LEDGF／p75蛋白的可溶性表达、纯化及功能研究

HIV-1整合酶(integrase,IN)是病毒复制过程中的一个关键酶,其与宿主晶状体上皮源性生长因子p75(lens epithelium-derived growth factor p75,LEDGF/p75)的蛋白-蛋白相互作用是筛选抗病毒药物的一个重要靶点。为开展以IN-LEDGF/p75相互作用为靶点的抑制剂研究,本研究构建了LEDGF/p75蛋白重组质粒,在原核细胞中进行了可溶性表达和功能研究。根据大肠杆菌密码子偏爱性,全合成高利用率密码子的LEDGF/p75基因序列,并克隆到表达载体pGEX-4T-1中构建重组质粒。在大肠杆菌中优化表达LEDGF/p75蛋白,经SDS-PAGE鉴定和亲和色谱纯化蛋白,采用酶联免疫吸附实验方法 (ELISA)测定了LEDGF/p75蛋白的生物学活性。结果显示,构建的重组质粒获得高效稳定的可溶性表达,ELISA证实体外表达的LEDGF/p75蛋白能够与HIV-1 IN相互作用,并促进IN链转移反应的完成。本研究为建立以LEDGF/p75-IN相互作用为靶点的抗HIV药物筛选平台打下了基础。