miRNA-10b靶向调控Twist促进骨肉瘤细胞增殖与侵袭的研究

目的探讨microRNA-10b对骨肉瘤细胞MG-63增殖与侵袭能力的影响及潜在作用机制。方法应用实时荧光定量PCR检测人骨肉瘤组织和癌旁正常骨组织中miR-10b的表达差异。将miR-10b mimic和Twist特异性的siRNA (Twist siRNA)分别通过脂质体转染法转染入骨肉瘤细胞系MG-63,应用RT-PCR检测细胞中miR-10b和Twist mRNA的表达,采用蛋白质印迹法(Western blot)检测Twist及内参β-actin蛋白表达水平,采用MTT [3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium]法检测miR-10b mimic及Twist siRNA对人骨肉瘤细胞系MG-63增殖能力的影响;采用Transwell侵袭实验检测miR-10b mimic及Twist siRNA对人骨肉瘤细胞系MG-63侵袭能力的影响。结果与正常癌旁骨组织相比,miR-10b在骨肉瘤组织中呈现明显高表达,差异具有极显著性统计学意义(P<0.01); miR-10b mimic可使Twist mRNA和蛋白表达水平升高,差异具有统计学意义(P<0.05),同时可显著增强MG-63细胞的增殖与侵袭能力(P<0.05),而转染miR-10b mimic和Twist siRNA的MG-63细胞的增殖与侵袭能力较仅转染miR-10b mimic的MG-63细胞显著减弱(P<0.05)。结论人骨肉瘤细胞系MG-63中miR-10b的表达上调,可能通过靶向激活Twist信号通路促进骨肉瘤细胞的异常增殖与远处侵袭。