慢病毒介导神经生长因子过表达诱导脐带间充质干细胞向神经元样分化

目的探讨神经生长因子(NGF)过表达慢病毒转染脐带间充质干细胞(UMSCs)对细胞分化的影响。方法分离培养UMSCs,流式细胞术鉴定后利用慢病毒载体感染细胞,使其过表达NGF,72h后,通过免疫荧光检测NGF和GFP的表达,Western blot检测NGF蛋白表达水平,ELISA法检测细胞上清液NGF的含量,qRT-PCR检测相关神经因子基因的表达。结果流式细胞术显示细胞表面CD105、CD90、CD73阳性而CD34、CD45、CD19和CD14阴性,鉴定为脐带间充质干细胞。慢病毒转染后细胞NGF和GFP阳性,细胞内NGF和培养液中b-NGF含量都显著性增加,NGF、nestin、GFAP、MAP2及tubulin等mRNA的表达显著性增加。结论神经生长因子过表达慢病毒转染脐带间充质干细胞会促使细胞向神经元样细胞分化,可应用于后续研究。

脐带间充质干细胞移植对脊髓损伤小鼠运动功能的修复和镇痛作用

目的:探讨人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)移植缓解脊髓损伤神经病理性痛,并促进功能恢复的效果及其与脊髓损伤小鼠胶质细胞活化及炎症因子水平的调控关系。方法:建立ICR小鼠脊髓损伤模型,同时构建慢病毒载体介导绿色荧光蛋白(GFP)标记体外培养的hUC-MSCs;将模型小鼠分为模型组和治疗组,治疗组于脊髓损伤1周后采用局部注射hUC-MSCs移植到脊髓中,每周进行运动功能(BBB)评分及机械性痛觉过敏检测,持续8周后行组织学评价与炎症因子检测。结果:治疗组脊髓组织中GFP荧光有表达。BBB检测结果显示,治疗组和模型组小鼠随时间延长运动功能均逐渐恢复,其中治疗组运动功能恢复速度要显著快于模型组;机械触诱发痛检测显示,小鼠脊髓损伤后痛阈值降低,随着时间延长痛阈值逐渐升高。同一个时间点治疗组的痛阈值显著高于模型组。与模型组相比,治疗组小鼠脊髓组织的白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达下降,胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)表达升高,同时脊髓组织巨噬细胞激活抗原1(ED1/CD68)荧光表达显著降低。结论:脊髓损伤小鼠中hUC-MSCs移植可能通过降低炎症因子IL-6和TNF-α的分泌,提高GDNF的表达水平来促进受损脊髓组织的修复,并发挥镇痛效应。

脐带间充质干细胞移植对大鼠脊髓损伤区域神经损伤的修复效果分析

目的:探究脐带间充质干细胞(UMSCs)移植对大鼠脊髓损伤区域神经损伤的修复效果。方法:选择70只大鼠,雄性,体重220~260 g,采用随机数字法分为研究组和对照组,各35只。两组大鼠均采用脊髓半切建模。建模1周后研究组行UMSCs移植,对照组给予等量不含干细胞0.9%氯化钠溶液注射。移植24 h及1、2、4周后,比较两组Tarlov评分。移植2周后,观察两组的组织学情况,比较两组血清白细胞介素-1(IL-1)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。结果:移植24 h后两组Tarlov评分均较低,差异无统计学意义(P>0.05),移植1、2、4周后研究组Tarlov评分均明显高于对照组(P<0.05)。移植2周后,对照组大鼠脊髓组织学检查发现,脊髓空洞面积大,神经纤维相对稀疏,存在不同程度的炎性细胞浸润且星型胶质细胞明显聚集增生;研究组炎性细胞浸润且星型胶质细胞与对照组比较明显降低,且有神经纤维通过大鼠脊髓损伤区域。研究组移植2周后两组IL-1比较,差异无统计学意义(P>0.05),研究组IL-6和TNF-α水平均明显低于对照组(P<0.05)。结论:采用UMSCs在一定程度上可以减轻大鼠损伤脊髓部位的炎性细胞浸润、抑制胶质细胞形成瘢痕组织,对于改善大鼠神经损伤后功能的恢复有着重要意义。