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用包涵体复性的方法制备重组人白细胞介素-1受体拮抗剂 被引量:1
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作者 李树刚 邓小燕 +4 位作者 赵洪 黄秀东 于廷和 陈勇 但国平 《生物医学工程学杂志》 EI CAS CSCD 北大核心 2007年第5期1128-1132,共5页
通过大肠杆菌将IL-1ra表达成包涵体,将包涵体用8M尿素溶解后,稀释4倍后直接用离子交换柱层析进行复性和纯化,复性后得到的IL-1ra纯度大于95%,生物活性大于1×105IU/mg,内毒素含量也比较低。Western-Blotting印迹也表明重组蛋白具有I... 通过大肠杆菌将IL-1ra表达成包涵体,将包涵体用8M尿素溶解后,稀释4倍后直接用离子交换柱层析进行复性和纯化,复性后得到的IL-1ra纯度大于95%,生物活性大于1×105IU/mg,内毒素含量也比较低。Western-Blotting印迹也表明重组蛋白具有IL-1ra的抗原活性。 展开更多
关键词 白细胞介素-1受体拮抗剂 复性 包涵体 层析
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重组羧肽酶G2的原核表达、纯化及活性分析 被引量:1
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作者 李树刚 王勇 +5 位作者 张伟 辛渝 但国平 柴新娟 龚会英 于廷和 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期184-189,共6页
在原核表达系统中实现羧肽酶G2(Carboxypeptidase G2,CPG2)的表达,并对CPG2进行了纯化和活性测定。通过PCR扩增得到编码CPG2的基因片段,利用基因重组技术构建原核表达质粒p ET-30a-CPG2,在Escherichia coli中进行诱导表达,菌体经超声破... 在原核表达系统中实现羧肽酶G2(Carboxypeptidase G2,CPG2)的表达,并对CPG2进行了纯化和活性测定。通过PCR扩增得到编码CPG2的基因片段,利用基因重组技术构建原核表达质粒p ET-30a-CPG2,在Escherichia coli中进行诱导表达,菌体经超声破碎后利用金属螯合亲和柱和阴离子交换层析柱对目标蛋白进行纯化。目的蛋白能够以可溶形式表达,SDS-PAGE和Western blotting检测有特异的蛋白表达条带。纯化的CPG2有降解氨甲喋吟(MTX)活性,酶活力达到400 U/mg。 展开更多
关键词 羧肽酶G2 原核表达 纯化 氨甲喋吟
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