逆转录病毒介导GM-CSF在造血祖细胞中的基因转移

为了探索GM-CSF基因治疗的可行性,采用逆转录病毒载体介导的基因转移方法将小鼠GM-CSF cDNA逆转录病毒pLXSN/GM转染病毒包装细胞PA317,然后感染富含造血干、祖细胞群体,经含G418的体外半固体造血祖细胞培养,表现出较多的G418抗性CFU-GM生成,用PCR和Southem Blot方法分别检测出转化细胞基因组中整合有Neo^R基因和GM-CSF cDNA,原位杂交显示转化细胞有较强的GM-CSF mRNA表达,在Dexter培养中,GM-CSF修饰组的成熟非粘附细胞计数明显高于对照组(P<0.05).上述结果表明GM-CSF重组逆转录病毒成功地转入造血祖细胞并获得了表达,为下一步体内基因治疗奠定基础.

小鼠IL－3 cDNA转化细胞移植体内表达的初步研究

随着基因治疗技术的发展和多个细胞因子基因的克隆，人们提出了供细胞因子的基因治疗的设想，以期为肿瘤、老年性痴呆、严重的造血功能障碍等这样一类难治疾病的治疗另辟蹊径。为改善放射损伤小鼠受抑制的造血功能，我们采用基因治疗的方法，将小鼠ＩＬ－３基因ｃＤＮＡ与逆转录病毒载体重组，转染包装细胞ＰＡ３１７，用其分泌的含ＩＬ－３ｃＤＮＡ的复制缺陷逆转录病毒感染、转化ＮＩＨ３Ｔ３细胞，从中筛选可在体外分泌ＩＬ－３的克隆，将可分泌ＩＬ－３的细胞种植到放射损伤小鼠体内后发现：受体小鼠血清中检出了ＩＬ－３的活性；其外周血白细胞计数升至５５万／ｍｍ３，以成熟中性粒细胞为主；肝、脾脏内有大量各个分化阶段的中性粒细胞。这些结果表明：可以利用基因治疗技术，在体内表达ＩＬ－３，改善机体的造血功能。

白细胞介素－11基因治疗促进放射损伤小鼠造血恢复的实验研究

白细胞介素－１１（Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－１１，ＩＬ－１１）是一种新的造血生长因子，体内、外实验结果显示ＩＬ－１１具有显著的造血促进作用，它能作用于早期的造血干细胞及祖细胞，促进其增殖和分化。为了探讨ＩＬ－１１基因治疗放射损伤后造血恢复的促进作用，我们构建了含人ＩＬ－１１ｃＤＮＡ的逆转录病毒载体，并转染小鼠成纤维细胞系ＮＩＨ－３Ｔ３，经筛选获得３株高表达ＩＬ－１１的转染细胞亚克隆，用高表达ＩＬ－１１的转染细胞作为载体细胞，进行了ＩＬ－１１基因治疗对放射损伤小鼠造血系统影响的实验研究。结果表明ＩＬ－１１基因治疗能明显缩短亚致死量放射损伤小鼠白细胞降低的时间，促进外周血白细胞、血小板和红细胞压积的恢复。提示ＩＬ－１１基因治疗对放射损伤造成的造血功能低下具有潜在的应用价值。