微小RNA-6768-5p在肺癌组织中的表达及对肺癌细胞恶性生物学行为的影响

目的 探讨miR-6768-5p在肺癌组织中的表达及通过靶向调控羧肽酶A4(CPA4)对肺癌细胞增殖及侵袭的影响。方法 使用TCGA数据库分析肺癌组织和癌旁组织中miR-6768-5p的表达,使用实时定量PCR(qPCR)检测人肺癌细胞系(HCC1588、H1650、H1299、A549、HCC827)和正常肺泡上皮细胞(HPAEpiC细胞)中miR-6768-5p的表达。分别转染NC mimics、miR-6768-5p mimics至肺癌细胞,分别作为NC组和miR-6768-5p组。使用MTS实验、Matrigel侵袭实验分别检测各组细胞增殖和侵袭能力。使用RNAhybrid软件和双荧光素酶报告基因实验验证miR-6768-5p和CPA4的假定结合位点。qPCR检测各组细胞中CPA4 mRNA的表达。通过Western blot分析各组细胞中AKT/c-MYC信号通路蛋白的表达情况。结果 与癌旁组织比较,miR-6768-5p相对表达水平在肺癌组织中明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与HPAEpiC细胞比较,miR-6768-5p相对表达水平在肺癌细胞系中明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与NC组比较,miR-6768-5p组细胞增殖率明显降低(P<0.05)。NC组和miR-6768-5p组侵袭细胞数分别为(131.30±12.55)个和(37.45±7.77)个,miR-6768-5p组侵袭细胞数明显低于NC组(P<0.05)。miR-6768-5p组H1299细胞内CPA4 mRNA相对表达水平明显低于NC组(t=4.93,P<0.05)。与NC组比较,miR-6768-5p组AKT/c-MYC信号通路蛋白p-AKT、p-mTORC1、XIAP、MDM2、c-MYC蛋白表达明显降低。结论 肺癌组织中miR-6768-5p表达降低,miR-6768-5p可能通过靶向CPA4,抑制AKT/c-MYC信号通路激活,降低肺癌H1299细胞的增殖和侵袭能力。

LncRNA AC132217.4调控肝癌细胞增殖和侵袭的机制研究

目的探讨lncRNA AC132217.4对肝癌MHCC97-H细胞增殖和侵袭的影响及分子作用机制。方法通过TCGA数据库分析AC132217.4在肝癌组织和癌旁组织中的差异表达,分析AC132217.4表达水平与肝癌患者总生存期的关系。转染pcDNA-AC132217.4质粒至MHCC97-H细胞设为AC132217.4组,转染pcDNA质粒至MHCC97-H细胞设为阴性对照(NC)组。MTT法和Matrigel侵袭实验检测MHCC97-H细胞的增殖和侵袭能力。starBase v2.0软件和双荧光素酶报告基因实验分析AC132217.4和miR-18a-5p之间的作用靶点。实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测两组MHCC97-H细胞中miR-18a-5p的差异表达。Western-blotting检测上皮-间质转化蛋白的表达。正态分布的计量资料以均数±标准差(x±s)表示,组间比较采用t检验。结果与癌旁组织相比,肝癌组织中AC132217.4表达下调(P<0.01)。与AC132217.4低表达的肝癌患者相比,AC132217.4高表达的肝癌患者总生存期较长(P<0.05)。pcDNA-AC132217.4质粒明显抑制了MHCC97-H细胞的增殖能力(P<0.05)。NC组和AC132217.4组侵袭细胞数分别为(131.30±12.55)个和(37.45±7.77)个,pcDNA-AC132217.4质粒明显抑制了MHCC97-H细胞的侵袭能力(t=6.36,P<0.01)。AC132217.4靶向互补结合miR-18a-5p(P<0.01)。AC132217.4组MHCC97-H细胞中miR-18a-5p表达(1.04±0.30)明显低于NC组(6.13±0.75)(t=6.27,P<0.01)。与NC组相比,AC132217.4组MHCC97-H细胞上皮表型蛋白Cytokeratin、Claudin-1蛋白表达上调,细胞间质表型蛋白Vimentin、Slug、Snail蛋白表达下调。结论肝癌组织中AC132217.4呈低表达,其与肝癌患者总生存期相关,AC132217.4可能通过海绵miR-18a-5p抑制肝癌MHCC97-H细胞的增殖和侵袭。