血清药理学方法观察复方斑蝥胶囊对人肝癌细胞SMMC-7721增殖的影响

目的 :研究复方斑蝥胶囊含药动物血清对人肝癌细胞SMMC -7721增殖的影响。方法 :采用血清药理学方法 ,对兔灌胃给予不同剂量 (临床等效剂量、2倍临床等效剂量和3倍临床等效剂量 )的复方斑蝥胶囊混悬液 ,应用MTT比色法观察含药血清对人肝癌细胞SMMC -7721增殖的抑制作用 ,同时观察临床等效剂量组各采血时间点的抑制作用。结果 :3个剂量组的含药血清对SMMC -7721细胞增殖均有抑制作用 (P<0 01) ,其中以3倍临床等效剂量组含药血清的抑制率最高 ;临床等效剂量组各采血时间点的含药血清对SMMC -7721细胞增殖均有抑制作用 (P<0 05) ,其中3h时含药血清的抑制率最高。结论 :复方斑蝥胶囊含药动物血清对人肝癌细胞SMMC -7721增殖具有一定的抑制作用 ,并具有剂量依赖性。

人参皂甙诱导白血病细胞凋亡及对Fas、FasL表达的影响

目的 研究人参总皂甙诱导白血病细胞凋亡及其机制,为进一步开发人参皂甙提供理论与实验依据。方法 采用图像分析术、流式细胞术、形态学观察与免疫细胞化学等方法,研究人参总皂甙诱导K562细胞凋亡。结果 人参 总皂甙对K562细胞有增殖抑制作用,并可诱导K562细胞凋亡明显增加,同时K562细胞Fas表达升高。结论 人参总皂 甙能诱导K562细胞凋亡,其机制可能与调控Fas表达升高有关。

肺炎链球菌转化模型的建立与优化

建立肺炎链球菌转化模型，优化转化体系，提高转化率，以便于进一步研究其致病的分子机制。制备肺炎链球菌感受态。首先在不同菌密度下转化外源DNA，计数抗生素筛选平板上的转化菌落，比较其转化率，确定转化的最适菌密度；然后在此菌密度下比较CSP诱导不同时相的转化率，同时用RT-PCR检测感受态调控基因comE的表这。对所用血清3型菌株而言转化的最适菌密度在OD550=0．09～0．10之间；CSP-2诱导10min后转化率最高，可达（15．6±3）％；comE的表达也在CSP-2诱导10min后达到最高。在实验室条件下。肺炎链球菌转化受多种因素的影响，必需控制好各种因素。选择最优条件才能获得稳定、高效的转化。

人胱抑素C单克隆抗体的制备、鉴定及初步应用

目的:制备人胱抑素C(Cystatin C,Cys C)的单克隆抗体(McAb),并建立检测人血清Cys C的颗粒增强透射免疫浊度分析法(PETIA)。方法:构建人Cys C的原核表达载体pET32a(+)/Cys C,纯化Cys C重组蛋白并免疫BALB/c小鼠,杂交瘤技术制备Cys C的McAb;以自制的McAb包被乳胶颗粒,建立PETIA法测定血清Cys C,并对其分析性能进行初步方法学评价。结果:建立分泌抗Cys C单克隆抗体的杂交瘤细胞株3株,其分泌的McAb为IgG1,Western blot检测证实该抗体能与目的蛋白发生特异性结合;将杂交瘤细胞注射于小鼠腹腔,腹水中Cys C McAb效价为1∶4×106;用自制的McAb建立定量测定Cys C的PETIA,方法学评价试验结果证实我们建立的PETIA法,与进口试剂有很好的可比性,具有较满意的方法学性能。结论:成功制备了抗Cys C单克隆抗体,该抗体可用于建立定量检测Cys C的PETIA法。

结核杆菌Ag85B-DNA与H37Ra序贯免疫小鼠后细胞免疫的探讨

[目的]探讨用结核分枝杆菌Ag85B-DNA(pTB30m)和结核菌H37Ra序贯免疫小鼠后产生的特异性细胞免疫。[方法]用碱裂解法制备Ag85B成熟蛋白的真核表达质粒(pTB30m),初次免疫小鼠2周后,用H37Ra皮内加强免疫(DNA-85B/H37Ra组),同时设定Ag85B-DNA/BCG组、H37Ra组、BCG组及未免疫组。加强免疫4w和8w后,检测小鼠脾淋巴细胞被PPD刺激指数(SI)及其IFN-γ、IL-2的表达水平。[结果](1)酶切鉴定pTB30m所含外源基因片段大小正确,纯度较高。(2)DNA-85B/H37Ra组小鼠脾淋巴细胞的SI均显著高于H37Ra组、BCG组和DNA-85B/BCG组(P﹤0.05);(3)所有免疫组IFN-γ及IL-2表达与未免疫组比较,差异有统计学意义(P﹤0.05),DNA-85B/H37Ra组与DNA-85B/BCG组均高于H37Ra组和BCG组(P﹤0.05),DNA-85B/H37Ra略高于DNA-85B/H37Ra,但差异无统计学意义(P﹥0.05)。[结论]DNA-85B/H37Ra序贯免疫效果略优于DNA-85B/BCG组,明显优于H37Ra组和BCG组。

固相萃取-反相高效液相色谱法同时测定血清中3种抗癫痫药物

目的应用固相萃取-反相高效液相色谱法测定血清中抗癫痫药物.方法用Elut Bond C18小柱预处理样品,甲醇为洗脱剂;采用Waters NovaRC18柱,流动相为甲醇:水＝45:55;检测波长230nm,流速1ml/min,内标(苯乙酮)法定量.结果苯巴比妥、苯妥英、卡马西平的浓度线性范围分别为4.1～62.6μg/ml(r＝0.9968)、3.9～60.1μg/ml(r＝0.9971)和1.6～21.2μg/ml(r＝0.9945),最低检测限分别为0.05μg/ml、0.05μg/ml和0.01μg/ml;相对回收率分别为90.6%～103.6%、93.4%～118.3%和91.2%～101.1%;批内变异系数均小于6.0%,批间变异系数均小于8.0%.结论固相萃取-反相高效液相色谱法简便、灵敏、准确、稳定,适合于以上3种抗癫痫治疗药物的同时监测.