人气道上皮细胞的体外原代培养研究

目的探索简单有效的人原代气道上皮细胞培养方法。方法以人肺叶或肺段支气管为取材对象,用蛋白酶ⅩⅣ消化+机械刮刷法分离肺叶或肺段支气管上皮细胞,并与蛋白酶ⅩⅣ消化+机械剥离法、胰酶消化+机械刮刷法比较分离的细胞数、纯度及成活率,同时比较含必需营养因子的DMEM/F12无血清培养与有血清培养时的细胞纯度及成活率。角蛋白AE1/AE3免疫组化鉴定培养的细胞。结果蛋白酶ⅩⅣ消化+机械刮刷法组分离的细胞数为(9.37±1.62)×105,而蛋白酶ⅩⅣ消化+机械剥离法组为(5.20±0.75)×105,二者比较差异显著(P<0.01);蛋白酶ⅩⅣ消化+机械刮刷法组分离的细胞成活率及纯度均高于胰酶消化+机械刮刷法组(94.3%vs85.7%,92.5%vs83.0%,P<0.05);无血清培养的成活率及纯度均高于有血清培养(90.7%vs82.1%,95.5%vs83.0%,P<0.01);培养的细胞角蛋白AE1/AE3染色阳性。结论蛋白酶ⅩⅣ消化+机械刮刷法分离肺叶或肺段支气管上皮细胞,并用含营养因子的DMEM/F12无血清培养是一种简单有效的人原代气道上皮细胞培养方法。