秋水仙碱对人瘢痕疙瘩成纤维细胞MMP-1、MMP-2及MMP-9表达的影响

目的研究探讨秋水仙碱对体外培养人瘢痕疙瘩成纤维细胞(keloid fibroblast,KFB)内基质金属蛋白酶-1(matrix metalloproteinase-1,MMP-1)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响方法取7例患者的瘢痕疙瘩组织进行体外成纤维细胞培养,待细胞培养至第3代时,加入浓度为0.125%的胰蛋白酶消化液浸泡至细胞质回缩、细胞间隙增大后,转种于75.0cm^2的培养瓶中继续培养;待细胞基本融合成片(密度达85%时)后,分别将每例患者瘢痕组织的传代培养细胞分为A组、B组、C组、D组及E组,A组加入含胎牛血清的DMEM培养基继续培养备用,B组、C组、D组、E组加入含胎牛血清的DMEM培养基及浓度分别为2、4、8、16μg/mL的秋水仙碱继续培养24 h(37℃,5.0%CO_2)后备用。采用逆转录聚合酶链反应(real-time PCK,RT-PCR)法检测基质金属蛋白酶mRNA的表达情况,Western Blot法检测基质金属蛋白酶蛋白的表达情况。结果 A组、B组、C组、D组、E组KFB中MMP-1 mRNA的表达水平分别为(0.174±(0.016)、(0.282±0.015)、(0.369±0.022)、(0.541±0.027)及(0.672±0.020),MMP-2 mRNA的表达水平分别为(0.201±0.033)、(0.371±0.026)、(0.548±0.031)、(0.653±0.019)及(0.796±0.024),MMP-1蛋白的表达水平分别为(0.127±0.031)、(0.205±0.013)、(0.293±0.027)、(0.349±0.034)及(0.512±.0.035),MMP-2蛋白的表达水平分别为(0.278±0.023)、(0.395±0.036)、(0.526±0.025)、(0.673±0.014)及(0.792±0.037),而MMP-9m,RNA及MMP-9蛋白均未见表达。与A组对比,B组、C组、D组及E组KFB中MMP-1 mRiA、MMP-2 mRNA、MMP-1蛋白及MMP-2蛋白的表达水平均较高,P均<0.01,差异具有统计学意义,且随着秋水仙碱浓度的增高,B组、C组、D组及E组KFB中MMP-1 mRNA、MMP-2 mRNA、MMP-1蛋白及MMP-2蛋白的表达水平均呈逐渐增高的趋势,P均<0.01,差异具有统计学意义。结论秋水仙碱可提高KFB中MMP-1与MMP-2的表达水平,从而达到抗纤维化、抑制瘢痕疙瘩形成的目的,且在一定浓度范围内,其作用随着秋水仙碱浓度的增加而逐渐增强,有望成为临床治疗瘢痕疙瘩的一线药物。