胃癌中人端粒保护蛋白1的表达及其与幽门螺杆菌感染的相关性研究

目的 探讨胃癌中人端粒保护蛋白1（hPOT1）基因的表达及其与幽门螺杆菌（HP）感染的关系.方法 应用SP免疫组织化学、原位杂交法检测hPOT1蛋白、hPOT1 mRNA在53例胃癌标本（观察组）中的表达,同时以20例正常胃黏膜组织作为对照.应用Warthin-Starry银染法检测53例胃癌组织中HP感染情况.结果 观察组中hPOT1蛋白的阳性表达率为84.91％（45/53）,高于对照组的30.00％（6/20） （P＜0.01）;观察组中hPOT1 mRNA的阳性表达率为58.49％（31/53）,高于对照组的10.00％（2/20）（P＜ 0.05）.胃癌组织中hPOT1蛋白与hPOT1 mRNA共同阳性表达率为56.60％（30/53）,两者在胃癌中的表达呈正相关（r=0.394,P＜0.01）.53例胃癌组织中HP感染阳性28例（52.83％）.HP感染阳性组hPOT1蛋白阳性表达率为96.43％（27/28）,高于HP感染阴性组的72.00％（18/25）（P＜0.05）.HP感染阳性组hPOT1 mRNA阳性表达率为85.75％（24/28）,高于HP感染阴性组的28.00％（7/25）（P＜0.01）.结论 hPOT1可能参与了胃癌的发生,同时检测hPOT1蛋白与hPOT1 mRNA的表达水平有助于胃癌的诊断.胃癌组织中HP感染引起hPOT1异常表达可能是导致胃癌发生的机制之一.

重组人复合干扰素的定点诱变及PEG化修饰

目的将复合干扰素(consensus interferon,cIFN)76位点丙氨酸(Ala)突变为半胱氨酸(Cys),以期获得一种高效和可供聚乙二醇马来酰亚胺(PEG-MAL)定点修饰的IFN突变体分子。方法采用同源序列对比、空间结构模拟并结合IFNα与受体结合的特点设计突变位点。通过基因工程方法获得cIFN_(m76)工程菌,IPTG诱导表达,所得包涵体经变复性、DEAE阴离子及CM阳离子两步交换层析纯化后,采用SDS-PAGE和高效液相色谱法(HPLC)检测cIFN_(m76)的纯度;细胞病变抑制法检测其体外抗病毒活性;REFLEX^(TM)Ⅲ基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱法(MALDI-TOFMS)测定其相对分子质量;SDS-PAGE分析cIFN_(m76)与PEG-MAL的交联反应;并进行N-末端、C-末端序列测定及紫外光谱扫描。结果 cIFN_(m76)以包涵体形式存在,表达量占菌体总蛋白的30%以上,纯度大于95%,比活性约为1.08×10~8IU/mg,N-末端、C-末端氨基酸序列与理论一致,相对分子质量经MALDI-TOF-MS测定为19 500,紫外特征吸收波长为280 nm,与PEG-MAL成功交联。结论成功获得一种高效和可供PEG-MAL定点修饰的cIFN_(m76),解决了现有PEG定点修饰技术存在的问题。