菌（菌株3～5）具有相同的序列分型（ST）型别、PFGE条带和rep—PCR分型结果，属于同一耐药克隆群；人住ICU、周围血管疾病、男性、低蛋白血症、肠道灌洗和利奈唑胺使用等是利奈唑胺耐药肠球菌的主要危险因素，其中，人住ICU（OR=8．74；P=0．008）、肠道灌洗（OR=8．39；P=0．015）、利奈唑胺使用（OR=10．19；P=0．039）是其独立危险因素。结论13株LRE均为多重耐药菌株，2013年下半年存在小规模的LRE流行，应重视LRE的监管工作，从而减少利奈唑胺耐药菌株的出现。

革兰阴性菌异质性耐药的研究进展

由于抗菌药物的广泛应用和不合理使用,细菌耐药进展越来越快,遏制细菌的进一步耐药迫在眉睫,研究发现异质性耐药是一种特殊的耐药形式,是细菌耐药进化的中间过程。目前许多临床工作者对异质性耐药的认识较局限,并且异质性耐药在临床常规药敏试验中多检测为假敏感,误导医生治疗用药,是导致临床感染治疗失败的重要原因。研究异质性耐药,对于细菌耐药的预防、控制和指导临床用药具有重要意义。革兰阴性菌是院内感染的主要病原菌,为了进一步加深对该类细菌异质性耐药的全面认识,现将国内外常见的革兰阴性杆菌异质性耐药的研究进展综述如下。