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弓形虫表面主要抗原1(SAG1)蛋白的原核表达与鉴定
1
作者
代琴
骆璐
+5 位作者
董春霞
凌洪权
吴胜昔
曾政
秦萍
韦广苗
《黑龙江畜牧兽医》
CAS
北大核心
2024年第12期69-73,128,共6页
为了实现弓形虫主要表面抗原1(surface antigen 1,SAG1)蛋白在原核表达系统中的高效表达,试验根据GenBank中弓形虫SAG1基因序列(登录号为S76248.1)及大肠杆菌密码子偏好性对目的基因序列进行优化设计,以pET-32a(+)为表达载体构建重组表...
为了实现弓形虫主要表面抗原1(surface antigen 1,SAG1)蛋白在原核表达系统中的高效表达,试验根据GenBank中弓形虫SAG1基因序列(登录号为S76248.1)及大肠杆菌密码子偏好性对目的基因序列进行优化设计,以pET-32a(+)为表达载体构建重组表达质粒pET32a(+)-SAG1,并将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)对重组菌进行诱导,表达重组蛋白,通过优化诱导条件实现对重组蛋白的大量表达,使用NGC^(TM)层析纯化系统纯化重组蛋白,并分别以抗His标签单克隆抗体和犬弓形虫阳性血清作为一抗、羊抗鼠IgG-HRP和HRP-兔抗犬作为二抗对重组蛋白进行Western-blot鉴定。结果表明:重组表达质粒pET32a(+)-SAG1经双酶切分别在5 900 bp和1 020 bp处出现1条载体条带和1条目的基因条带,与预期结果相符;重组蛋白大小为55 ku且以包涵体的形式成功表达,当诱导条件为25℃、0.4 mmol/L IPTG诱导8 h时重组蛋白的表达量最高;纯化后的重组蛋白条带单一,纯度较高,3个样品质量浓度分别为0.409 5,0.368 5,0.451 9 mg/mL;表达的重组蛋白与抗His标签单克隆抗体和犬弓形虫阳性血清均能特异性结合。说明在大肠杆菌中成功表达了弓形虫SAG1重组蛋白,纯化后的重组蛋白纯度和质量浓度较高,且具有良好的反应原性。
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关键词
弓形虫
SAG1
原核表达
镍柱纯化
蛋白免疫印迹
原文传递
题名
弓形虫表面主要抗原1(SAG1)蛋白的原核表达与鉴定
1
作者
代琴
骆璐
董春霞
凌洪权
吴胜昔
曾政
秦萍
韦广苗
机构
重庆
理工大学药学与生物工程学院
重庆市动物疫病预防与控制中心
出处
《黑龙江畜牧兽医》
CAS
北大核心
2024年第12期69-73,128,共6页
基金
重庆理工大学研究生创新基金项目(gzlcx 20223354)
大学生创新创业训练计划项目(2022CX204,2022CX205)
重庆市现代农业产业技术体系创新团队项目(CQMAITS202314)
文摘
为了实现弓形虫主要表面抗原1(surface antigen 1,SAG1)蛋白在原核表达系统中的高效表达,试验根据GenBank中弓形虫SAG1基因序列(登录号为S76248.1)及大肠杆菌密码子偏好性对目的基因序列进行优化设计,以pET-32a(+)为表达载体构建重组表达质粒pET32a(+)-SAG1,并将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)对重组菌进行诱导,表达重组蛋白,通过优化诱导条件实现对重组蛋白的大量表达,使用NGC^(TM)层析纯化系统纯化重组蛋白,并分别以抗His标签单克隆抗体和犬弓形虫阳性血清作为一抗、羊抗鼠IgG-HRP和HRP-兔抗犬作为二抗对重组蛋白进行Western-blot鉴定。结果表明:重组表达质粒pET32a(+)-SAG1经双酶切分别在5 900 bp和1 020 bp处出现1条载体条带和1条目的基因条带,与预期结果相符;重组蛋白大小为55 ku且以包涵体的形式成功表达,当诱导条件为25℃、0.4 mmol/L IPTG诱导8 h时重组蛋白的表达量最高;纯化后的重组蛋白条带单一,纯度较高,3个样品质量浓度分别为0.409 5,0.368 5,0.451 9 mg/mL;表达的重组蛋白与抗His标签单克隆抗体和犬弓形虫阳性血清均能特异性结合。说明在大肠杆菌中成功表达了弓形虫SAG1重组蛋白,纯化后的重组蛋白纯度和质量浓度较高,且具有良好的反应原性。
关键词
弓形虫
SAG1
原核表达
镍柱纯化
蛋白免疫印迹
Keywords
Toxoplasma gondii
SAG1
prokaryotic expression
nickel column purification
Western-blot
分类号
S852.729 [农业科学—基础兽医学]
原文传递
题名
作者
出处
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1
弓形虫表面主要抗原1(SAG1)蛋白的原核表达与鉴定
代琴
骆璐
董春霞
凌洪权
吴胜昔
曾政
秦萍
韦广苗
《黑龙江畜牧兽医》
CAS
北大核心
2024
0
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参考文献
引证文献
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