蔗蜡高级烷酸和高级烷醇分离与降胆固醇的作用(英文)

背景:甘蔗蜡作为制糖工业的副产品,在非医药方面已有广泛的用途。有实验证实,甘蔗蜡在降低血胆固醇方面具有良好的作用,但其效应及适用于医药应用的甘蔗蜡的分离手段有待进一步研究。目的:从国产甘蔗蜡中分离适合医药用途的高级烷酸混合物、高级烷醇混合物,并观察其对高脂血症模型大鼠的降胆固醇作用。设计:随机对照动物实验。单位:重庆康尔威药业股份有限公司药物研究所。材料:实验于2005-04/2006-01在重庆康尔威药业股份有限公司药物研究所完成。选用65只成年Wistar雌性大白鼠,体质量180～220 g,鼠龄3～6个月,SPF级,由重庆中药研究院实验动物中心提供。粗甘蔗蜡购自北京嘉德鸿盛生物化学科技有限公司。26C醇、28C醇、30C醇、32C醇和28C酸、30C酸、32C酸、34C酸为Sigma产品(气相色谱标准品)。其余试剂为国产分析纯级。方法:①将粗甘蔗蜡通过乙醇等有机溶剂反复提取后成为精制甘蔗蜡,进一步通过皂化、加钙等,将高级烷酸混合物与高级烷醇混合物分离。用气相色谱分析其主要成分,高级烷醇混合物主要分析C26、C28、C30和C32,高级烷酸混合物主要分析C26、C28、C30和C32。②按照参考文献叙述的方法,将大白鼠适应性饲养3d后,随机摸球法分为空白组(n=10)和实验组(n=55),断尾采血,自动生化分析仪测定所有大鼠三酰甘油、总胆固醇与高密度脂蛋白胆固醇。空白组给予普通颗粒饲料,实验组给予高脂饲料(猪油质量分数0.1、蛋黄粉质量分数0.1、胆固醇质量分数0.01、猪胆盐质量分数0.002、普通饲料质量分数0.788)[3],自由摄食与饮水。7 d后尾尖再次采血测定三酰甘油、总胆固醇与高密度脂蛋白胆固醇。按血清三酰甘油的高低随机将实验组大白鼠分为5个亚组:阴性对照组、高级烷醇低剂量组、高级烷醇高剂量组、高级烷酸低剂量组、高级烷酸高剂量组,每组11只。高级烷醇高、低剂量组实验鼠灌服5,50 mg/(kg·d)高级烷醇,高级烷酸高、低剂量组实验鼠分别给予分别给予灌服20,200 mg/kg·d高级烷酸,阴性对照组及空白组分别给予灌服等体积的0.3%羧甲基纤维素钠及蒸馏水,均为1次/d。连续给药30 d,最后1次给药16 h后,于麻醉状态下心脏采血,取血清测定三酰甘油、总胆固醇与高密度脂蛋白胆固醇。主要观察指标:①分离的高级烷醇混合物、高级烷醇混合物中主要成分含量的百分比。②实验鼠用药前后血胆固醇、高密度脂蛋白和三酰甘油水平。结果:纳入实验鼠65只均进入结果分析。①通过气相色谱分析分析表明,在高级烷醇混合物中以28烷醇(C28醇)含量最多(占73.6%),其主要几种高级烷醇分别为C26醇(5.3%)、C30醇(6.2%)、C32醇(5.1%)4种高级烷醇总量为90.2%。在高级烷酸混合物中,以28碳酸(C28酸)含量最多(占46.6%),其余几种主要高级烷酸分别为C30酸(16.7%)、C32酸(6.8%)、C34酸(9.3%)。4种高级烷酸总量为79.3%。②高级烷醇高、低剂量组及高级烷酸高、低剂量组实验鼠血清总胆固醇水平分别为(1.46±0.27),(1.66±0.33),(1.44±0.25),(2.16±0.52)mmol/L,低于阴性对照组[(2.52±0.83)mmol/L,P<0.01]。高血高密度脂蛋白胆固醇水平分别为(0.73±0.09),(0.71±0.07),(0.79±0.10),(0.70±0.08)mmol/L,高于阴性对照组[(0.58±0.13)mmol/L,P<0.05～0.01]。结论:从国产甘蔗蜡中分离的高级烷醇混合物、高级烷酸混合物均有明显的降低血总胆固醇作用,对降低血三酰甘油效果不明显。

胸腺素α1与复合α干扰素融合蛋白的表达及其生物学活性

实验旨在获得具有双重生物学活性的重组胸腺素α1(Thymosin alpha1,TM-α1)与复合α干扰素(IFNα-con)融合蛋白。选择大肠杆菌偏爱的密码子,将合成的TM-α1与IFNα-con编码序列构成的融和基因克隆至大肠杆菌表达载体pET-22b(+)、在宿主菌BL21(DE3)-Codon plus-RP-X中成功表达了可溶性融合蛋白(TM-α1-IFN-con)。表达量占总蛋白的20%以上。通过硫酸铵沉淀、疏水层析、阴离子交换层析、阳离子交换层析、分子筛层析后,产品纯度达到96%以上。采用细胞病变抑制法测定融合蛋白的抗病毒活性,采用细胞增殖实验检测融合蛋白对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响。结果表明,融合蛋白的抗病毒活性优于市售的IFNα1b和IFNα2a。对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响与市售的合成胸腺素α1相同。已有研究证实,该融合蛋白具有良好的体外抗HBV作用,其体外抗HBV活性比联合应用TM-α1和干扰素α强,且细胞毒性明显低于联合应用TM-α1和干扰素α。以上结果表明,通过大肠杆菌表达的可溶性融合蛋白(TM-α1-IFN-con),既具有良好的干扰素α抗病毒作用,也具有胸腺素α1促淋巴细胞增殖作用。

邻乙氧基苯甲酸的合成

对以水杨酸甲酯为原料制取西地那非重要中间体邻乙氧基苯甲酸的合成工艺进行了改进,先制得水杨酸甲酯钠盐,经干燥后与溴乙烷乙基化得到邻乙氧基苯甲酸甲酯,然后将邻乙氧基苯甲酸甲酯水解制得邻乙氧基苯甲酸。产品纯度为99.88%(HPLC法),总收率为89.5%。该工艺已在重庆康尔威药业股份有限公司中试。

蔗蜡长链脂肪酸、长链脂肪醇的分离及其降血脂作用

甘蔗蜡（Sugar cane wax）主要来源于制糖工业的副产品——淤泥。将粗甘蔗蜡通过乙醇等有机溶剂反复提取后成为精制甘蔗蜡，进一步通过皂化、加钙等，将长链脂肪酸混合物与长链脂肪醇混合物分离。气相色谱分析表明，长链脂肪醇混合物中以26C、28C、30C和32C醇四种含量最多（占90．2％）；长链脂肪酸混合物以28C、30C、32C和34C酸四种含量最多（占79．3％）。在高血脂模型大鼠中应用30d的实验结果证实，长链脂肪醇混合物在低剂量（5mg／kg·d）、高剂量（50mg／kg·d）组均有显著的降低血总胆固醇作用（与对照组比较P〈0．01），对升高血高密度脂蛋白也有一定作用，但对降低血甘油三酯的作用不明显；长链脂肪酸混合物在低剂量（20mg／kg·d）、高剂量（200mg／kg·d）组的结果与长链脂肪醇混合物相似。进一步证实了甘蔗蜡中长链脂肪醇混合物、长链脂肪酸混合物均有明显的降低血总胆固醇作用。

人骨骼肌肌钙蛋白C在大肠杆菌中的表达及其抗肿瘤作用

为了探索重组人骨骼肌型肌钙蛋白C(rhTnC)的抗肿瘤作用,采用PCR技术,从人乳腺cDNA文库中获得编码TnC的cDNA序列,在大肠杆菌中进行了表达.经镍柱亲和层析纯化后,分别检测其在体外对人脐静脉内皮细胞生长的抑制作用与对小鼠异位移植肿瘤(S-180)生长的抑制作用.结果表明,rhTnC在大肠杆菌中呈可溶性表达.分离纯化后的rhTnC在体外对人脐静脉内皮细胞生长呈剂量依赖性抑制(IC50为7.5μg/ml);对小鼠异位移植肿瘤的生长也有明显的抑制作用,在20mg/(kg·d)剂量下对S-180的抑制率为64.4%.以上结果说明,rhTnC可抑制血管内皮细胞生长,并具有抗肿瘤作用.

重组人肌钙蛋白C对人脐静脉内皮细胞生长及小鼠异体移植肿瘤生长的作用(英文)

背景:肌钙蛋白Ⅰ能抑制血管内皮细胞生长、抑制新生血管形成并通过阻断新血管的生长而抑制实体瘤生长与转移的物质。肌钙蛋白C与肌钙蛋白Ⅰ类似,也存在于非肌肉组织中,其是否也具有肌钙蛋白Ⅰ类似的抗肿瘤作用?目的:观察重组人肌钙蛋白C对人脐静脉内皮细胞生长及小鼠异体移植肿瘤生长的作用。设计:体外及体内对比观察。单位:重庆康尔威药业股份有限公司药物研究所,重庆医科大学生化教研室。材料:实验于2003-03/2004-12在重庆康尔威药业股份有限公司药物研究所生物化学实验室完成。选用100只昆明种小鼠,雌雄不拘,体质量15～22g,购自重庆中药研究院。表达人骨骼肌型肌钙蛋白C的大肠杆菌工程菌株由重庆康尔威药业股份有限公司提供;人脐静脉内皮细胞(购自中国科学院上海生物化学与细胞生物学研究所)。方法:通过PCR技术从人胸腺cDNA文库中获取编码人骨骼肌型肌钙蛋白C的编码基因cDNA序列并克隆至大肠杆菌中获得表达人肌钙蛋白C的基因工程菌,用镍柱亲和层析纯化重组人肌钙蛋白C。①体外细胞实验:将人脐静脉内皮细胞以2×103cell/孔的密度置于96孔平板培养,将1,5,10,50mg/L的重组人肌钙蛋白C加入细胞培养液共同培养3d,使用酶标仪在540nm波长下测定A值,计算细胞生长抑制率,同时采用LOGIT法计算半数抑制率。②体内动物实验:取接种7～8d腹水瘤,将瘤细胞稀释至1×1010L-1后,0.2mL腋下及腹腔接种小鼠,每种接种方式各50只,次日采用随机摸球法将两种注射方式的小鼠分成5组,分别为重组人肌钙蛋白C20,10,5mg/kg组,环磷酰胺组及对照组,每组10只。重组人肌钙蛋白C20,10,5mg/kg组分别给予相应剂量重组人肌钙蛋白C1次,连续给药7d,环磷酰胺组间日给药50mg/kg环磷酰胺1次,对照组给予相应体积生理盐水,末次给药后停药1d,脱颈处死小鼠,称体质量,剖瘤称质量,按下列公式计算肿瘤抑制率:肿瘤抑制率=[(对照组平均瘤质量-药物组平均瘤质量)/对照组平均瘤质量]×100%。主要观察指标:体外细胞实验重组人肌钙蛋白C对人脐静脉内皮细胞生长及小鼠异体移植肿瘤的生长抑制率。结果:①体外细胞培养显示,重组人肌钙蛋白C对人脐静脉内皮细胞的生长呈剂量依赖性抑制,半数抑制率约7.5mg/L。②与体外细胞实验结果类似,腹腔给药后,重组人肌钙蛋白C5,10,20mg/kg组肿瘤抑制率高于对照组(P<0.01);腋下给药后,重组人肌钙蛋白C5,10,20mg/kg组肿瘤抑制率高于对照组(P<0.05～0.01),腋下给药与腹腔给药的肿瘤抑制率差异无统计学意义(P>0.05)。结论:重组人肌钙蛋白C对人脐静脉内皮细胞的生长呈剂量依赖性抑制,其具有抑制血管内皮细胞生长作用与抗肿瘤作用。

山嵛菜抗氧化与抑制酪氨酸酶的实验研究

为了探讨山嵛菜植物各部分的抗氧化与抑制酪氨酸酶能力,将新鲜山嵛菜的叶、叶柄、块茎、根须等,用20%乙醇水溶液提取后,分别检测各部分的总抗氧化能力、灭活超氧阴离子能力和抑制酪氨酸酶能力。结果表明,总抗氧化能力以山嵛菜叶最强(68.4单位,0.1 g/mL);灭活超氧阴离子能力也是山嵛菜叶最强(IC50值0.7mg/mL);抑制酪氨酸酶能力以山嵛菜块茎、根须最强(IC50值0.3或0.4 mg/mL)。上述资料为进一步开发利用山嵛菜提供了依据。

毕赤酵母高密度发酵生产重组人内皮细胞抑制素

目的在microDCU-400发酵罐中探讨表达人血管内皮细胞抑制素(Endostatin)的毕赤酵母(GS115)工程菌株的高密度发酵条件。方法在发酵过程中,控制溶氧30%以上、温度30℃、pH5.3(生长阶段)或5.0(诱导表达阶段),在无机盐培养基中生长约18～22h后,补加50%甘油继续生长约3～5h,OD600达到450以上,开始进行甘油-甲醇混合物逐渐过渡至甲醇、甲醇浓度由低至高、8h后达到最大诱导浓度(0.08ml/min/L)的诱导方式,维持诱导约60h。离心收集上清液。利用12%聚丙烯酰胺凝胶电泳、酶标检测试剂盒检测表达产物。结果在诱导表达阶段,OD600最高达到580以上(细胞湿重达到375g/L),表达产量为27.2mg/L,高于摇瓶表达水平(16.3mg/L)。结论在15L发酵罐中成功表达了人血管内皮细胞抑制素,为进一步大批量生产作了准备。

有双重活性的重组胸腺素α1与复合α干扰素融合蛋白的分离纯化(英文)

背景:研究表明,将干扰素与胸腺素α1联合应用可增强干扰素的抗病毒作用。目的:获得既具有干扰素抗病毒活性又有胸腺素α1增强免疫功能的双重活性重组融合蛋白。设计、时间及地点:体外对比试验,于2003-03/2004-12在重庆康尔威药业股份有限公司药物研究所完成。材料:融合基因片断由上海生工合成,人羊膜细胞、水泡性口炎病毒购自上海生化与细胞生物所,对照品IFNα1b、IFNα2a和胸腺素α1为市售药品。方法:选择大肠杆菌偏爱的密码子,将合成的胸腺素α1与复合干扰素编码序列构成的融和基因克隆至大肠杆菌表达载体pET-22b(+)、在宿主菌BL21(DE3)-Codonplus-RP-X中表达融合蛋白。通过硫酸铵沉淀、疏水层析、阴离子交换层析、阳离子交换层析、分子筛层析等方法进行分离纯化。采用细胞病变抑制法测定融合蛋白的抗病毒活性,采用细胞增殖实验检测融合蛋白对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响。主要观察指标:重组融合蛋白抗病毒的活性和促小鼠脾淋巴细胞增殖活性。结果:①在大肠杆菌中表达的融合蛋白呈胞内可溶性表达,表达量占细菌总蛋白的20%以上。②纯化后,融合蛋白的纯度达96%以上。③融合蛋白的抗病毒活性优于市售的IFNα1b、IFNα2a。④融合蛋白的促淋巴细胞增殖活性与市售胸腺素α1相似。结论:在大肠杆菌中表达的胸腺素α1与复合干扰素融合蛋白既具有干扰素抗病毒活性又有胸腺素α1的增强免疫功能。

山葵叶片、叶柄混合物的润肠通便作用及其功效物质的初步研究

目的:探讨山葵(Wasabi Japonica)叶、叶柄混合物的润肠通便作用及其相关的功效物质,为进一步开发利用这一山葵种植中的副产品作为医药用途提供依据。方法:将新鲜山葵叶、叶柄采用冷冻干燥,粉碎后获得叶、叶柄混合物,通过酶-重量法测定了其总膳食纤维、可溶性膳食纤维(Soluble dietary fibre,SDF)与不溶性膳食纤维(Insoluble dietary fibre,IDF),并将其通过水解除去异硫氰酸盐、除去水溶性成分等。分别研究了山葵叶、叶柄混合物干粉(样品1)、除去异硫氰酸盐后(样品2)、除去水溶性成分后(样品3)等的润肠通便功效(包括小肠功能试验、首次排黑便时间、6 h排便粒数与6 h排便总量)。结果:叶、叶柄混合物冻干粉中总膳食纤维量为92.3 g/kg、SDF含量为48.2 g/kg,IDF含量为44.1 g/kg。SDF/IDF比值为1.1。在润肠通便功效方面,通过动物便秘模型的实验表明,上述3种样品可促进小肠运动、缩短首次排便时间、增加6 h排便粒数与6 h排便总量等,且3组样品相互间比较,其差异具有显著性(P<0.01或P<0.05)。结论:山葵叶与叶柄混合物中膳食纤维含量偏高且SDF较多;山葵叶与叶柄混合物对复方地酚诺酯模型便秘动物有润肠通便作用;其润肠通便作用相关的功效物质多样包括异硫氰酸盐以及存在于其水溶性成分、水不溶性成分中的物质成分等。