t-PA基因克隆及pcDNA3.1t-PA真核表达质粒的构建

目的 利用基因工程技术克隆组织纤溶酶原激活物 (t PA)基因并构建一种无细胞毒性、不激活原癌基因的真核表达的pcDNA3.1t PA质粒载体。 方法 采用高效Trizol试剂快速从人肺组织中提取RNA ,RT PCR获得t PAcDNA ,扩增、纯化、回收t PA基因片段并将质粒 pcDNA3.1和t PA基因片段分别双酶切 ,前者纯化回收大片段 ,后者纯化回收 1 .9kb片段 ,再将回收的pcDNA3.1大片段与t PA基因片段 (1 .9kb)重组。对重组pcDNA3.1t PA质粒进行单酶切和双酶切鉴定 ,并测序。结果 成功地从胎儿肺组织中克隆了t PA基因 ,并构建了以pcDNA3.1为载体的真核表达质粒载体。结论 含t