聚己内酯/明胶纳米纤维膜在组织工程化视网膜色素上皮构建中的应用

目的探索聚己内酯/明胶纳米纤维复合膜在构建组织工程化视网膜色素上皮(RPE)中的应用前景。方法采用自发分化法将人胚胎干细胞(ESC)诱导为视网膜色素上皮(ESC-RPE)细胞,并通过流式细胞术检测ESC-RPE细胞特定细胞标志物的表达情况;采用静电纺丝法制备聚己内酯(PCL)纳米纤维膜和PCL/明胶纳米纤维复合膜,扫描电子显微镜下观察2种纳米纤维膜的表面形貌,并测定2种支架的接触角;利用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测2种纳米纤维膜浸提液对ESC-RPE细胞活力的影响;将ESC-RPE细胞培养在PCL/明胶纳米纤维复合膜上,通过免疫荧光法检测组织工程化RPE特异性标志物的表达。结果ESC-RPE细胞不表达多能性标志物OCT4,阳性表达RPE特异性标志物小眼畸形相关转录因子(MITF)、RPE65和Bestrophin。PCL纳米纤维膜和PCL/明胶纳米纤维复合膜均呈纤维多孔状,2种支架的接触角分别为(97.2±3.1)°和(13.6±2.4)°,2种支架的浸提液对ESC-RPE细胞的生长均无显著影响。培养在PCL/明胶纳米纤维复合膜上的ESC-RPE细胞阳性表达特异性标志物MITF和ZO-1。结论PCL/明胶纳米纤维复合膜具有良好的亲水性和生物相容性,并且可支持ESC-RPE细胞的生长,有望应用于组织工程化RPE的构建。

基于聚己内酯纳米纤维膜的组织工程化视网膜色素上皮的研究

目的 探讨聚己内酯(PCL)纳米纤维膜在构建组织工程化视网膜色素上皮(RPE)的应用前景。方法参考有关文献采用自发分化法将人胚胎干细胞(ESC)诱导为视网膜色素上皮(ESC-RPE)细胞;采用静电纺丝法制备PCL纳米纤维膜,经扫描电镜检测PCL纳米纤维膜的表面形貌;利用CCK-8法检测PCL纳米纤维膜浸提液对于ESC-RPE细胞活性的影响;将ESC-RPE细胞培养在PCL纳米纤维膜上,通过透射电镜和免疫荧光法分别检测组织工程化RPE的超微结构和RPE特异性标记物的表达,通过与大鼠视网膜共培养检测组织工程化RPE吞噬感光细胞外节的能力。结果ESC-RPE细胞表达RPE特异性标记物MITF和PAX6,PCL纳米纤维膜呈纤维多孔状,具有良好的生物相容性。基于PCL纳米纤维膜的组织工程化RPE具有典型的RPE超微结构,表达ZO-1、NaKATPase呈极性表达,并且具有吞噬感光细胞外节的能力。结论PCL纳米纤维膜支持RPE细胞的生长,可用于构建组织工程化RPE。