ITS2序列鉴定火把花根及其混伪品的研究

目的:利用ITS2序列对市售火把花根药材及其混伪品进行DNA分子鉴定,以确保其临床用药的安全和有效。方法:对收集到的火把花根药材及其混伪品样品进行DNA提取,ITS2引物的PCR扩增与双向测序;采用CodonCode Aligner V 6.0.2软件对测序峰图进行校对拼接,经隐马尔夫模型的HMMer注释,并预测其二级结构;使用MEGA6.0计算遗传距离,构建NJ系统发育树。结果:火把花根药材及其混伪品的ITS2序列长度均在210~224 bp之间,其种间K2P遗传距离为0.012~0.690,火把花根与雷公藤、东北雷公藤、苦皮藤、南蛇藤及金樱根ITS2条形码变异位点分别为5、7、27、26和88个,其差异较为明显,经与GenBank数据库进行比对的结果表明,ITS2序列及其二级结构能准确区分火把花根药材及其混伪品。结论:DNA条形码ITS2序列可作为火把花根药材真伪鉴别的有效手段,也为后期火把花根片中成药的质量控制及品质评价提供了技术保障。

火把花根片关键药效物质的“效益-风险”体外评价及其网络调控机制研究

雷公藤属中药品种火把花根片对类风湿关节炎、糖尿病肾病和膜性肾病均具有良好的临床疗效,然而,肝脏损伤、恶心呕吐等副反应限制了其广泛应用。该研究旨在通过体外药效与毒性评价,整合生物分子网络分析,明确火把花根片及其潜在活性成分针对类风湿关节炎、糖尿病肾病和膜性肾病的效益与风险,并初步探究其“异病同治”的作用机制。首先,采用超高效液相色谱串联四极杆飞行时间质谱分析火把花根片入血成分,并考察火把花根片及其所含雷公藤甲素、雷公藤红素对人正常肝细胞L02、人类风湿成纤维样滑膜细胞MH7A、人肾小管上皮细胞HK-2和小鼠足细胞MPC-5活性的影响;采用酶联免疫吸附法考察各组炎症诱导性MH7A细胞和HK-2细胞模型中炎性因子的水平;采用蛋白免疫印迹法检测药物对MPC-5细胞模型中nephrin和podocin蛋白异常表达的干预作用,并开展免疫荧光检测考察对MPC-5细胞骨架蛋白表达水平的调节。接着,通过TCMIP v2.0数据库获得火把花根片入血成分候选靶点,利用GEO数据库收集3类疾病靶点,基于STRING数据库构建“疾病基因-药物靶标”互作网络,进行通路富集分析。最后,利用AutoDock Vina分子对接方法探究雷公藤甲素和雷公藤红素与关键通路中相应靶标的结合能力。结果表明,3种药物均可降低MH7A及HK-2细胞上清炎性因子浓度,增加MPC-5细胞标志性蛋白含量,其中,雷公藤甲素对于L02肝细胞毒性最强,雷公藤红素次之,火把花根片毒性最小。“疾病基因-药物靶标”关联网络挖掘结果表明,火把花根片可能通过调节PI3K/HIF1α/NOS2信号通路,干预3类疾病。分子对接结果显示其关键药效物质与PI3K、HIF1α、NOS2蛋白均具有较高亲和力。综上,该研究结果表明,火把花根片对于类风湿关节炎、糖尿病肾病、膜性肾病的疗效与雷公藤甲素及雷公藤红素相似,但细胞毒性均小于二者,即效益较高,而风险更小。此外,生物分子网络分析初步表明PI3K/HIF1α/NOS2信号通路可能是其“异病同治”的关键环节。

火把花根片药理作用及临床应用研究进展

火把花根片是以卫矛科雷公藤属植物昆明山海棠去皮的根芯制备而成的中成药,临床研究表明其是一种高效低毒的药物,具有抗炎、镇痛、免疫抑制等类似激素样作用,目前主要用于自身免疫相关疾病的治疗,如类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮等,取得了较好的疗效。对近20年火把花根片的相关文献进行整理,分析和归纳火把花根片的药理学作用和临床应用,以期为其后续临床精准用药提供药理学和临床治疗学依据。

基于UPLC-Q-TOF-MS的火把花根片指纹图谱及化学成分研究

目的 建立12批火把花根片的超高效液相色谱(UPLC)指纹图谱,评价其批间质量一致性,并对主要化学成分进行鉴定,以明确其物质基础。方法 采用Waters CORTECS T_(3)色谱柱(2.1 mm×100 mm, 1.6μm),乙腈-0.1%甲酸水溶液为流动相,梯度洗脱,流速为0.4 mL·min^(-1),检测波长为260 nm,柱温为35℃。利用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)”进行相似度分析。采用超高效液相色谱四极杆串联飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS)技术对火把花根片的主要成分进行鉴定。结果 建立的火把花根片UPLC指纹图谱共标定了27个共有峰,12批样品的相似度为0.992~0.999,鉴定了18个主要成分,多数为黄酮和酚苷类成分。结论 火把花根片批间质量一致性较好,所含成分的极性相对较大,与该制剂水提醇沉的生产工艺相关。本研究中建立的指纹图谱和主要成分的结构鉴定可为后期该品种的质量控制研究提供依据。

探讨影响中药制剂质量的因素及控制措施分析

中医药是我国的传统瑰宝,在我国自古流传,被广泛接受,对人类健康和安全也发挥着重要作用。在我国的历史发展过程中,中医药在保护人类健康方面发挥了重要作用。中药质量控制不仅是保证患者安全有效治疗的基础,也是直接影响中药未来发展和广泛应用的重要因素。影响中药质量的主要因素是原料、生产工艺和技术、包装、储存、运输和人为问题。今后要加强原料管理,规范生产工艺,提高相应人员素质,才能真正提高中药质量,减少不良反应,从而保证患者用药的安全性和有效性。在此基础上,以质量控制为重点,有望在今后的实际工作中发挥中医药研究进展的引领作用。

雷公藤属数据库的开发与应用

以雷公藤属雷公藤、昆明山海棠、东北雷公藤三味中药为基础,整合其中药及复方知识,以现有文献型数据库、药代动力学和毒性在线预测平台(ADMETlab 2.0数据库)、中药系统药理数据库(TCMSP数据库)、中医药百科全书(ETCM数据库)以及2020版《中国药典》为数据整理制作基础数据库,并对数据库内容进行重新关联及建设。雷公藤属数据库(TWD)共收集相关中成药方剂14首,方剂相关药材53味,相关化学成分4000余个,相关疾病靶标2000余个,相关疾病20种,内容涵盖药材产地、性味归经、指标成分、配伍禁忌、现代应用等多个维度。包括药材、方剂、成分、靶标、疾病5个子数据库及1个分析系统,通过主数据库与二级表建立超链接,实现各个数据库表数据的交互检索。通过整理、融合专业知识,结合数据库的专业前沿技术,使用中英文对照形式建立的TWD,将雷公藤属的中药信息系统、准确、全面、综合、可视化地呈现,为雷公藤属植物药的开发与临床应用奠定基础,推动雷公藤属领域研究国际化。