CD44阳性人脐带间充质干细胞扰乱大鼠血小板稳态研究

目的 基于生物信息分析与动物实验探讨人脐带间充质干细胞(hUCMSCs)与机体血小板稳态的关系。方法 运用DisGeNET、GeneCards、STRING 11.5等数据库,分析hUCMSCs诱发血小板减少的靶点及通路。将SD大鼠随机区组分为5组:阴性对照组(0.9%氯化钠注射液)、溶媒对照(80 mg·kg^(-1)白蛋白)组和hUCMSCs高、中、低剂量(1.0×10^(7)、5×10^(6)、2.5×10^(6)个·kg^(-1),分别为临床等效剂量的10.0、5.0、2.5倍)组,每组6只,雌雄各半。每周按10 mL·kg^(-1)尾iv 1次,共4次,与临床拟用方法一致。全自动血液分析仪分析血小板相关的指标:血小板计数(PLT)、血小板压积(PCT)、血小板分布宽度(PDW)、平均血小板体积(MPV);剖取大鼠胸骨,取骨髓,制备骨髓涂片,瑞特-吉姆萨复合染液染色,光学显微镜下计数全片巨核细胞总数、产血小板巨核细胞数;测量脾脏总长度;苏木精-伊红(HE)和过碘酸-雪夫(PAS)染色脾脏作组织病理学检查;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析肝脏促血小板生成素(TPO)、血小板生成素受体(Mpl)、Krüppel样因子1(Klf1)、Friend白血病整合素1(FLI1)、GATA结合蛋白1(GATA1)mRNA变化。结果 hUCMSCs与血小板减少相关的靶点有209个,作用于158条信号通路,与血小板生成最密切的通路为造血细胞谱通路,包含了20个靶点。以平均连接度筛选出14个核心靶点:IL6、TNFRSF11A、CD34、KIT、IL4、CSF2、CSF3、IL3、IL2RA、TPO、EPO、TFRC、CD44、IL11。CD44既是核心靶点又是hUCMSCs阳性表面标志物。与阴性对照、溶媒对照组比较,hUCMSCs高、中、低剂量组PLT、PCT显著降低(P<0.05),PDW、MPV差异无统计学意义;hUCMSCs组全片巨核细胞总数、产血小板巨核细胞数差异无统计学意义;hUCMSCs高、中剂量组脾脏长度显著增加(P<0.05);PAS染色见hUCMSCs高、中剂量组脾脏血小板储存增加;hUCMSCs高、中、低剂量组肝脏组织TPO、Mpl、KLF1 mRNA表达显著增加(P<0.05),FLI1、GATA1 mRNA表达变化不显著。结论 CD44+hUCMSCs可能通过促脾脏吞噬血小板,增加血小板在脾脏中储存,使血液中PLT、PCT减少,从而扰乱血小板稳态。