新型呼肠病毒M片段对核转录因子κB的活性抑制的研究

目的探讨新型呼肠病毒M片段能否抑制核转录因子-κB(nuclear factor kappa-light-chain-enhancer of activated B cells,NF-κB)的活性。方法构建3个不同中基因节段的重组真核表达质粒,并瞬时转染真核细胞,利用荧光素酶双报告系统检测其对NF-κB激活有抑制效应的基因。结果酶切鉴定3个基因重组质粒均构建成功。其中M3基因表达的蛋白对肿瘤坏死因子α介导的NF-κB激活有较明显的抑制,抑制率达55%。而M1和M2基因表达的蛋白较之于空载体均无明显的抑制效果。结论 M3基因能显著抑制肿瘤坏死因子α介导的NF-κB激活,为研究病毒的致病及免疫调控机制提供了重要理论依据。

雪胆总皂苷抗家兔动脉粥样硬化作用的实验研究

目的探讨雪胆总皂苷对新西兰兔动脉粥样硬化模型(AS)的影响及其作用机制。方法将36只雄性新西兰兔随机分为6组,即对照组,模型组,雪胆总皂苷高、中、低剂量(200、100、50 mg/kg)组及阳性药辛伐他汀(200 mg/kg)组。除对照组饲以普通饲料外,其余各组饲以配方高脂饲料(79.5%基础饲料+15%蛋黄粉+5%猪油+0.5%胆固醇)3周,再去除配方高脂饲料中胆固醇继续饲养3周。从造模开始ig给药,每日1次,连续给药6周。给药3周后检测血清三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C);第6周末次给药后检测血清TG、TC、HDL-C、LDL-C、载脂蛋白AI(Apo AI)、载脂蛋白B(Apo B)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、一氧化氮(NO)、内皮素(ET)、血栓素B_2(TXB_2)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、C反应蛋白(CRP)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素8(IL-8)和6酮前列腺素F_(1α)(6-keto-PGF_(1α))的量及血液流变学相关指标;计算主动脉脂质面积百分比,并在光镜下观察血管内膜形态学病理改变。结果与模型组比较,雪胆总皂苷高、中剂量组在给药3周后能明显降低AS兔的血清TC和TG值,其中高剂量组能明显升高血清HDL-C值;雪胆总皂苷高剂量组6周后能明显升高HDL-C、Apo AI、SOD、GSH-Px、NO、6-keto-PGF_(1α)和降低TC、TG和LDL-C、Apo B、ET、TXB_2、TNF-α、CRP、IL-6和IL-8的量,中、低剂量组以上指标也有不同程度的升高或降低;雪胆总皂苷高、中剂量组能明显降低AS兔的全血黏度(高切和低切)、红细胞聚集指数和主动脉脂质面积百分比,明显改善血管内膜管壁脂质沉积、管壁增厚及管腔狭窄程度。结论雪胆总皂苷能干预兔AS的发生、发展,其作用环节与调节血脂水平、抗炎作用、保护血管内皮细胞功能和改善血液流变学指标密切相关。

妇安栓剂对兔子宫内膜异位症的研究

目的:观察妇安栓剂对兔子宫内膜异位症模型细胞因子和血液流变学的影响。方法:参照文献复制子宫内膜异位症家兔模型,造模成功后随机分为假手术组、模型组、妇安栓剂(7.5、15、30g/kg)组和达那唑组15mg/kg组,每组6只。每天灌胃给药一次,假手术组与模型组给予同体积蒸馏水,连续给药4周。末次给药后观察异位内膜组织生长情况,检测血液流变学相关指标;放射免疫法测血浆6-酮-前列环素(6-Keto-PGF1α)和血栓素B2(TXB2)的含量;ELISA法测血清、腹腔液白介素-8(IL-8)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量;病理组织学检查异位内膜显微结构变化。结果:妇安栓剂各剂量组对家兔异位内膜组织的生长状况具有明显保护作用;30和15g/kg剂量组均能明显升高家兔血浆6-Keto-PGF1α和降低血浆TXB2的含量;明显降低血清和腹腔液中IL-8和TNF-α的含量;明显降低全血粘度(高切和低切)、血浆粘度、红细胞压积和红细胞聚集指数;病理组织学检查结果表明各剂量组对异位内膜显微结构具有明显改善作用。结论:妇安栓剂可能通过调节机体细胞因子含量变化和活血化瘀作用,达到改善盆腔内环境和血液循环,抑制异位内膜增生,促进异位内膜结节的消化吸收、软化粘连,从而达到治疗子宫内膜异位症的目的。

甲基斑蝥胺片对Beagle犬尿液微量蛋白和尿酶的影响

目的:探讨甲基斑蝥胺片对Beagle犬肾毒性以及对其尿液微量蛋白和尿酶的影响。方法:24只Beagle犬,雌雄各半,随机分4组,每组6只,即阴性对照组(空白片)、甲基斑蝥胺片6.11,12.21,24.42 mg·kg-1剂量组,连续口服给药30 d,每天1次。药物组及对照组Beagle犬在给药后1,2,3,4周,进行新鲜尿液采集,将尿液进行尿常规检测;给药第15,30天检测血清尿素氮(BUN)、肌酐(Crea)、总蛋白(TP)和白蛋白(ALB)以及钠、钾、氯电解质;给药第15,30天检测尿液微量白蛋白(m Alb)、肾脏损伤分子-1(KIM-1)、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)、N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)、丛生蛋白(clusterin)、β2-微球蛋白(β2-MG)、α1-微球蛋白(α1-MG)、丙氨酸氨肽酶(AAP)和免疫球蛋白Ig G。结果:与对照组相比,各剂量组尿液中尿蛋白和白细胞增加;连续15 d口服甲基斑蝥胺,各剂量组m Alb均升高,其中高剂量组KIM-1,NGAL,clusterin,NAG和AAP含量均明显升高,中、低剂量组未见统计学差异,同时血SCr和BUN未见明显异常;连续30 d给药后,各剂量组m Alb,KIM-1,clusterin,NAG,AAP均升高,呈量效关系,其中高剂量组NGAL及β2-MG含量明显升高。以上指标的含量均随着剂量的增加及时间的延长而明显升高,与血清中BUN,SCr呈相关性,提示尿液m Alb,KIM-1,clusterin,NAG和AAP指标,能够灵敏反映微量尿蛋白和尿酶的变化。结论:甲基斑蝥胺片具有一定的肾脏毒性,尿液m Alb,KIM-1,clusterin,NAG和AAP指标可做为评价甲基斑蝥胺早期肾毒性的生物标志物。

高效液相色谱-蒸发光散射法测定不同产地雪胆中齐墩果酸的含量

目的用高效液相色谱-蒸发光散射(HPLC-ELSD)法测定不同产地雪胆中齐墩果酸的含量。方法色谱柱:十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相:甲醇-水-冰醋酸(270∶30∶0.2);流速:0.6mL·min^(-1);柱温:35℃;蒸发光散射检测器检测;漂移管温度:85℃;气体流速:2.70 L·min^(-1)。考察该方法的专属性、标准曲线和定量下限、精密度与回收率、稳定性。结果齐墩果酸在0.11~1.70μg内线性关系良好,回归方程为y=23.11x+14.90(r=0.999 9),平均加样回收率为99.18%,RSD=0.78%。12个不同产地样品中浙江乌岩岭雪胆中齐墩果酸最高,为(0.18±0.05)%;广西龙州县弄岗自然保护区的最低,为(0.08±0.02)%。结论不同产区、同一产地的不同地区的雪胆因环境因素,所含齐墩果酸的含量存在一定差异。