结肠癌浸润T淋巴细胞亚群的临床意义

目的目前有报道认为淋巴细胞浸润与结肠癌(CRC)病理学变化相关,但CRC病人体内的淋巴细胞亚群各自的临床意义不清楚,本研究就此进行了探讨。方法我们使用了组织芯片和免疫组化技术检测67例CRC病人肿瘤组织中心区和边缘区CD4+和CD8+细胞密度,并分析其临床意义。结果我们发现,肿瘤浸润淋巴细胞亚群与病人的年龄、肿瘤大小、肿瘤的分期/分级不相关,且CD4+T细胞在不同分期/分级病人的肿瘤中心区和边缘区均无显著性差异。但是,与M1级病人相比,M0级病人肿瘤边缘区有更高的CD8+T细胞密度,而肿瘤中心区CD8+T细胞在两者间无差别。结论肿瘤边缘区高密度的CD8+T细胞与低肿瘤转移率相关。结果还提示对肿瘤浸润淋巴细胞亚群的分析有利于深入理解免疫系统对肿瘤的作用及其机制,且对开发相关干预措施提供了线索。

HepG2细胞中RORγ相互作用蛋白的筛选及鉴定

目的筛选HepG2细胞中转录因子RORγ(the retinoid-related orphan nuclear receptor gamma)相互作用蛋白,并对这些蛋白进行初步鉴定,为阐述RORγ介导调节HepG2细胞中各种生理学进程提供理论依据。方法从HepG2细胞中克隆RORγ基因并连接入载体pCeMM CTAP(SG)中形成RORγ-CTAP(SG)融合基因,再将其亚克隆入含嘌呤霉素抗性基因的载体质粒中,构建pMSCVpuro RORγ-CTAP(SG)质粒;稳定转染HepG2细胞并对RORγ-CTAP(SG)融合基因的表达和定位进行检测后,进行大规模扩增培养;用TAP(串联亲和纯化)方法捕获RORγ相互作用蛋白,通过银染找出差异性蛋白条带,质谱鉴定得到候选RORγ相互作用蛋白;用免疫共沉淀方法对候选蛋白RORγ相互作用蛋白进行验证鉴定。结果成功构建了质粒pMSCVpuro RORγ-CTAP(SG)并得到稳定转染HepG2细胞株,同时RORγ-CTAP(SG)融合基因能定位表达于细胞核内;通过TAP方法获得了RORγ蛋白复合物,然后通过串联质谱分析和数据库搜索从银染差异性显著蛋白条带中找到7个候选RORγ相互作用蛋白;用RORγ蛋白进行免疫共沉淀,对纯化出的7个RORγ相互作用蛋白分别检测,证实了RIP140,HSP90和RORγ在HepG2中有相互作用关系。结论筛选并鉴定了HepG2细胞中蛋白RORγ的相互作用蛋白RIP140和HSP90,这些研究发现支持了RORγ是共调解蛋白依赖的转录因子且以复合物形式行使功能的假说。其中,HSP90可能扮演分子伴侣角色,而RIP140在HepG2细胞中则可能充当RORγ蛋白的转录调控伙伴蛋白,具体机制有待进一步研究。