人APE1/Ref-1基因真核表达质粒的构建和鉴定

目的构建含人APE1/Ref-1基因全长cDNA片段的真核表达质粒pcDNA3.1^+APE1,以期进一步研究该基因对细胞DNA损伤的保护作用。方法采用RT-PCR法定向克隆人APE1/Ref-1基因全长cDNA片段,构建pGM-T Easy/APE1质粒,测序鉴定APE1/Ref-1基因cDNA序列正确后,将目的片断亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1^+上,构成pcDNA3.1^+APE1表达质粒,并用Western blotting法检测转染人脐静脉内皮细胞APE1/Ref-1蛋白的表达水平。结果经酶切及测序证实APE1/ Ref-1基因真核表达质粒pcDNA3.1^+APE1构建成功,Western blotting法检测到转染pcDNA3.1^+APE1后,细胞内APE1/Ref-1蛋白表达明显增加。结论成功构建含人APE1/Ref-1基因全长cDNA片段的真核表达质粒,为探讨APE1/Ref-1对细胞电离辐射损伤的保护作用奠定了基础。