一种荧光定量PCR方法检测血液标本中梅毒螺旋体的应用研究

目的建立基于TpN17基因检测血液中梅毒螺旋体的荧光定量PCR方法。方法根据梅毒螺旋体TpN17基因保守区域设计引物,构建质粒标准品pTpN17,优化定量PCR反应体系检测该体系的灵敏度和特异性;同时,采用该方法对梅毒确证阳性的血液样本进行检测。结果研究表明,基于TpN17基因的SYBR GREEN荧光定量PCR方法可以有效检测血液中10^6-10^1 copies/μL的梅毒螺旋体并通过熔解曲线判定结果的特异性。结论以TpN17基因为扩增目的基因的SYBR GREEN荧光定量PCR方法具有灵敏快速便宜的特点,适用于在血液检测梅毒螺旋体,能广泛应用于献血及血液样本检测等领域,提高我国的血液安全。

pET 22b-TP17表达载体的构建与鉴定

目的:采用原核基因工程技术构建表达梅毒螺旋体外膜脂蛋白TP17的载体,并进行酶切鉴定,为获得重组抗原TP17及其用于梅毒血清学诊断试剂的研究奠定基础。方法:将化学合成的寡核苷酸(oligo)通过PCR的方法拼接成TP17目的基因的序列,并将合成好的序列克隆入pMD18-T Simple载体。以pMD18-T Simple-TP17为模板,PCR扩增TP17基因片段。PCR产物通过1.5%琼脂糖凝胶电泳回收TP17条带,随后用EcoRⅠ和XhoⅠ对TP17回收所得片段及目的载体pET 22b进行双酶切并连接。连接产物电转化至感受态细胞DH10B中后,挑取克隆,提取质粒并鉴定。最后将质粒转化至BL21菌株中。挑取克隆,提质粒,进行鉴定。结果:PCR扩增片段、双酶切均出现445 bp大小的目的基因条带,与预期结果相符。结论:本研究成功构建了重组质粒pET 22b-TP17,为下一步用IPTG诱导BL21菌株表达重组目的蛋白的研究奠定了基础。

不同血液透析模式对糖尿病重症肾衰竭患者肾功能指标、微炎症状态的影响

目的探讨普通血液透析与连续肾脏替代治疗对糖尿病重症肾衰竭患者肾功能指标、微炎症状态的影响。方法回顾性分析2018年1月至2019年1月本院收治的106例糖尿病重症肾衰竭患者的临床资料,根据不同血液透析模式分为对照组与研究组,各53例。对照组选用普通血液透析治疗,研究组选用连续肾脏替代治疗;比较分析两组患者治疗前后的血糖指标[糖化血红蛋白(HbA1c)、空腹血糖(FBG)、餐后2h血糖(2hPG)]、肾功能指标[血尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)]、微炎症状态指标[血同型半胱氨酸(Hcy)、超敏C-反应蛋白(hs-CRP)]水平及治疗后总有效率。结果两组患者治疗前的HbA1c、FBG、2hPG、BUN、Scr、Hcy、hs-CRP水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);两组治疗后的HbA1c、FBG、2hPG、BUN、Scr、Hcy、hs-CRP水平较治疗前均降低(P<0.05),且研究组的HbA1c、FBG、2hPG、BUN、Scr、Hcy、hs-CRP水平较对照组更低(P<0.05),总有效率更高(P<0.05);两组患者均随访观察1年,研究组脱离透析患者6例(11.32%)、对照组脱离透析患者1例(1.89%),研究组脱离透析率明显高于对照组(χ2=11.205,P=0.034)。结论连续肾脏替代治疗糖尿病重症肾衰竭患者的效果优于普通血液透析,并可改善患者血糖水平及微炎症状态,促使肾功能快速恢复。