sag5b:一种用于鉴别弓形虫虫株毒力的新基因(英文)

目的本文作者比较了强毒株(RH)弓形虫与弱毒株(Prugniaud)基因组中一种可能成为基因标志物的基因片断——sag5b的差异。PCR扩增出的sag5b片断依次亚克隆进入T-easy载体以及pET28a表达载体。融合基因经过IPTG诱导表达出目的蛋白,并通过SDS-PAGE和Western blotting鉴定正确。证明表达出来的重组蛋白与强毒株弓形虫细胞膜上的天然蛋白有相同的免疫反应性。将感染了Prugniaud的小鼠脑组织取出并匀浆,以该脑组织为模板,分别用sag1和sag5b的引物来引发,结果发现sag1可以扩增出来而sag5b的扩增结果是阴性的。该结果提示sag5b可以作为鉴别弓形虫虫株毒力的基因标志。将该毒力相关基因的表达产物免疫小鼠并没有使小鼠获得明显的可以抵抗强毒株攻击的免疫保护性。

维生素D受体基因启动子区CDX2多态性与儿童氟斑牙的关系

目的了解维生素D受体(VDR)基因启动子区CDX2结合位点多态性与儿童氟斑牙易感性的关系。方法Dean法检查8～12岁凤台县关店乡儿童氟斑牙患病情况,收集氟斑牙患者102例及正常对照者107例,采集外周静脉血提取DNA,采用等位基因特异多重聚合酶链反应(ASM-PCR)测定两组儿童VDR基因CDX2结合位点多态性。结果VDR基因CDX2结合位点多态性分布频率为:氟斑牙患者GG占48.0%、AG占25.5%、AA占26.5%;正常对照组GG占55.1%、AG占28.0%、AA占16.9%。两组基因型分布比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论VDR基因CDX2结合位点多态性与所调查儿童的氟斑牙发生无明显关系。

基于IgY的ELISA用于日本血吸虫病循环抗原的检测

目的以鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)替代哺乳动物来源的IgG抗体,建立双抗体夹心ELISA用于日本血吸虫病的诊断。方法制备并纯化抗日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)的卵黄抗体IgY和抗SEA的兔多克隆IgG抗体;以抗SEA的IgG为捕获抗体,IgY为检测抗体的双抗体夹心ELISA诊断方法,共检测血清443份,其中急性血吸虫病患者血清68例,慢性血吸虫病患者180例,正常人100例,肺吸虫感染者20例,华支睾吸虫感染者48例和钩虫感染者血清27例。探讨基于IgY的循环抗原检测的应用价值。结果成功制备并鉴定了特异性IgY和IgG抗体,建立了双抗体夹心ELISA检测体系;检测急性血吸虫病患者和慢性血吸虫病患者血清的阳性率分别为79.4%和64.4%,最低灵敏度为9.3μg/L;正常人血清的阴性率为92%;与肺吸虫、华支睾吸虫、钩虫感染者血清的交叉反应分别为20%、20.8%、14.8%。结论建立了基于IgY的双抗夹心ELISA检测体系,用于日本血吸虫SEA的检测具有一定特异性和较高的敏感性,可试用于日本血吸虫病的辅助诊断。

双向电泳联合免疫印迹技术分析日本血吸虫成虫可溶性抗原

目的建立及优化日本血吸虫成虫的蛋白质组学分析方法,寻找可溶性蛋白组分中与免疫应答相关的特异性成虫抗原。方法纯化日本血吸虫成虫可溶性蛋白,应用双向电泳(2D-E)结合免疫印迹技术(Western blotting),获得相应的电泳图谱和免疫印迹图谱,应用PDQuest8.0双向电泳图像分析软件对图像进行分析比对,鉴别特异性抗原。结果血吸虫成虫可溶性蛋白经双向电泳后,考马斯亮蓝G250染色,电泳图谱显示约152个主要蛋白斑点。分子量(Mr)分布约为14～114kD;等电点(pI)主要集中在4.9～9.5。进一步的Western blotting鉴定结果显示:实验组图像可见的抗原抗体反应点数目约57个,对照组为0。结论双向电泳联合免疫印迹技术是成功分析蛋白质组学的技术关键,该技术为寻找日本血吸虫特异性抗原开辟了新途径。

LPS对体外培养大鼠肺微血管内皮细胞ACE2表达的影响

目的观察脂多糖(LPS)对体外培养的大鼠肺微血管内皮细胞(PMVEC)血管紧张素转化酶2(ACE2)表达的影响。方法体外培养大鼠PMVEC,分别使用浓度为10-4、10-3、10-2、10-1mg/ml的LPS与之孵育24 h,观察量效关系;以浓度为10-2mg/ml的LPS与之分别孵育3、6、12和24h,观察时效关系,采用RT-PCR、Western blot方法检测ACE2表达的变化。结果与正常对照组相比,各浓度LPS刺激组ACE2表达均显著降低(P<0.05);除6 h时相点,LPS(10-2mg/ml)刺激组于不同时相点ACE2表达均显著降低(P<0.05);ACE2表达与LPS刺激的浓度呈负相关。结论LPS能使体外培养的大鼠PMVEC表达ACE2减少,并与LPS刺激的浓度间呈负相关;除6 h时相点,予10-2mg/ml浓度LPS刺激大鼠PMVEC,ACE2表达于3、12和24 h均显著降低。ACE2表达下降可能与急性肺损伤(ALI)中PMVEC损伤的发生、发展有关。

血吸虫病免疫诊断抗原研究进展

血吸虫病仍然是我国重要的公共卫生问题之一,诊断抗原一直是血吸虫病诊断研究热点。随着分子生物学技术的发展,血吸虫病的诊断抗原已由最初的粗抗原发展成为组分抗原及由基因重组的方法生产合成的重组抗原。本文综述了近年来血吸虫免疫诊断抗原的研究进展,并分析了诊断抗原存在的问题及将来的发展趋势。

ACE2及Ang 1-7对大鼠LPS性ALI的影响及机制

目的研究血管紧张素转化酶2(ACE2)及血管紧张素1-7(Ang1-7)对大鼠脂多糖(LPS)性急性肺损伤(ALI)的影响及其机制。方法体外培养大鼠肺微血管内皮细胞(PMVEC),分别予血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)或LPS刺激大鼠PMVEC单层,并予ACE2抑制剂或Ang1-7受体激动剂预干预,用滤器法检测大鼠PMVEC单层通透系数(Kf)的变化;予LPS建立大鼠ALI模型,分别予ACE2抑制剂、ACE2抑制剂+Ang1-7受体拮抗剂、Ang1-7受体激动剂干预,观测肺组织湿/干重比(W/D)及病理变化。结果 LPS、AngⅡ均增加大鼠PMVEC单层Kf(P<0.01),ACE2抑制剂加剧AngⅡ所致大鼠PMVEC单层Kf增高(P<0.01),Ang1-7受体激动剂则抑制单层Kf增高(P<0.01);在LPS诱导的大鼠ALI体内,ACE2抑制剂和/或Ang1-7受体拮抗剂均加剧LPS所致肺组织W/D增高(P<0.01)和ALI病理改变,Ang1-7受体激动剂则抑制LPS诱导的W/D增高(P<0.01)并改善其病理改变。结论 Ang1-7对LPS致大鼠ALI有直接及间接的保护作用;ACE2可通过促进Ang1-7的生成对大鼠LPS性ALI发挥保护作用。

MCP-1真核表达载体的构建和鉴定

目的构建大鼠MCP-1真核表达载体pcDNA3.1(+)-MCP-1。方法据Genebank中大鼠MCP-1cDNA序列设计并合成特异性引物,提取糖尿病模型大鼠肾脏总RNA,利用PCR技术扩增出MCP-1全编码区基因片段,并将扩增产物TA克隆至pMD-18T载体,然后分别双酶切pMD-18T-MCP-1回收目的片段再克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+)中。结果PCR扩增得到大鼠成熟MCP-1的cDNA片段大小为500 bp,重组子利用限制性内切酶进行酶切、PCR鉴定和DNA序列分析得到真核表达载体pCDA3.1(+)-MCP-1。结论成功构建了大鼠MCP-1真核表达载体,为进一步研究MCP-1的DNA疫苗奠定基础提供了条件。

卵黄抗体IgY用于诊断和治疗的研究进展

鸡卵黄免疫球蛋白（eggyolk immunoglobulin）又称IgY或卵黄抗体，是用特异性抗原注射未经免疫的产蛋母鸡后．母鸡血液中的抗体转移到蛋黄中，成为蛋黄中唯一存在的抗体。近年来卵黄抗体逐渐引起人们的注意，而且得到越来越广泛的应用．主要与其生物学的优势及其制备简单，保存方便等优点有关。

脓毒症患者血清VEGF-A与sFLT-1水平变化的临床意义

目的观察脓毒症患者血清中VEGF-A、sFLT-1水平变化,以及VEGF-A活性指数(VEGF-A/sFLT-1)变化,探讨其对脓毒症患者的病情评估和预后的预测价值。方法研究对象脓毒症组为2010年1月-2011年6月期间入住安徽医科大学第一附属医院急诊医学科符合脓毒症诊断标准的59例患者,根据28 d存活情况分为脓毒症存活和死亡组;对照组为20例健康者。采用酶联免疫吸附法测定脓毒症患者和对照组血清中VEGF-A及sFLT-1水平,计算VEGF-A活性指数,分别进行三者与APACHEⅡ评分、脓毒症预后的相关性分析。结果脓毒症组血清VEGF-A、sFLT-1水平均明显高于对照组(P<0.05);脓毒症死亡组血清VEGF-A、sFLT-1水平及VEGF-A活性指数均明显高于存活组(P<0.05);脓毒症组血清VEGF-A、sFLT-1水平及VEGF-A活性指数与APACHEⅡ评分均呈正相关性(r=0.754,P=0;r=0.655,P=0;r=0.497,P=0);使用ROC曲线分析血清VEGF-A、sFLT-1浓度和VEGF-A活性指数对脓毒症发生的预测价值,其曲线下面积分别为76.3%、76.4%和58.1%;评估血清VEGF-A、sFLT-1浓度和VEGF-A活性指数对脓毒症预后的预测价值,其ROC曲线下面积分别为91.2%、86.2%和85.5%。结论脓毒症组血清VEGF-A、sFLT-1水平及VEGF-A活性指数均明显升高,且与病情严重程度以及不良预后呈正相关;血清VEGF-A、sFLT-1水平及VEGF-A活性指数对临床预测脓毒症发生及预后有一定价值。

维生素D受体基因多态性与汉族儿童氟斑牙易感性的关系研究

目的 观察维生素D受体（VDR）基因多态性在汉族儿童中的分布情况,探讨VDR基因多态性与汉族儿童氟斑牙易感性的关系.方法 2008年10月至2009年3月,Dean法检查安徽省凤台县关店乡8～12岁儿童氟斑牙患病情况,选择氟斑牙儿童101例及对照儿童102例,采集外周静脉血提取DNA,采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）方法测定两组儿童VDR Apa I、Bsm I、Fok I和Taq I的基因型,观察汉族儿童VDR各基因型分布情况,并分析两组间基因型分布的差异.结果 汉族儿童中存在VDR基因多态性.且基因型的分布以Aa、bb、Ff、TT居多,分别占51.7%（105/203）、89.7%（182/203）、52.7%（107/203）、93.1%（189/203）;aa、Bb、FF、Tt次之,分别占39.9%（81/203）、7.9%（16/203）、31.5%（64/203）、6.9%（14/203）;AA、BB、ff、tt最少,分别占8.4%（17/203）、2.4%（5/203）、15.8%（32/203）、0（0/203）.VDR Apa I基因型分布频率为：氟斑牙患者AA占7.9%（8/101）,Aa占55.4%（56/101）,aa占36.7%（37/101）;对照组AA占8.8%（9/102）,Aa占48.0%（49/102）,aa占43.3%（44/102）;两组基因型分布比较,差异无统计学意义（χ^2=1.13,P〉0.05）.VDR Bsm I基因型分布频率为：氟斑牙患者BB占3.0%（3/101）,Bb占5.9%（6/101）,bb占91.1%（92/101）;对照组BB占2.0%（2/102）,Bb占9.8%（10/102）,bb占88.2%（90/102）;两组基因型分布比较,差异无统计学意义（χ^2=0.55,P〉0.05）.VDR Fok I基因型分布频率为：氟斑牙患者FF占28.7%（29/101）,Ff占56.4%（57/101）,ff占14.9%（15/101）;对照组FF占34.3%（35/102）,Ff占49.0%（50/102）,ff占16.7%（17/102）;两组基因型分布比较,差异无统计学意义（χ^21.14,P〉0.05）.VDR Taq I基因型分布频率为：氟斑牙患者TT占93.1%（94/101）,Tt占6.9%（7/101）;对照组Tr占93.1%（95/102）,Tt占6.9%（7/102）;未发现tt型;两组基因型分布比较,差异无统计学意义（χ^20.00,P〉0.05）.结论 汉族儿童中存在VDR基因多态性,但VDR Apa I、Bsm I、Fok I和Taq I 4个酶切位点的多态性与所调查儿童氟斑牙发生无明显关系.

脂多糖性急性肺损伤血管紧张素转换酶2表达变化及血管紧张素I受体拮抗剂的干预作用

血管紧张素转换酶2（angiotensin convening enzyme2，ACE2）于2000年被发现，是人体内近半个世纪发现的第一个ACE同源化合物，它是仅含有一个催化位点的羧肽酶，对血管紧张素Ⅱ（angiotensinⅡ，AngⅡ）的催化作用与ACE相反。研究发现，酸吸入和脓毒症诱导大鼠急性肺损伤（acute lung injury，Au）模型中，ACE2对肺组织有显著保护作用；而肾素-血管紧张素系统中其他成员如ACE和AngⅡ却促进Au的发生、发展。本实验通过观察脂多糖对ALI大鼠肺组织局部ACE2表达的影响，

脂多糖诱导肺微血管内皮细胞SSeCKS mRNA表达的研究

目的研究脂多糖（LPS）对体外培养大鼠肺微血管内皮细胞（PMVEC）中Src抑制的蛋白激酶C底物（SSeCKS）mRNA表达的影响，以及甲泼尼龙对其的干预作用。方法体外培养大鼠PMVEC，根据与LPS孵育时间和LPS剂量不同随机分组，并用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测PMVEC中SSeCKS mRNA的表达变化。结果正常情况下，PMVEC中SSeCKS mRNA低表达。LPS在体外可诱导SSeCKS mRNA的表达明显增高，表达水平变化与LPS呈剂量和时间依赖关系：LPS孵育1h后，PMVEC中SSeCKS mRNA的表达量随LPS剂量增加而逐渐增高（正常对照组为0．263±0．033；LPS0．1mg／L时为0．529±0．066，1mg／L时为1．391±0．048，10mg／L时为2．339±0．055，100mg／L时为2．861±0．069），组间比较差异有统计学意义（F=639．096，P〈0．05）；10mg／L的LPS与PMVEC共用孵育，0．5hSSeCKS mRNA表达开始增高，1h时达峰值，之后逐渐降低，12h表达仍高于正常水平（正常对照组为0．301±0．022；LPS0．5h为1．617±0．018，1h为2．378±0．031，3h为2．148±0．056，6h为1．322±0．042，12h为0．772±0．044），组间比较差异有统计学意义（F=726．346，P〈0．05）。甲泼尼龙干预后可显著抑制LPS诱导的SSeCKS mRNA表达增高（2．664±0．104比1．759±0．151，F=156．000，P〈0．05）。结论①LPS可诱导大鼠PMVEC中SSeCKS mRNA表达上调，并呈剂量和时间的依赖关系，提示SSeCKS与LPS诱导的大鼠PMVEC损伤有关。②甲泼尼龙参与可抑制LPS诱导的SSeCKS mRNA表达增高。