木犀草素通过ROS/TXNIP轴减轻脓毒症小鼠急性肺损伤的机制

目的基于活性氧簇(ROS)/硫氧还蛋白结合蛋白(TXNIP)通路探讨木犀草素减轻脓毒症小鼠急性肺损伤的机制。方法取雄性C57BL/6小鼠,使用盲肠结扎穿刺术诱导建立模型,按随机数字表法分为模型组、木犀草素组(80 mg/kg,灌胃)、TXNIP过表达(ad-TXNIP)组、TXNIP过表达阴性对照(ad-NC)组、木犀草素+ad-TXNIP组,每组20只,另取20只为假手术组。观察小鼠一般行为,检测肺泡灌洗液中炎症细胞数量;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测炎症因子白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平、肺组织氧化应激产物丙二醛(MDA)水平;取肺组织,苏木素-伊红(HE)染色观察组织病理损伤;DCFH-DA荧光探针法测ROS含量;免疫组化法测TXNIP阳性表达水平;Western印迹测ROS/TXNIP通路相关蛋白NOD样受体家族蛋白(NLRP)3、IL-6、TNF-α、超氧化物歧化酶(SOD)2、过氧化氢酶(CAT)、硫氧还蛋白(TRX)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)-1水平。结果与假手术组相比,模型组死亡及呼吸困难现象明显增加,肺泡灌洗液炎症细胞数目及肺组织炎症损伤评分明显升高,ROS/TXNIP活化及其介导的炎症及氧化应激反应明显加重(P<0.05)。与模型组相比,木犀草素组无死亡,肺泡灌洗液炎症细胞数目及肺组织炎症损伤评分明显降低,ROS/TXNIP活化及其介导的炎症及氧化应激反应明显减弱(P<0.05)。过表达TXNIP可明显逆转木犀草素的上述作用(P<0.05)。结论木犀草素可能通过抑制ROS/TXNIP轴活化,来改善脓毒症急性肺损伤小鼠肺组织炎症及氧化应激损伤。

基于NLRP3/IL-1β/TGF-β1通路探讨萝卜硫素对脂多糖诱导的小鼠肺炎的改善作用

目的探讨萝卜硫素对脂多糖(LPS)诱导的小鼠肺炎的改善作用及核苷酸结合域样受体蛋白(NLRP)3/白细胞介素(IL)-1β/转化生长因子(TGF)-β1信号通路的影响。方法ICR小鼠随机分为对照组、模型组、萝卜硫素组(腹腔注射20 mg/kg的萝卜硫素)、抑制剂组(腹腔注射50 mg/kg的NLRP3通路抑制剂)、萝卜硫素+激活剂组(腹腔注射20 mg/kg萝卜硫素、1.5 mg/kg的NLRP3通路激活剂),每组10只,除对照组滴入相同体积的生理盐水,其余各组均滴鼻LPS(2 mg/kg)构建肺炎模型,造模成功后24 h开始药物干预,对照组、模型组腹腔注射等量生理盐水,每天干预1次,连续干预1 w。血气分析仪测定各组动脉血氧分压(PaO_(2))、二氧化碳分压(PaCO_(2))值,酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒检测血清、肺泡灌洗液中炎症因子水平,计数肺泡灌洗液中炎症细胞数量,计算肺湿/干比,苏木素-伊红(HE)染色检测各组肺组织病理变化,以Western印迹检测肺组织中NLRP3/IL-1β/TGF-β1通路蛋白的表达。结果与对照组相比,模型组肺组织受损严重,PaO_(2)值显著降低,PaCO_(2)、肺湿/干值、血清及肺泡灌洗液中炎症因子水平、炎症细胞数量、肺组织中NLRP3/IL-1β/TGF-β1通路相关蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与模型组相比,萝卜硫素组、抑制剂组肺组织损伤得到缓解,PaO_(2)值显著升高,PaCO_(2)、肺湿/干值、血清及肺泡灌洗液中炎症因子水平、炎症细胞数量、肺组织中NLRP3/IL-1β/TGF-β1通路相关蛋白表达水平显著降低(P<0.05);与萝卜硫素组相比,萝卜硫素+激活剂组肺组织损伤加重,PaO_(2)值显著降低,PaCO_(2)、肺湿/干值、血清及肺泡灌洗液中炎症因子水平、炎症细胞数量、肺组织中NLRP3/IL-1β/TGF-β1通路相关蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。结论萝卜硫素对LPS诱导的小鼠肺炎具有一定的改善作用,可能是通过抑制NLRP3/IL-1β/TGF-β1信号通路实现的。

人参皂苷诱导骨髓间充质干细胞对急性肝功能衰竭大鼠肝组织再生及Wnt/β-catenin信号表达的影响

目的:分析人参皂苷诱导骨髓间充质干细胞(BMSC)对急性肝功能衰竭(ALF)大鼠肝组织再生及Wnt/β-catenin信号表达的影响。方法:选取SPF级Wistar雄性大鼠66只,其中1只行BMSCs培养,随机选取50只大鼠制备ALF模型,24h后随机选取其中5只断颈处死,依据大鼠肝功能与组织病理学判别其是否成功造模。剩余15只大鼠将等剂量0.9%氯化钠溶液腹腔注入,作为正常组。成功造模的45只大鼠随机分成3组,分别为BMSCs组、模型组及人参皂苷诱导BMSCs组,每组各15只。造模后6h,模型组和正常组大鼠由尾静脉注入1mL细胞培养液,BMSCs组注入1mLBMSCs悬液(细胞浓度2.0×109/L),人参皂苷诱导BMSCs组注入1mL人参皂苷诱导分化BMSCs悬液(细胞浓度2.0×109/L),连续给药10d。观察大鼠肝脏组织病理状况,血清总胆红素(TBil)、AST、ALT、TNF-α、IL-6含量,肝组织内Wnt7b、Wnt7a及Wnt2基因表达。结果:正常组大鼠肝细胞无坏死、变性,整齐排列,肝小叶结构清晰,汇管区内没有炎性细胞浸润;模型组大鼠肝细胞表征为广泛坏死,肝小叶内全部肝细胞溶解坏死,网状的支架发生塌陷,汇管区和周边存在大量粒细胞、单核细胞与淋巴细胞的浸润,残余肝细胞变性、肿胀且伴随胆汁淤积;BMSCs组及人参皂苷诱导BMSCs组大鼠肝小叶结构趋向完整,肝细胞坏死、变性数量减少,汇管区内有少许炎性细胞浸润,人参皂苷诱导BMSCs组又优于BMSCs组。和正常组相比,模型组大鼠血清TBil、AST、ALT、IL-6及TNF-α含量上升;和模型组相比,BMSCs组、人参皂苷诱导BMSCs组大鼠血清TBil、AST、ALT、IL-6及TNF-α含量降低;和BMSCs组相比,人参皂苷诱导BMSCs组大鼠血清TBil、AST、ALT、IL-6及TNF-α含量降低,差异有统计学意义(P<0.05)。和正常组相比,模型组大鼠肝组织内Wnt7b、Wnt7a、Wnt2mRNA相对表达量降低;和模型组相比,BMSCs组、人参皂苷诱导BMSCs组大鼠肝组织内Wnt7b、Wnt7a、Wnt2mRNA相对表达量升高;和BMSCs组相比,人参皂苷诱导BMSCs组大鼠肝组织内Wnt7b、Wnt7a、Wnt2mRNA相对表达量升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:人参皂苷诱导BMSCs可显著改善ALF大鼠肝功能,其作用机制可能为激活Wnt/β-catenin信号通路加速肝脏再生。