副猪嗜血杆菌OmpP2基因分子特征及重组乳酸菌的构建与鉴定

猪格拉瑟病是由副猪嗜血杆菌引起的猪的主要细菌性传染病。构建安全、有效的新型疫苗是防控该病的研究热点。本研究对OmpP2基因编码的蛋白质进行生物信息学预测分析后,应用无缝克隆技术把PCR扩增获得的OmpP2基因连接到pNZ8148载体,构建出pNZ8148-OmpP2重组载体,转入乳酸乳球菌感受态细胞,获得pNZ8148-OmpP2重组乳酸乳球菌;再进行蛋白表达与鉴定。结果表明:生物信息学预测到OmpP2蛋白具备优势B细胞和T细胞表位,是具有潜力的候选抗原;经重组乳酸乳球菌蛋白表达与鉴定,检测到大小约为38.5kD的目的条带,与预期大小相符。说明乳酸乳球菌能作为递送载体成功表达G.parasuis异源蛋白。本实验为后续G.parasuis乳酸菌活载体疫苗的研制奠定了基础。

伯氏疟原虫ANKA株感染小鼠的T细胞、NK细胞及细胞因子变化

旨在系统分析伯氏疟原虫感染引起宿主T细胞、NK细胞、Tim-3表达及细胞因子的变化。选取64只雌性C57BL/6小鼠随机分为8组,每组8只,分别于感染后0、4、7、9、11、13、16和19 d获取小鼠脾及外周血免疫细胞,利用流式细胞术检测小鼠主要免疫细胞亚群及免疫检查点分子Tim-3表达水平的变化;同时检测血清中细胞因子的变化。结果表明,感染疟原虫后,小鼠脾CD3^(+)CD4^(+) T细胞、CD3^(+)CD8^(+) T细胞及NK细胞的比例均逐渐降低(P<0.01),且伴随着3种细胞Tim-3表达量的升高(P<0.01)。小鼠外周血CD3^(+)CD4^(+) T细胞的比例呈先降低后升高趋势,CD3^(+)CD8^(+) T细胞的比例呈先升高后降低趋势(P<0.05);小鼠外周血CD3^(-)NK1.1^(+)细胞的比例呈先降低后升高趋势,但感染末期,其比例仍低于未感染组(P<0.05)。Tim-3分子在外周血CD3^(+)CD4^(+) T细胞、CD3^(+)CD8^(+) T细胞及CD3^(-)NK1.1^(+)细胞的表达均显著升高(P<0.05)。感染疟原虫后,小鼠血清中促炎细胞因子IL-2的分泌量均显著高于未感染组(P<0.05);促炎细胞因子IFN-γ、TNF-α和IL-6在血清中分泌均呈先升高后降低趋势(P<0.05);具有免疫抑制作用的细胞因子IL-10呈逐渐升高趋势,且感染后期急剧升高(P<0.001)。以上结果表明,感染疟原虫后,小鼠的特异性免疫反应发挥了一定的杀伤作用,但由于Tim-3免疫检查点分子及一些发挥免疫抑制作用的细胞因子(IL-10)的过度表达,有利于疟原虫逃避宿主的免疫捕杀作用。该研究提示了从宿主免疫抑制角度研究疟原虫感染的重要性。