肝细胞肝癌中GPC1的表达水平及临床预后意义

目的:探讨肝细胞癌(HCC)及肝癌细胞系中细磷脂酰肌醇蛋白聚糖-1(GPC1)的表达水平及与患者临床预后的相关性。方法:2011年10月至2013年11月,HCC患者175例与肝血管瘤(HC)患者27例,均经病理检查并确诊,采用开腹或腹腔镜根治术进行肝癌根治性切除,随访期至2018年12月,中位随访43个月。采用荧光定量聚合酶链反应(RTQ-PCR)、免疫印迹试验(WB)、免疫组化试验和ELISA检测患者HCC肿瘤组织与配对癌旁组织、血清及肝癌细胞系中GPC1的表达水平。分析GPC1的表达水平与患者不良预后情况的相关性。结果:GPC1在肝癌肿瘤组织中表达上调,在转移性肝癌中表达更强,在肝癌细胞系中也观察到同样的结果,HCC患者血清GPC1高于健康对照组(HC)(P<0.05)。高GPC1表达组的HCC患者的无复发生存率(RFS)和疾病特异性生存率(DSS)均显著低于低GPC1表达组的HCC患者(P<0.05)。HCC患者中GPC1的高表达与肿瘤大小及TNM分期显著相关(P<0.05)。肿瘤大小、TNM分期和GPC1表达是HCC患者RFS和DSS的独立预测因素。结论:HCC患者中GPC1的高表达与患者的不良预后密切相关,GPC1可作为HCC患者一种潜在的诊疗指标。

腹腔镜肝癌根治术对患者疼痛应激、胶原蛋白及其代谢产物的影响

目的：研究腹腔镜肝癌根治术对患者疼痛应激、胶原蛋白及其代谢产物的影响。方法：选取2011年9月～2013年12月于本院进行肝癌根治术的82例患者为研究对象，将其随机分为对照组（开腹手术组，41例）和观察组（腹腔镜手术组，41例），比较两组患者术前1d及术后1、3、7d的血清疼痛应激、胶原蛋白及其代谢产物指标水平。结果：观察组术后1、3、7d的血清疼痛应激、胶原蛋白及其代谢产物指标水平均明显低于对照组，且观察组术后1d的血清疼痛应激指标明显高于本组其他时间点的检测结果，差异均有统计学意义（P均〈0．05）。结论：腹腔镜肝癌根治术对患者疼痛应激、胶原蛋白及其代谢产物的影响优于开腹手术，患者受到的手术创伤较小，且恢复较快。

肝癌切除术患者围术期胃肠功能及血小板相关指标的变化

目的：研究肝癌切除术患者围术期胃肠功能及血小板相关指标的变化情况。方法：选取2012年8月-2014年2月于本院和重医附二院肝胆外科进行肝癌切除术治疗的41例患者为观察组，同时期的41例体检健康同龄人员选为对照组，比较观察组术前1d及术后1、3、7、14d时和对照组的血清胃肠功能及血小板相关指标。结果：观察组术前1d术后1、3、7、14d的血清胃肠功能相关指标水平均明显低于对照组，血小板活化指标及血小板分布宽度（PDW）、平均血小板体积（MPV）、大型的血小板比率（P—LCR）均高于对照组，而血小板压积（PCT）则低于对照组，差异均有统计学意义（P均〈0．05），而观察组术后14d血小板相关指标与对照组无明显差异（P均〉0．05）。结论：肝癌切除术患者围术期胃肠功能及血小板相关指标的变化较大，应根据其各项指标变化特点给予针对性地干预。

游离脂肪酸通过自噬调节Kupffer细胞中NLRP3炎症小体的激活抑制非酒精性脂肪性肝炎的机制研究

目的探讨自噬在非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)中对NLRP3炎症小体激活的调控作用。方法将分离培养的Kupffer细胞(KCs)随机分为对照组、棕榈酸(PA)组、PA+雷帕霉素组(自噬激活组)和PA+渥曼青霉素组(自噬抑制组)。收集细胞及培养基上清液,通过qPCR与Western Blotting技术检测四组KCs中自噬和NLRP3炎症小体相关基因的mRNA及蛋白表达水平,通过ELISA技术检测KCs培养基上清液中促炎因子IL-1β的水平。再将20只C57BL/6小鼠随机分为对照组和NASH组,通过HE染色观察两组的肝脏组织病理学变化,qPCR与Western Blotting技术检测肝组织相关基因和蛋白的表达情况。结果PA组自噬相关基因Atg5、Atg7、Beclin-1和NLRP3炎症小体相关基因NLRP3、ASC、Caspase-1的mRNA表达水平均显著高于对照组(P<0.01);LC3Ⅱ/LC3Ⅰ转化、Beclin-1、NLRP3、ASC和Caspase-1的蛋白表达水平也明显高于对照组(P<0.01)。自噬激活组自噬相关基因mRNA表达水平高于PA组(P<0.05),NLRP3炎症小体相关基因mRNA表达水平低于PA组(P<0.05);LC3Ⅱ/LC3Ⅰ转化和Beclin-1的蛋白表达水平高于PA组(P<0.05);NLRP3、ASC和Caspase-1的蛋白表达水平低于PA组(P<0.05)。自噬抑制组自噬相关基因和蛋白表达水平低于PA组(P<0.05),NLRP3炎症小体相关基因和蛋白表达水平明显高于PA组(P<0.01)。结论在PA刺激下,激活自噬可以抑制KCs中NLRP3炎症小体的激活和IL-1β的分泌,缓解炎症反应,而NASH过程中自噬功能受损,失去对NLRP3炎症小体激活的限制作用。

P62-ASC泛素化介导自噬对NLRP3炎症小体调节的机制研究

目的探讨棕榈酸(PA)刺激下P62介导的自噬和含NLR家族Pyrin域蛋白3(NLRP3)炎症小体相互作用机制。方法分离培养小鼠Kupffer细胞(KCs),分对照组、PA组、渥曼青霉素组和雷帕霉素组。Western blot测定各组KCs中LC3、NLRP3、凋亡相关点样蛋白(ASC)、半胱氨酸天冬氨酸酶-1(caspase-1)及Beclin-1表达水平的变化,激光共聚焦显微镜观察P62与ASC,以及P62与LC3在细胞中的共定位情况;免疫共沉淀技术测定PA刺激前后P62与ASC、LC3之间的相互作用;Western blot测定PA处理12 h前后ASC泛素化改变情况。结果与对照组比较,PA组LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、NLRP3、ASC、caspase-1和Beclin-1表达水平明显升高(P<0.05)。而渥曼青霉素组LC3Ⅱ/LC3Ⅰ较PA组下降,NLRP3、ASC及caspase-1表达水平较PA组增加(P<0.05);雷帕霉素组LC3Ⅱ/LC3Ⅰ较PA组增加,而NLRP3、ASC及caspase-1表达水平较PA组减少(P<0.05)。激光共聚焦结果显示KCs中P62与ASC、P62与LC3共定位,且在PA处理24 h后明显增强。免疫共沉淀结果表明,与对照组比较,PA组P62、ASC形成的共聚体明显增多。Western blot检测结果表明,PA组ASC泛素化水平较对照组增强。结论KCs在PA刺激下,自噬与NLRP3炎症小体的表达均增强,且促进自噬能降低NLRP3炎症小体的表达,对KCs具有保护作用。P62对ASC泛素蛋白的识别在自噬对NLRP3炎症小体的调节中非常关键。