幽门螺杆菌抗原特异性 CD4＋T 细胞体外扩增及其在 Th 表位筛选中的初步应用

目的：建立幽门螺杆菌（ Helicobacter pylori，H．pylori）抗原特异性CD4＋T细胞体外扩增方法，并在Th表位筛选中初步应用。方法从H．pylori感染阳性患者中分离外周血单个核细胞（PBMC），以重组黏附素抗原（HpaA）进行体外刺激，分别摸索不同血清培养基、抗原刺激浓度、培养时间等体外扩增条件，并通过细胞内因子染色和流式细胞技术检测HpaA特异性CD4＋T细胞产生IFN-γ应答水平，从而建立H．pylori感染者抗原特异性CD4＋T淋巴细胞的体外扩增方法。同时，结合合成重叠肽技术，对抗原HpaA中可能的Th表位进行初步筛查。结果在含人AB血清的1640培养基中培养的抗原特异性CD4＋T细胞的扩增效率优于含胎牛血清的1640培养基； HpaA抗原初刺激浓度为0．2μmol/L时，抗原特异性CD4＋T细胞的比例最高；在抗原刺激浓度0．2μmol/L条件下，细胞培养9 d时出现特异性CD4＋T细胞应答，且在第15天时达到高峰值；以不同肽段对特异性CD4＋T细胞的IFN-γ应答水平检测分析中显示：针对本研究H．pylori感染个体，HpaA抗原中可能存在一个优势应答的Th细胞表位（HpaA220-237）。结论在人AB血清的1640培养基，0．2μmol/L为抗原刺激浓度，连续15 d扩增等培养条件下，在体外成功扩增出H．pylori抗原特异性CD4＋T淋巴细胞，可用于H．pylori抗原中Th表位的筛选和鉴定，为表位疫苗研究奠定实验基础。